臨床檢驗技術操作手冊

第一節(jié)臨床血液學檢查血常規(guī)檢查【標本】抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）?！痉椒ā垦杭毎詣臃治鰞x測定法?！驹噭垦杭毎詣臃治鰞x配套試劑?！静僮鳌吭斠娮约簩嶒炇已杭毎詣臃治鰞x使用手冊?！靖阶ⅰ?.血常規(guī)涉及白細胞計數(shù)及分類、紅細胞計數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞比積、血小板計數(shù)等項目。這些項目亦有對應的手工辦法，詳見有關資料。2.半自動及全自動血液細胞分析儀從設計上均規(guī)定用抗凝靜脈血。其優(yōu)點為：（1）靜脈血能對的地反映病人實際狀況，重復性好；（2）利于延長儀器的使用壽命；（3）解決了采血盤的交叉感染問題等。3.血細胞計數(shù)應用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。4.貯血容器應選用有蓋塑料管?？鼓杉笤谑覝刂匈A存應不超出6h；如需制作血涂片應在2h內(nèi)完畢。5.測定前必須將EDTA·K2抗凝血充足混勻。6.血細胞分析儀測定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于7.血細胞分析儀用于白細胞分類只能當作一種過篩手段，當白細胞、紅細胞、血紅蛋白和血小板的任何一項有明顯升高或減少；白細胞分類出現(xiàn)異常成果（中間細胞群百分率≥8.0%）；紅細胞、白細胞和血小板的任何一種直方圖出現(xiàn)異常圖形等狀況，須用顯微鏡檢查及分類。嗜酸性粒細胞直接計數(shù)【標本】末梢血或抗凝靜脈血?！痉椒ā恐苯佑嫈?shù)法。【試劑】1.Hinkelmann液；2.乙醇-伊紅稀釋液；3.伊紅-丙酮稀釋液?！静僮鳌?．小試管中加稀釋液0.38ml。2．常法取末梢血20ul，加入管內(nèi)混勻，待紅細胞溶解后兩側(cè)充池。3．靜置3～5min，用低倍鏡（必要時用高倍鏡）鏡下計數(shù)10個大方格內(nèi)嗜酸性粒細胞數(shù)。總數(shù)×20×106=嗜酸性粒細胞/L?！靖阶ⅰ?.血液稀釋后應于1h內(nèi)計數(shù)完畢。2.充池前要充足混勻，但又不適宜用力過猛。3.住院病人采集標本時間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。紅細胞沉降率測定【標本】抗凝靜脈血?！痉椒ā课菏戏??！驹噭?09mmol/L枸櫞酸鈉溶液?！静僮鳌?.3mm×100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號，加抗凝劑0.4ml。2.靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉(zhuǎn)混合。3.用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混勻血液至"0"刻度處，拭去管外附著的血液，將管垂直立在血沉架上。4.記時，室溫中靜置1h，觀察血漿高度，以紅細胞下沉的毫米數(shù)報告之?！靖阶ⅰ?.紅細胞在單位時間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和質(zhì)，紅細胞的大小與數(shù)量，與否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置與否垂直，室溫高低等因素都有關系。2.標本采集時應空腹。3.血液和抗凝劑的比例要精確。4.血沉管內(nèi)徑要原則（2.5mm），放置要垂直。5.做血沉的標本要在采集后3h內(nèi)測定，并充足混勻。6.室溫過低、過高和貧血時，對成果有影響。為此，血沉應盡量放在18～25℃室溫下測定。室溫過高時血沉加緊，能夠按溫度系數(shù)校正。室溫過低時血沉減慢，無法校正。網(wǎng)織紅細胞計數(shù)【標本】末梢血或抗凝靜脈血?！痉椒ā堪俜钟嫈?shù)法?！驹噭?0g/L煌焦油藍生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍ACD溶液?！静僮鳌?.于小試管中滴加1滴煌焦油藍生理鹽水溶液或煌焦油藍ACD溶液。2.加入末梢血或靜脈血2滴于上述試管中，混勻。3.靜置15～20min后，取用1滴制成薄片。4.油鏡下檢查1000個紅細胞中網(wǎng)織紅細胞數(shù)，以百分率或絕對值報告?！靖阶ⅰ?.活體染色時間不能過短，室溫低時，放37℃2.網(wǎng)織紅細胞也可用Miller窺盤計數(shù)法、熒光染色或流式細胞儀計數(shù)。

嗜堿性點彩紅細胞計數(shù)【標本】末梢血?！痉椒ā堪俜钟嫈?shù)法?！驹噭?.甲醇；2.堿性亞甲基藍染液（保存2～3周）?！静僮鳌?.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。2.用堿性亞甲基藍染液染色1～2min，水洗待干。3.用油鏡計數(shù)1000個紅細胞中嗜堿性點彩紅細胞數(shù)，以百分率報告?！靖阶ⅰ?.用堿性亞甲基藍染液染色后，紅細胞呈淺藍綠色，嗜堿性點彩呈深藍色。2.也可用瑞氏染色，嗜堿性點彩呈藍黑色。3.由于點彩紅細胞分布不勻，必要時擴大計數(shù)紅細胞數(shù)。紅斑狼瘡細胞檢查【標本】靜脈血。【方法】改良血塊法。【操作】1.抽取患者血液2～3ml，注于干燥試管內(nèi)，于室溫待凝。2.于凝固剛形成時，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘存凝塊除去。3.以r/分鐘離心沉淀10分鐘，使白細胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細胞形成。4.置37℃溫箱內(nèi)溫育2h5.取出白細胞層及其上下各少量，置紅細胞比積管中，以r/分鐘離心，沉淀10分鐘。6.吸去上層液，輕輕吸取白細胞層，制成薄片3～4張。7.以瑞氏染液染色、鏡檢?！靖阶ⅰ?.整個操作時間不能超出3h。2.注意與果餡細胞鑒別。一氧化碳血紅蛋白定性實驗【標本】末梢血?！驹噭?0g/LNaOH?！静僮鳌?.取試管2支，各加蒸餾水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人對照血3滴，混勻。此時，如患者血中有一氧化碳，則血液呈櫻桃紅色。2.每管各加50g/LNaOH1滴，輕輕混合，正常對照管呈綠褐色，如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白，則溶血液仍呈櫻桃紅色，為陽性；如與正常對照色澤一致為陰性?！靖阶ⅰ?.觀察成果須及時，否則櫻桃紅色逐步退去，不易分辨。2.本實驗敏感性較差，血液中一氧化碳含量到一定程度時才顯陽性。如患者事先已采用通氣方法，血中一氧化碳含量下降，實驗可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。（徐珍貴朱炎）第二節(jié)體液及排泄物檢查尿液檢查尿常規(guī)檢查【標本】新鮮尿液。【方法】化學試帶法?！驹噭扛餍吞柲蛞夯瘜W分析儀配套試帶?！静僮鳌吭斠娮约簩嶒炇业哪蛞夯瘜W分析儀使用手冊?！靖阶ⅰ?.尿常規(guī)檢查使用尿液化學分析儀，現(xiàn)在能進行8～10項檢測（PH、蛋白、葡萄糖、酮體、隱血、尿膽紅素、尿膽素原、亞硝酸鹽、比重、白細胞）。這些項目亦有對應的手工辦法，詳見有關資料。2.必須理解所用試帶各膜塊注意事項、藥品干擾。3.要注意尿液化學分析儀測定成果與手工法的差別，必要時用手工法復查。4.尿液化學分析儀檢測僅是一種過篩手段，當?shù)鞍?、隱血、白細胞等出現(xiàn)異常成果（如尿蛋白“＋”或以上）時，應進行鏡檢。5.尿液顏色、透明度等普通性狀異常時也應報告。

本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性檢查【標本】新鮮尿液。【方法】熱沉淀反映法?！驹噭?.200g/L2.2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9±0.1）?！静僮鳌?.先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反映，則可認為尿液標本中本－周氏蛋白陰性。2.取透明尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml，混勻后，放置56℃水浴中15分鐘。如有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入沸水中，煮沸3分鐘，觀察試管中渾濁或沉淀的變化，如渾濁變清、渾濁削弱或沉淀減少，均提示本-周氏蛋白陽性。若煮沸后，渾濁增加或沉淀增多，表明此尿液中尚有其它蛋白質(zhì)，此時應將試管從沸水中取出，立刻過濾。如濾液開始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時又透明，提示本-【附注】1.過多的本-周氏蛋白，在90℃2.煮沸過濾除去尿中白、球蛋白時，動作要快速，并需保持高溫，否則本-周氏蛋白也會濾去。肌紅蛋白定性實驗【標本】新鮮尿液。【試劑】1.10g/L鄰甲聯(lián)苯胺（о-tolidine2.過氧化氫醋酸溶液；3.硫酸銨粉末?！静僮鳌?.首先測試尿液中有無血紅素的存在，即依次加入新鮮尿液4滴，鄰甲聯(lián)苯胺溶液2滴，混和后，加入過氧化氫醋酸溶液3滴，如有藍色或藍綠色出現(xiàn)，表達尿中有Hb或/及Mb的存在。2.離心或過濾使尿液透明，吸取5ml，加入硫酸銨粉末2.8g，使之溶解混合，約為80%飽和度，靜置5分鐘，用濾紙過濾。取濾液重復測試有無血紅素存在，如仍有，表達Mb陽性。如不顯藍色，表達血紅素已被硫酸銨沉淀，為Hb陽性?！靖阶ⅰ?.標本必須新鮮，并避免激烈攪拌。2.本法為過篩實驗，在少數(shù)正常人中可出現(xiàn)假陽性。尿含鐵血黃素定性實驗【標本】新鮮尿液?！痉椒ā苛_斯（Rous）法【試劑】1．20g/L2．3%鹽酸。【操作】1.取混勻的新鮮尿液15ml，以r/min離心5min，傾去上清液。2.在沉渣中加入新鮮配制的20g/L亞鐵氰化鉀水溶液及3%鹽酸液各2ml，充足混勻，室溫靜置10min。3.再離心沉淀，取沉淀物涂片，加蓋玻片后用高倍鏡（必要時用油鏡）檢查。4.如見有分散或成堆藍色閃光顆粒（直徑1～3um）即為陽性，如在細胞內(nèi)則更為可信?！靖阶ⅰ?.全部試管、玻片、試劑均應避免鐵劑污染，以免出現(xiàn)假陽性。2.普通應做陰性對照，如亞鐵氰化鉀與鹽酸混和后即顯深藍色，表達試劑已污染高鐵，不適宜再用。

尿乳糜定性檢查【標本】新鮮尿液?！驹噭?.乙醚（AR）；2.蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液?！静僮鳌?.取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振搖后，使脂肪溶于乙醚。靜置數(shù)分鐘后，r/min離心5min。2.吸取乙醚與尿液的界面層涂片，加蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液1滴。3.鏡檢觀察與否有紅色脂肪小滴?！靖阶ⅰ?.尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙醚，有助于澄清。2.將分離的乙醚層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹Ⅲ，鏡檢證明有無脂肪小滴。

尿膽色素原定性實驗【標本】新鮮尿液?！驹噭?.對二甲氨基苯甲醛試劑；2.飽和醋酸鈉溶液；3.氯仿；4.正丁醇。【操作】1.在試管中，加入尿標本2ml及對二甲氨基苯甲醛試劑2ml，混合。2.立刻加飽和醋酸鈉溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振搖混合后，上層水溶液呈紅色者為陽性反映。3.陽性成果應用下法證明：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿膽原，應多次用氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無色為止，再觀察上層水溶液色澤。如上層水溶液為紅色時，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈紅色則證明尿中膽色素元為陽性?！靖阶ⅰ?.醋酸鈉溶液必須為飽和液。2.當尿膽色素原濃度太高時，應將尿標本稀釋25～100倍。3.尿液必須新鮮，不能久置。

尿苯丙酮酸定性實驗【標本】新鮮尿液。【方法】三氯化鐵法。【試劑】1.100g/L2.磷酸鹽沉淀劑?！静僮鳌?.尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml，混勻，靜置3min，如出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過濾或離心除去。2.濾液中加入濃鹽酸2～3滴和100g/L三氯化鐵溶液2～3滴，每加1滴立刻觀察顏色變化。以尿液顯藍綠色并持續(xù)2~4min，為陽性?！靖阶ⅰ?.尿中若含酚類藥品（如水楊酸制劑）及氯丙嗪，也可與氯化鐵結合顯色，實驗前應停用這類藥品。膽紅素也可造成假陽性。2.小兒出生后6周內(nèi)不易查出。故于出生6周后檢查為宜。3.大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿液可出現(xiàn)陽性。但約1/4～1/2病例可能會漏檢4.亦可采用2，4-二硝基苯肼法。

尿沉渣檢查【標本】新鮮尿液（最佳采集清晨中段尿）。【方法】顯微鏡檢查法。【操作】1.取刻度離心管，倒入混合后的新鮮尿液10ml，1500r/min離心5min。2.棄去上層清液，留下0.2ml沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣有形成分充足混勻。3.取尿沉渣0.02ml，滴在載玻片上，用18mm×18mm的蓋玻片覆蓋。4.鏡檢觀察，用10×10鏡頭，觀察其中有形成分的全貌及管型。用10×40鏡頭觀察鑒定細胞成分及計算數(shù)量，應觀察10個視野所見最低和最高值，統(tǒng)計成果。管型用高倍鏡鑒定，但計數(shù)數(shù)量按低倍鏡觀察20個視野，算出一種視野的平均值，統(tǒng)計成果。尿結晶和鹽類數(shù)量以每一高倍視野＋、2＋、3＋、4＋報告。【附注】1.清晨空腹第一次尿（普通狀況應采集中段尿），應在1h內(nèi)送檢。2.見到多個上皮細胞也應報告，報告方式參考白細胞。3.亦可采用染色尿沉渣鏡檢。

尿沉渣定量檢查【標本】新鮮晨尿。【方法】一小時尿沉渣計數(shù)法?！静僮鳌?.標本收集：患者先排尿棄去，精確收集3h尿液于干燥容器內(nèi)送檢（標本留取時間5:30～8:30）。2.精確測量3h尿量，充足混合。取混勻尿液10ml，置刻度離心管中，1500r/min離心5min，用吸管吸棄上層尿液9ml，留下1ml，充足混勻。吸取混勻尿液1滴，注于血細胞計數(shù)板內(nèi)。細胞共數(shù)10個大方格，管型共數(shù)20個大方格。最后計算出紅細胞/h、白細胞/h、管型/h?！靖阶ⅰ?.尿液應新鮮，PH應在6下列。2.尿液比重最佳在1.026以上。3.如尿液中含多量磷酸鹽時，應加少量稀醋酸液（切勿加多），使其溶解；含大量尿酸鹽時，應加溫使其溶解。4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自動分析儀進行尿沉渣定量檢查，詳見有關資料。

絨毛膜促性腺激素檢測【標本】新鮮尿液?！痉椒ā拷饦丝贵w檢測法?！静僮鳌恳娫噭┖嘘U明書?！靖阶ⅰ咳糍|(zhì)控點和測定點均不呈現(xiàn)紅色，表達試劑失效。

糞便檢查糞便的顯微鏡檢查【標本】新鮮糞便?！痉椒ā恐苯油科R檢法?！静僮鳌?.干凈玻片上加等滲鹽水1～2滴，選擇糞便的不正常部分，或挑取不同部位的糞便做直接涂片（最佳取大玻片，制成涂片后，應覆以蓋片。涂片的厚度以能透過印刷物筆跡為準）檢查。2.在涂片中如發(fā)現(xiàn)疑似包囊，則在該涂片上滴加1滴碘液，在高倍鏡下認真鑒別，如仍不能決定時，可取全量糞便濃縮法檢查。

隱血實驗【標本】新鮮糞便。【方法】免疫學檢測法?！静僮鳌咳∫黄蓛舾稍锏妮d玻片，滴加2～3滴蒸餾水，取糞便少量，調(diào)成均勻混懸液。取糞便隱血試紙條，按闡明書操作，將試紙條的反映端浸濕。在5min內(nèi)觀察成果。以反映線及質(zhì)控線均呈藍色帶為陽性?！靖阶ⅰ?.若兩條線均不顯色，闡明試紙條失效。2.本法由于間斷性出血或出血在糞便中分布不均等因素，可造成假陰性成果。3.本法由于藥品等因素，對正常人檢查有時會得到陽性成果。4.亦可采用化學試帶法、鄰甲聯(lián)苯胺法、愈創(chuàng)木酯法等。收集標本前3日應禁食動物性食物及富含葉綠素食物、鐵劑、中藥。但本法不受動物血紅蛋白的干擾，實驗前不須禁食肉類。糞膽素檢查【標本】新鮮糞便。【方法】氯化高汞煮沸法?！驹噭匡柡吐然吖芤?。【操作】1.于小試管內(nèi)置糞便一小塊，加飽和氯化高汞溶液數(shù)毫升。2.將糞塊調(diào)勻，加熱煮沸3min，立刻觀察顏色反映?！靖阶ⅰ?.成果不易鑒定時，應注意糞便顏色，必要時以鹽水替代試劑做空白對照。2.當糞便顆粒經(jīng)煮沸后如有紅色又有綠色出現(xiàn)，闡明標本內(nèi)既含糞膽素又含膽紅素，常見于腸炎、腹瀉等。

腦脊液檢查潘氏（Pandy）球蛋白定性實驗【標本】新鮮腦脊液?！驹噭?%苯酚溶液（棕色瓶內(nèi)保存）?！静僮鳌咳≡噭?～3ml，置于小試管內(nèi)，用毛細滴管滴入腦脊液1～2滴，襯以黑色背景，立刻觀察成果，報告陰性或陽性及陽性的程度。

細胞計數(shù)【標本】新鮮腦脊液。【試劑】1.細胞計數(shù)板；2.紅細胞稀釋液；3.冰乙酸；4.1%冰乙酸?！静僮鳌?.細胞總數(shù)：（1）澄清腦脊液：混勻后用滴管直接滴入計數(shù)池，計數(shù)10個大方格內(nèi)紅、白細胞數(shù)，其總和即為每ul的細胞數(shù)。（如細胞較多，可計數(shù)一大格內(nèi)的細胞數(shù)×10）。（2）渾濁或帶血腦脊液：用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20ul，加入含紅細胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計數(shù)4個大方格中的細胞總數(shù)，再乘以50即為每ul腦脊液的細胞總數(shù)。2．白細胞數(shù)：（1）非血性標本：小試管內(nèi)放入冰乙酸1～2滴，轉(zhuǎn)動試管，使內(nèi)壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3～4滴，數(shù)分鐘后，混勻充入計數(shù)池，按細胞總數(shù)操作中的紅、白細胞計數(shù)法計數(shù)。（2）血性標本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后，按細胞總數(shù)操作中的紅、白細胞計數(shù)法計數(shù)，成果×稀釋倍數(shù)。3．細胞分類：（1）直接分類法：白細胞計數(shù)后，將低倍鏡換成高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細胞核的形態(tài)分別計數(shù)單個核細胞（涉及淋巴細胞及單核細胞）和多核細胞，應數(shù)100個白細胞，并以百分率表達。若白細胞少于100個，應直接寫出單核、多核細胞的具體數(shù)字。（2）染色分類法：如直接分類不易辨別細胞時，可將腦脊液離心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37℃如見有不能分類的細胞，應另行描述報告。【附注】1.腦脊液常規(guī)涉及普通性狀檢查、潘氏（Pandy）球蛋白定性實驗及細胞計數(shù)。2.計數(shù)應及時進行。3.細胞計數(shù)時，應注意新型隱球菌與白細胞的區(qū)別。4.計數(shù)池用后，應用75%乙醇消毒60min。漿膜腔積液檢查漿膜粘蛋白定性實驗（Rivalta反映）【標本】新鮮漿膜腔積液?！驹噭勘姿?。【操作】取100ml量筒，加蒸餾水100ml，滴入冰醋酸0.1ml（PH3～5），充足混勻，靜止數(shù)分鐘，將穿刺液靠近量筒液面逐滴輕輕滴下，在黑色背景下，觀察白色霧狀沉淀的發(fā)生及其下降速度等，報告陰性或陽性及陽性的程度。細胞學檢查【標本】新鮮漿膜腔積液?！静僮鳌?.細胞總數(shù)及有核細胞計數(shù)辦法基本與腦脊液同，漏出液中有核細胞數(shù)量常在100×106/L下列；滲出液中有核細胞數(shù)量較多，常在500×106/L以上。2.細胞分類：穿刺液應在抽出后立刻離心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法進行分類。必要時制備稍厚涂片，在干燥前放置乙醚乙醇等量混合液中固定30min，用蘇木素-伊紅（HE）或巴氏法染色查找癌細胞。精液檢查精子活動率【標本】新鮮精液。【操作】取新鮮標本混勻后，在溫熱玻片上用高倍鏡觀察100個精子，計數(shù)活動精子與不活動精子的比例，計算精子活動的百分率?！靖阶ⅰ咳缡覝氐陀?0℃時，應將標本先放入37℃溫育5～10min精子活力【標本】新鮮精液?！静僮鳌咳∩鲜鲂迈r濕片標本，觀察精子的活動力，以0級至Ⅳ級報告。精子計數(shù)【標本】新鮮精液?！驹噭烤酉♂屢骸！静僮鳌?.于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml，吸液化精液20ul，加入稀釋液內(nèi)搖勻。2.充足搖勻后，滴入血細胞計數(shù)池內(nèi)，靜置1～2min，待精子下沉后，以精子頭部作為基準進行計數(shù)。3.如精子數(shù)少，可計數(shù)2個大方格內(nèi)精子數(shù)，數(shù)得總數(shù)乘10萬即為每毫升精液內(nèi)精子數(shù)，再換算成×109/L報告。4.如精子數(shù)多，可計數(shù)5個中方格內(nèi)精子數(shù)，加6個零，即為每ml精液內(nèi)精子數(shù)再換算成×109/L報告?！靖阶ⅰ?.收集精液前應避免性生活3~7天，精液宜用清潔干燥之小瓶收集，避孕套內(nèi)的精液不適宜采集。收集精液標本后應在一小時內(nèi)檢查，冬季應注意保溫。2.出現(xiàn)一次異常成果，應隔一周后復查，重復查2～3次方能得出比較對的的成果。3.如低倍鏡、高倍鏡檢查均無精子，應將精液離心沉淀后再涂片檢查，如兩次均無精子，報告“無精子”。

精子形態(tài)觀察【標本】新鮮精液。【試劑】革蘭或瑞氏染液?！静僮鳌扛锾m或瑞氏染色后用油鏡觀察，報告異常精子的比例。

前列腺液檢查【標本】新鮮前列腺液（臨床醫(yī)師作前列腺按摩術后，采集標本于清潔玻片上，立刻送檢）?！静僮鳌?.肉眼觀：統(tǒng)計液體顏色、與否混有血液、粘稠度（有無膿塊）。2.濕片鏡檢：高倍鏡下觀察白細胞、紅細胞、卵磷脂小體，另一方面為上皮細胞、精子、淀粉樣體等，必要時革蘭染色查細菌。陰道分泌物檢查【標本】陰道分泌物?！静僮鳌?.清潔度：取陰道分泌物，用生理鹽水涂片，高倍鏡檢查，根據(jù)所含白細胞（或膿細胞）、上皮細胞、桿菌、球菌的多少，分成Ⅰ～Ⅳ度。2.滴蟲檢查：在濕片鏡下如見梨形，比白細胞大2倍，頂端有鞭毛4根，在25～42℃溫度下可活動的滴蟲（在嚴寒天氣，標本要采用保溫方法），報告之。

3.胃液檢查基礎胃酸分泌量（BAO）及最大胃酸分泌量（MAO）測定【標本】胃液?！静僮鳌?.先將晨間空腹殘存胃液抽空棄去。持續(xù)抽取1小時胃液放入瓶內(nèi)，作為一種標本計胃液量。用酸度計精確測定氫離子濃度（也可用pH紙測定，或做胃酸濃度滴定）。2.一次皮下注射五肽胃泌素（Pentagastrin）6ug/kg，注后每15min收集一份標本，持續(xù)抽4次，分別用上法測胃液量、胃酸氫離子濃度。3.根據(jù)上述測定值，分別計算出BAO及MAO值。pH值測定【標本】胃液。【操作】可先用pH試紙測定，凡pH值＞3者，用pH計測定氫離子濃度。十二指腸引流液及膽汁檢查【標本】膽汁及十二指腸引流液。【操作】1.按照膽汁來源不同，分為甲、乙、丙、丁四管（在容器上必須注明）。2.觀察各管膽汁的顏色、透明度、粘稠度。3.測定酸堿度，每管分別統(tǒng)計。4.高倍鏡下鏡檢，注意細胞、寄生蟲、結晶等存在的狀況。痰液檢查顯微鏡檢查【標本】痰液。【操作】選擇膿樣、干酪樣或帶膿樣血液部分，取1小塊置玻片上，直接與生理鹽水混合，涂成薄片，加蓋片后輕壓之，用低倍鏡及高倍鏡檢查。注意有無紅細胞、白細胞、上皮細胞、彈力纖維、枯什曼螺旋體、夏科-雷登結晶、膽紅素結晶、硫磺樣顆粒（放線菌塊）、寄生蟲卵（可見蛔蟲卵、肺吸蟲卵）、痢疾阿米巴、真菌孢子、心力衰竭細胞、載碳細胞、癌細胞等。嗜酸性粒細胞檢查【標本】痰液。【試劑】瑞氏或伊紅-美藍染色液。【操作】取痰液做直接涂片，干燥后用瑞氏或伊紅-美藍染色液染色，油鏡下計數(shù)100個白細胞，報告嗜酸性粒細胞百分數(shù)。（徐珍貴朱炎）第三節(jié)血栓與止血的檢查血管壁與內(nèi)皮細胞檢查出血時間（BT）出血時間檢測是指皮膚受特定條件的外傷后，出血自行停止所需的時間。此過程反映皮膚毛細血管與血小板互相作用，涉及血小板粘附，血小板活化和釋放以及血小板聚集等反映。1.出血時間“測定器法”自肘前窩凹下二橫指處，經(jīng)常規(guī)消毒后，使刀片由“測定器”內(nèi)刺入皮膚，啟動秒表，每隔半分鐘用干凈濾紙吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，統(tǒng)計出血時間。2.Duke法，自耳垂或指尖取血?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【注意事項】測定器法：1.采用部位應保暖，血液應自動流出。2.由于刺入皮膚的刀片長度和深度均固定，故“測定器法”的成果較為精確。3.濾紙吸干流出血液時，應避免與傷口接觸。4.實驗前1周內(nèi)不能服用抗血小板藥品，如阿司匹林等，以免影響成果。阿司匹林耐量實驗（ATT）口服少量阿司匹林后，可使某些血栓和出血患者的出血時間延長?！巨k法與操作】定量口服阿司匹林后2h，測定出血時間，當成果可疑時，可于4h后重復測定出血時間一次，詳見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！驹噭堪⑺酒チ制?.3g/片）?！靖阶ⅰ?.服藥前出血時間明顯延長者，或臨床有明顯出血癥狀者，或有阿司匹林禁忌證患者，不適宜作此實驗。2.阿司匹林有引發(fā)出血副作用，對準備手術或術后1周以內(nèi)及血友病患者忌作本實驗。內(nèi)皮細胞功效實驗血管性假血友病因子抗原（vWF:Ag）測定（ELISA法）【標本】自靜脈取血1.0~1.5ml，注入抗凝管〔30mmol/L枸緣酸-枸椽酸鈉緩沖液（PH5.0）〕內(nèi)，（1:9v/v）充足混勻，在1h內(nèi)分離血漿，立刻測定或放-20℃1【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【附注】1.對血漿中血管性假血友病因子抗原含量過高的標本，應作稀釋后再測定。2.凡ELISA檢測中須注意的問題均要重視。3.除此法外，還可選用免疫火箭電泳法或單抗酶聯(lián)免疫吸附法。6-酮－前列腺素Fla（6-酮－PGFla）測定【標本】采用血漿標本。【辦法與操作】ELISA法?，F(xiàn)有商品試劑盒出售，嚴格按闡明書環(huán)節(jié)操作?！靖阶ⅰ?.如第二抗體為羊抗兔，則不適宜測定兔血標本。2.除ELISA法外，尚有放射免疫法。血小板數(shù)量和功效檢查血小板計數(shù)和平均血小板體積測定血小板計數(shù)：目視計數(shù)法?！緲吮尽磕┥已蚩鼓o脈血?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【試劑】1.草酸銨法稀釋液。2.許汝和稀釋液?！靖阶ⅰ?.血小板稀釋液要清潔。防微粒和細菌污染。試管和吸管也應清潔、干凈。2.針刺應稍深，使血流暢通。拭去第一滴血后，首先采血作血小板檢測，動作要快，避免血小板聚集和破壞。采用標本后盡快計數(shù)。3.血液稀釋液充足混勻后，滴入計數(shù)池內(nèi)后，要靜置10~15min。室溫高時注意保持計數(shù)池周邊的濕度，以免水分蒸發(fā)。4.計數(shù)時光線要適中，注意有折光性的血小板與雜質(zhì)灰塵相區(qū)別，附在血細胞旁邊的血小板也要注意，不要遺漏。血小板計數(shù)儀計數(shù)【標本】末梢血?！巨k法與操作】使用血小板計數(shù)儀及與其相匹配的稀釋液。操作詳見儀器使用闡明書。平均血小板體積（MPV）測定【標本】根據(jù)儀器的規(guī)定用末稍血或靜脈取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝素）【辦法與操作】自動化血細胞計數(shù)儀均可檢測血小板功效檢查血小板粘附實驗【標本】自靜脈取血1.0~1.5ml?！痉椒ā?.玻珠柱法：（1）操作：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。（2）注意事項：1）取血過程必須順利，掌握血液通過玻珠柱的速度，流速太快，粘附率減少，流速太慢會使粘附率增高。2）玻珠柱為一次性用品，用后即棄去。3）待用玻珠柱應置于干燥器中貯存，受潮后粘附率下降。2.玻璃濾器法：【標本】自靜脈取血1.5ml?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。血小板聚集實驗（PAgT）【標本】自肘靜脈取血4.5ml注入于含0.5ml109mmol/L枸椽酸鈉的硅化離心管內(nèi)，充足混勻?！驹噭?.富含血小板血漿（PRP）及貧含血小板血漿（PPP）。2.血小板聚集誘導劑ADP、腎上腺素、膠原、瑞斯托霉素（Ristocetin）等。【辦法與操作】PAgT比濁法，按《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）環(huán)節(jié)操作?！咀⒁馐马棥?.血標本中pH6.8~8.5之間時，可測得最佳成果。pH＜6.4或＞10.0時，可使聚集克制或消失。2.阿司匹林、潘生丁、肝素、雙香豆素等可克制聚集，特別阿司匹林克制聚集作用時間可持續(xù)1周。3.采血后標本應放在15~25℃下，切忌冰箱內(nèi)保存，并在3h凝血因子檢查全血凝固時間檢查（CT）【標本】靜脈取血3ml?！巨k法與操作】試管法、硅管法操作參見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.靜脈取血要一針見血，盡量減少組織液和空氣混入。2.水浴箱溫度要恒定，過高或過低，可影響成果。活化部分凝血活酶時間測定（APTT）【標本】自靜脈取血，用109mmol/L枸椽酸鈉作1:9抗凝?！驹噭渴惺鄢商自噭??！巨k法與操作】按試劑及有關儀器闡明書規(guī)定進行。【附注】1.標本應及時檢測，最遲不超出2h。2.分離血漿應在3000r/min，離心10min。3.本實驗較試管法全血凝血時間敏感，能檢出因子Ⅷ：C＜25％輕型血友病。血漿凝血酶原時間測定（PT，一期法）【標本】靜脈血1.8ml，用109mmol/L枸椽酸鈉0.2ml抗凝。【試劑】1.組織凝血活酶浸出液；2.0.025mol/LCaCl2【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】1.采血后宜在1h內(nèi)完畢，置冰箱4℃保存,不應超出4h，-20℃下可放置2周，-702.水溫箱控制在37℃±1簡易凝血活酶生成實驗（STGT）【標本】取全血0.04ml加5ml蒸餾水，混勻，即成溶血液，備用?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）纖溶系統(tǒng)檢查優(yōu)球蛋白溶解時間測定（ELT）【標本】采用靜脈血1.8ml注入含0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉液中，混勻?！驹噭?.109mmol/L枸櫞酸鈉液；2.1%醋酸液；3.（pH9.0）硼酸鹽緩沖液；4.0.025mol/LCaCl2【辦法與操作】加鈣法。操作參見《全國臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）?！咀⒁馐马棥?.采血時，止血帶不適宜扎得過緊，不得超出5min。2.觀察溶解標本以不見絮狀物為準。3.當纖溶極度亢進時，體內(nèi)纖酶原基本被消耗盡時，本實驗可呈假陰性。組織纖溶酶原激活物測定（t-pA:A）【標本】自靜脈采血?！巨k法與操作】發(fā)色底法。操作見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【注意事項】1.采血時最佳不用止血帶，加壓后會引發(fā)t-pA進入血液，取血后盡快在低溫分離血漿。2.標本必須酸化解決，否則受纖溶酶原激活克制物（PAI）的影響較大。纖溶酶原活性測定（PLG:A）【標本】自靜脈取血0.9ml,加0.1ml109mmol/l枸櫞酸鈉液混勻?！驹噭?.0.05mol/LTris緩沖液（PH7.42.尿激酶。3.50%（v/v）甘油溶液。4.50%（v/v）醋酸液。5.正常人混合血漿。6.國產(chǎn)發(fā)色底物140450（上海生化所東風試劑公司產(chǎn)品）?！巨k法與操作】發(fā)色底物法。操作參見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。D-二聚體測定高凝狀態(tài)的患者，血栓性疾病和彌漫性血管內(nèi)凝血時，血漿D-二聚體明顯升高是診療DIC的重要根據(jù)。【標本】采靜脈血1~1.5ml，注入抗凝管（枸櫞酸鈉，EDTA.Na2及肝素）內(nèi)混勻?！巨k法、試劑與操作】ELISA法，操作嚴格按商品出售的試劑盒闡明書進行?！咀⒁馐马棥?.使用的抗凝劑量，不應超出血總體積10%。2.待檢血漿在室溫保存8h或4℃4天內(nèi)，D-二聚體含量基本不變，若需長久保存，可置-20℃保存，操作時置于3.市售D-二聚體乳膠試劑盒及金標試劑盒使其檢測更為方便，但不能定量。血漿魚精蛋白副凝固時間（3P）實驗【標本】自靜脈抽取1.0~1.5ml血，注入枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，混勻。【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【試劑】1.109mmol/L枸櫞酸鈉液。2.10g/L硫酸魚精蛋白液（pH6.5）?！咀⒁馐马棥?.本實驗不適宜用草酸鹽、肝素或EDTA鹽作抗凝劑。2.抽血不順利、抗凝不完全、標本保存于冰箱、實驗時間已到未及時觀察成果等均可致假陽性成果。3.水浴箱溫度太低或纖維蛋白原的含量過低，會出現(xiàn)假陰性成果。血清纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）測定【標本】采用無溶血的血清?！巨k法、試劑與操作】ELISA法。試劑現(xiàn)已有商品試劑盒供應，操作按闡明書環(huán)節(jié)進行。

循環(huán)抗凝物質(zhì)檢查凝血酶時間測定（TT）【標本】自靜脈取血1~1.5ml，注入枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，混勻?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【試劑】1.109mmol/L枸櫞酸鈉液2.凝血酶溶液【附注】1.采血后宜在1h內(nèi)完畢，置冰箱內(nèi)保存不應超出4h。2.肝素或EDTA.Na2抗凝血漿不適宜作本實驗。血漿肝素或類肝素抗凝物質(zhì)檢查（甲苯胺藍糾正實驗）【標本】靜脈枸櫞酸鈉抗凝血?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ勘緦嶒炛屑蛹妆桨匪{后，凝血酶時間縮短5s以上者，提示待檢血，有肝素或類肝素增多。蘄蛇酶時間測定（AT）【標本】采靜脈血0.9ml加0.1ml（109mmol/L）枸椽酸鈉抗凝?！驹噭?.蘄蛇酶溶液0.5mg/支；2.109mmol/L枸椽酸鈉液。【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。（何金昌徐淑屏）第四節(jié)溶血性貧血的檢查紅細胞滲入脆性實驗【標本】1.簡易法，靜脈血為宜。2.比色法，用肝素抗凝管，抽取靜脈血1.0~1.5ml，混勻。【辦法及操作與試劑】1.簡易法：用配有6號針頭的干燥無菌注射器取靜脈血1.0~1.5ml，立刻滴入試管架上含有不同量的NaCL及蒸餾水的各管中，每管１滴，貧血患者可加2滴，搖勻，靜置，室溫2h，觀察成果。詳見《臨床實驗診療學上冊》。2.比色法：見《臨床實驗診療學上冊》?！靖阶ⅰ?.簡易法：（1）試劑配制要精確，每次配制量不適宜過大，1~2個月內(nèi)需更換1次試劑。（2）如取耳垂血要使血液流出暢通，如靜脈血規(guī)定注射器干燥。（3）如用抗凝血，以去纖維蛋白或肝素抗凝血為適宜。（4）如開始及完全溶血的成果不易判斷時，可離心后觀察。（5）地中海貧血的滲入脆性減少，需作低濃度NaCL液檢測。2.比色法：（1）如在室溫下實驗，需在2小時內(nèi)比色結束。（2）血與NaCL緩沖液的PH值及溫度對檢查成果都有一定影響。紅細胞孵育后滲入脆性實驗【標本】用肝素抗凝血1~1.5ml，混勻后備用?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版【試劑】9g/LNaCl磷酸鹽緩沖液（pH7.4）【附注】1.試劑及試管需消毒，試管需加塞。2.試管中PH及溫度必須恒定，pH變化0.1或溫度升高5℃紅細胞自體溶血實驗本實驗是測定患者的紅細胞在自體血清中經(jīng)孵育后，自發(fā)發(fā)生的溶血程度。【試劑】1.100g/L葡萄糖（無菌）；2.等滲鹽水（無菌）；3.HiCN稀釋液；4.0.4mol/LATP【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ繎獓朗責o菌操作規(guī)程。熱溶血實驗【標本】靜脈全血?！巨k法與操作】以無菌干燥注射器取靜脈血2ml，取下針頭，緩緩地沿管壁注入消毒小試管中，避免產(chǎn)憤怒泡，加少量消毒石臘油覆蓋，37℃孵育24h【附注】1.注射器及試管要干凈，操作過程避免發(fā)生溶血。2.在孵育24h后，血塊仍未改收縮，可用小玻璃棒沿管壁輕輕分離之，然后再離心沉淀，觀察成果。酸溶血實驗【標本】取靜脈血5ml，取下針頭，將血沿瓶壁注入放有玻珠的三角燒瓶內(nèi)，輕輕搖動，使纖維蛋白析出，并附于玻璃珠內(nèi)，繼續(xù)搖轉(zhuǎn)至血液不凝止。【方法】1.Ham's實驗法。2.簡易酸溶血實驗法?！驹噭?.0.2mol/LHCL液。2.8.5g3與患者同型或AB型血清（最佳采用多人混合新鮮血清，以確保足夠的補體）?！静僮鳌恳姟杜R床實驗診療學》上冊?！靖阶ⅰ?.血清酸化后，試管須塞緊，否則二氧化碳逸出，可使血清酸度減少。2.抗凝劑會影響PH值，故不適宜用抗凝血漿，可自末梢取血10余滴，直接滴入鹽水中，混勻，離心棄去上清液，再配成50％紅細胞懸液。蔗糖水溶血實驗【標本】取枸櫞酸鹽或草酸鹽抗凝管，抽靜脈血1ml?！驹噭?2.4g/L蔗糖溶液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.所用儀器清潔干燥，以免溶血。2.若無蔗糖也可用葡萄糖替代。葡萄糖6－磷酸脫氫酶活性測定【標本】取靜脈血0.5~1.0ml注入抗凝管（肝素、EDTA或ACD液抗凝管），混勻?！痉椒ā勘壬??！驹噭?.0.25mol/LTris-HCL緩沖液（pH7.42.0.154mol/LKCl。3.0.12mol/LMgCl4.0.00625mol/LG－6－PNa2（2mg/ml）。5.0.00625mol/LNADP（TPN）（5mg/ml）。6.氰化血紅蛋白試劑?！静僮鳌恳姟杜R床實驗診療學》上冊?！靖阶ⅰ啃迈r抗凝血（EDTA或ACD抗凝血），在4℃下保存，48高鐵血紅蛋白還原實驗【標本】采靜脈血2~2.5ml于含0.2ml枸櫞酸鈉（109mmol/L）試管內(nèi)，混勻?！驹噭?.0.18mol/L亞硝酸鈉和0.28mol/L2.0.4mmol/L3.0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（PH7.44.109mmol/L枸櫞酸鈉液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.紅細胞比積低于30％時，高鐵血紅蛋白還原率顯暑減少，因此，須調(diào)節(jié)紅細胞與血漿比例為1：1后，再取標本作實驗。2.如采用ACD作抗凝劑，用量ACD與血之比為0.15：1。該抗凝血可保存1周。不適宜使用草酸鹽作抗凝劑，因其含有還原性。3.標本不應有凝塊或溶血。分光光度計的波長應精確，普通規(guī)定St比B大8倍以上。變性珠蛋白小體（Heinz小體）檢查【標本】采用新鮮未梢血一滴?！痉椒ā?.耐爾藍法。2.結晶紫法?！驹噭?.1.5g2.2.10g【操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版。紅細胞谷胱甘肽（GSH）含量及其穩(wěn)定性檢查【標本】取靜脈血2.0~2.5ml，加入于抗凝管（肝素、EDTA.Na2或ACD抗凝劑），混勻?！痉椒ā?.還原型谷胱甘肽比色測定法。2.谷胱甘肽穩(wěn)定性實驗。還原型谷胱甘肽比色測定法：【試劑】1.0.3mol/LNa2HPO4液。2.1g/LEDTA.Na2液。3.沉淀劑：偏磷酸1.67g、EDTA.Na20.2g、NaCl30g4℃4.二硫代雙硝基苯甲酸（DTNBN）試劑。5.1.62mmol/LGSH貯存液。6.162umol/LGSH應用液?！静僮鳌恳姟度珖R床檢查操作規(guī)程》第二版。【附注】1.GSH相稱穩(wěn)定，標本用ACD抗凝，置于冰箱內(nèi)，可貯存3周不影響成果。2.血液中GSH幾乎全部存在于紅細胞內(nèi)。故用PCV除以全血GSH得紅細胞GSH含量。谷胱甘肽穩(wěn)定性實驗:當紅細胞內(nèi)G6PD缺少時，GSH含量明顯減少，因此，本實驗可間接則知G6PD的含量?！緲吮尽咳§o脈血2.0~2.5ml于抗凝管（ACD、枸櫞酸鈉、EDTA.Na2）中，混勻?！驹噭咳∫阴１诫?00mg，溶于1ml丙酮中，每管加0.05ml（含乙酰苯肼5mg），然后置于37℃【操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版。冷溶血實驗【標本】采靜脈血8ml，以玻璃珠去纖維蛋白后，制備血清和紅血球懸液。【辦法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ坎僮髦械?、第2管最佳在20℃血紅蛋白電泳檢查【標本】采用末梢血或靜脈血1.0~1.5ml于EDTA.Na2抗凝管內(nèi)，混勻。【試劑】1.0.26mol/LTris緩沖液（pH9.1）（用于陽極）。2.pH8.6巴比妥緩沖液（用于陰極）。3.醋纖薄膜浸泡液：用于陽極和陰極的緩沖液等量混和。4.氨基黑10B染色液。5.漂洗液。6.0.4mol/LNaOH。7.透明液。8.或市售成套試劑盒?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）或嚴格按試劑盒和配套儀器的使用闡明書操作。血紅蛋白H包涵體檢查【標本】取末梢血3~4滴加入于含0.5ml煌焦油藍液中?！驹噭?0g/L煌焦油藍液：煌焦油藍1g，枸櫞酸鈉0.4g溶于100ml生理鹽水中，貯于棕色瓶中，臨用前過濾?！静僮鳌恳姟度珖R床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.HbH普通要在10min后在1h內(nèi)產(chǎn)生包涵體。其它不穩(wěn)定Hb形成Heinz小體，需更長時間（3h或更長）。2.網(wǎng)織紅細胞呈蜘蛛網(wǎng)狀，與紅細胞包涵體的顆粒狀不同需注意鑒別。血紅蛋白A2定量【標本】自靜脈取血1.0~1.5ml，注入抗凝管（EDTANa2肝素）【辦法及操作與試劑】見《臨床實驗診療學》上冊。Hb－F堿變性實驗【標本】采靜脈血1~2ml于抗凝管（肝素、EDTANa2、ACD液）內(nèi)，混勻?！驹噭?.0.083mol/L氫氧化鉀（PH12.7）。2.半飽和硫酸銨液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版。【附注】1.如濾液呈淡黃或淡紅色，可能為血紅蛋白含量高；但首先要檢查使用的堿液及酸性半飽和硫酸銨的質(zhì)量。因堿液的堿度局限性或酸性半飽和硫酸銨的濃度和酸度局限性，皆可引發(fā)濾液不呈水樣透明，而致檢測成果偏高。2.堿濃度必須精確，pH值必須不不大于12，校準后最佳是小分裝密閉保存，使用量和作用時間都必須十分精確。3.酸性半飽和硫酸銨須配準，pH應為3.0，最佳小批量分裝。4.過濾的濾紙應為化學實驗用品，濾液必須澄清，透明，否則應重新過濾１次或離心沉淀。5.實驗用試管，吸管等儀器不可沾污酸堿。6.每次實驗最佳重復做二份，用正常人血和臍帶血（Hb－F含量高）作對照實驗。見《全國臨床檢查操作規(guī)程》第二版。不穩(wěn)定血紅蛋白過篩實驗異丙醇實驗【標本】自靜脈取血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素、EDTA.Na2、ACD液），混勻?！驹噭?.17%（V/V）異丙醇液。2.Hb溶液：用四氯化碳抽提，不能用甲苯?！静僮鳌咳?ml17％異丙醇溶液，置有塞試管中，37℃水浴預熱數(shù)分鐘后，加入0.2mlHb溶液，加塞混勻，計時觀察，同時作正常對照。若放在37℃水浴中，5min出現(xiàn)混濁，【附注】1.異丙醇溶液（17％）及溫度（37℃）要嚴格控制pH不得低于7.22.Ｈb液濃度應控制在70~130g/L之間，最佳為100g/L，抗凝劑無影響。3.Ｈb液需新鮮配制，久置可轉(zhuǎn)變?yōu)椋蚭t－Ｈb，造成假陽性。4.Hb－F含量超出4％，可出現(xiàn)假陽性；新鮮的溶血液或貯存于4℃2周內(nèi)的全血，在８滴Ｈb液中加１滴20g/L熱不穩(wěn)定實驗【標本】采靜脈血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素，EDTA.Na2，ACD液），混勻?！驹噭?.0.1mol/LTris緩沖液（PH7.4）。2.氰化高鐵血紅蛋白稀釋液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）。丙酮酸激酶活性測定【試劑】1.0.3mol/LTris-HCl緩沖液。2.ADP溶液。3.5mmol/LNADH溶液。4.LDH溶液600u/ml。5.30mmol/L磷酸烯醇型丙酮酸(PEP)溶液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）?！靖阶ⅰ?.血液標本需新鮮，若以4℃2.白細胞中含相稱高PK活性，即使在紅細胞PK缺少癥亦是如此。因此，須盡量從紅細胞懸液中除去。血漿游離血紅蛋白測定【標本】采用靜脈血1~1.5ml于干燥試管內(nèi)，分離血清。或收集尿液送檢。【試劑】1．0.2g/100ml鄰一甲聯(lián)苯胺溶液。2．1%H2O2溶液。3．10%乙酸溶液。4．Hb原則應用液?！巨k法與操作】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。血清結合珠蛋白測定【標本】采靜脈血0.5~1.0ml于干凈試管內(nèi)，分離清晰透明血清。【試劑】1．pH8.6巴比妥緩沖液（離子強度0.05）。2．醋酸纖維薄膜浸泡液。3．3%H2O2液。4．4mol/LH2SO4液。5．0.5mol/L醋酸緩沖液（pH4.70）。6．5mmol/L聯(lián)大茴香胺溶液。7．聯(lián)大茴香胺－過氧化氫顯色劑?！巨k法及操作】醋酸纖維薄膜電泳法，詳見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】在pH4.7時，結合的與游離的血紅蛋白顯色強度基本相似，因此，用PH4.7聯(lián)大茴香胺醋酸緩沖液顯色效果最佳。（何金昌徐淑屏）第五節(jié)骨髓細胞檢查及血細胞化學染色骨髓檢查骨髓取材1.骨髓穿刺部位：普通取胸骨、棘突、髂骨前嵴或髂骨后嵴等部位。兩歲以內(nèi)小兒主張用脛骨穿刺。穿刺部位不同，取材可能有明顯差別。如再生障礙性貧血的患者，進行不同部位骨穿，可發(fā)現(xiàn)不同的細胞增生程度，以胸骨穿刺最佳，棘突次之，髂骨最差。故必要時應多部位取材，方便能全方面地理解骨髓狀況。2.吸骨髓液：普通不超出0.2ml，否則易于稀釋。3.骨髓取材滿意的幾項指標：抽吸骨髓時，患者有特殊酸痛感，骨髓液中應含有骨髓小粒。鏡下可見骨髓特有細胞，如巨核細胞、漿細胞、網(wǎng)狀細胞、組織嗜堿細胞、幼稚紅細胞、幼稚粒細胞。涂片與染色1．涂片：所用的載玻片應干凈無油污，涂片均勻，有頭、體、尾三部分。選擇骨髓小粒部分制涂片。2．染色：用瑞氏和姬姆薩混合染色：選擇涂片良好的骨髓片或血片平放染色，染色普通為10～15min。骨髓增生程度的預計1．骨髓涂片觀察：首先在低倍鏡下全方面觀察成熟紅細胞與有核細胞的大致比例，以擬定增生程度。2．國內(nèi)普通分為5級，判斷原則以下：（1）增生極度活躍：成熟紅細胞與有核細胞之比約為1:1，見于白血病、紅白血病。（2）增生明顯活躍：成熟紅細胞與有核細胞之比為10:1，見于白血病，增生性貧血。（3）增生活躍：成熟紅細胞與有核細胞之比約為20:1，見于正常骨髓和某些貧血。（4）增生減低：成熟紅細胞與有核細胞之比約為50:1，見于造血功效低下時。（5）增生嚴重減低：成熟的紅細胞與有核細胞之比約為300:1，見于典型的再生障礙性貧血。粒、紅比值計算將粒細胞系統(tǒng)從原始到成熟階段的總和與紅細胞系統(tǒng)從原始到晚幼紅細胞總和相比，稱為粒、紅比值。參考值：成人為2～4：1粒紅比值增高見于化膿性感染，類白血病反映。粒細胞性白血病，紅細胞生成受克制等。減少見于粒細胞生成受克制，如粒細胞缺少癥或紅細胞系統(tǒng)增生，如急性溶血或失血，缺鐵性貧血等。骨髓有核細胞計數(shù)采用試管法：用血紅蛋白吸管吸取骨髓液20ul，放入裝有1ml血細胞稀釋液的試管中，充足振蕩2分鐘，搖勻，按白細胞計數(shù)辦法，數(shù)5個大方格細胞，其成果乘以102，即得每1ul有核細胞數(shù)。注意事項：骨髓穿刺時，勿混入血液，取骨髓液時，先計數(shù)后涂片，避免凝固。骨髓巨核細胞計數(shù)【操作】取骨髓液涂片，低倍鏡查找巨核細胞，尋找1.5×3cm為一單位面積，計數(shù)其巨核細胞?！咀⒁馐马棥咳〔谋仨毩己?，涂片不適宜過厚，以透過涂膜看到筆跡為度。計數(shù)時應瀏覽全片?！緟⒖贾怠烤藓思毎麉⒖贾担?～35個，分類：原巨核細胞0；幼巨核細胞0～0.05（0～5％），顆粒型巨核細胞0.10～0.27（10％～27％）；產(chǎn)板型巨核細胞0.44～0.60（44％～60％）；裸核型巨核細胞0.08～0.3（8％～30％）。骨髓象分析與報告閱讀骨髓片時，首先在低倍鏡下觀察取材、涂片、染色與否滿意，成熟紅細胞與有核細胞的大致比例，以擬定增生程度，計數(shù)全片巨核細胞數(shù)，注意有無體積較大的細胞，如轉(zhuǎn)移瘤細胞，尼曼匹克細胞，高雪細胞等。此后，用油鏡作分類計數(shù)，普通以體尾交界處為宜。在分類計數(shù)時，一張骨髓片計數(shù)200～500個有核細胞，發(fā)出骨髓報告時，應將骨髓檢查成果與臨床及其它實驗成果，特別是外周血的檢查成果聯(lián)系起來全方面分析。報告時應提出下列方面所見：1．骨髓有核細胞增生狀況。2．粒、紅比值。3．粒細胞系統(tǒng)：觀察粒細胞系統(tǒng)在全部骨髓細胞中所占比例。正常狀況下約占1/2左右（50%～60％），各階段細胞之間的比例，原粒＜2％；早幼粒＜5％；中、晚幼粒百分率依次增多，但普通各＜15％。成熟細胞中，桿狀核細胞多于分葉核粒細胞，嗜酸粒細胞普通＜5％，嗜堿粒細胞＜1％，寫明各個細胞形態(tài)有無異常，如胞漿與胞核的發(fā)育與否平行，胞漿中有無空泡，毒性顆粒和Auen小體等。4．紅細胞系統(tǒng)：觀察幼紅細胞系統(tǒng)在全部骨髓細胞中所占有的比例，正常狀況下約占有核細胞的1/5（20％）左右。各階段幼紅細胞之間的比例，原始紅細胞普通＜1％；早幼紅細胞＜5%；中、晚幼紅細胞約為10％。觀察有無異常紅細胞。5．淋巴及單核細胞系統(tǒng)：注意細胞形態(tài)有無異常，各階段的比例關系。淋巴系統(tǒng)比例約為20％，小兒偏高，有時可達40％，單核細胞普通＜4％。6．其它細胞：如漿細胞，網(wǎng)狀細胞，組織嗜堿細胞，內(nèi)皮細胞，吞噬細胞等的形態(tài)及比例。7．巨核細胞總數(shù)：分類及形態(tài)，血小板形態(tài)及數(shù)目。8．有無寄生蟲：如瘧原蟲、利朵小體。9．有無異常細胞。最后提出診療，如不能提出診療意見，可描述形態(tài)學所見，以供臨床參考。細胞化學染色檢查過氧化物酶（POX）染色檢查【標本】已干的血片或骨髓片?！巨k法與試劑】3-氨基-9-乙基咔唑法：固定液；染色液；Mayer蘇林素復染液。改良Pereira染色法：固定液；含磺化鉀的磷酸緩沖液；10g/L0.03%H2O2溶液；染色應用液?！静僮髋c成果判斷】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ繕吮拘栊迈r制作并固定，染色液應臨用前新鮮配制。蘇丹黑B（SB）染色檢查【標本】新鮮或陳舊血片或骨髓片?！驹噭?7%甲醛液；蘇丹黑B貯存液；緩沖液；染色液?！静僮髋c成果判斷】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色檢查【標本】用末梢血或肝素抗凝血制血涂片均可?！驹噭抗潭ㄒ?；緩沖液；染色液；蘇木素復染液。【操作與成果判斷】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?．涂片要新鮮，厚薄適宜，及時固定。2．每次染色，最佳同時做1份化膿性感染患者血片作陽性對照。酸性磷酸酶（ACP）染色檢查【標本】新鮮骨髓涂片或血片?！驹噭?.固定液；2.底物染色液1號（不含酒石酸）；3.酒石酸液；4.底物染色液2號（含酒石酸）?！静僮髋c成果判斷】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ緼CP染色也有用Gomori硫化鉛法，但因操作復雜且成果不穩(wěn)定，現(xiàn)為本法取代。糖原染色檢查【標本】干血片或骨髓涂片。【試劑】1.乙醇－甲醛固定液；2.淀粉酶緩沖液（pH6.0）；3.10g/L過碘酸液；4.Schiff液；5.蘇木素復染液?！巨k法、操作與成果判斷】高碘酸－雪夫反映，PAS法見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.過碘酸質(zhì)量要確保，氧化時間以15~20min為宜。2.染好的涂片不適宜久置，超出8天左右即逐步褪色。鐵粒染色檢查【標本】干血片或骨髓片?！驹噭?.4％鹽酸液；2.40g/L亞鐵氫化鉀液；3.堿性復紅貯存液；4.堿性復紅應用液。【辦法、操作與成果判斷】見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.使用器材須除鐵解決，特別是載玻片。2.亞鐵氰化鉀－鹽酸應用液須臨用時配制。3.作細胞外鐵檢查時，需用含有骨髓小粒的涂片。4.細胞內(nèi)鐵計數(shù)應以中、晚幼粒細胞為準。（何金昌徐淑屏）第六節(jié)臨床微生物及寄生蟲檢查細菌涂片檢查涂片不染色顯微鏡檢查標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗辦法：直接涂片法、壓滴法或懸滴法。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：觀察標本中有無細菌或真菌，如有再觀察細菌的形態(tài)及運動狀況，報告所見。注意事項：注意微生物操作安全；標本量不適宜太多，以免影響觀察；涂片制作后立刻觀察，涂片干涸后應重新制作涂片。涂片革蘭染色顯微鏡檢查標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗辦法：常規(guī)法、快速法。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：觀察染色涂片有無細菌或真菌，如有則進一步觀察細菌的染色性、形態(tài)、特殊構造及排列方式。涂片中如有細胞，則觀察細菌菌體在細胞內(nèi)或細胞外。報告所見。注意事項：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時，否則染色變性；只能報告所見細菌的染色性、形態(tài)、特殊構造及排列方式，不能直接報告細菌菌種如報告涂片見淋病奈瑟菌、白喉棒狀桿菌。涂片抗酸染色顯微鏡檢查標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗辦法：萋尼染色法、快速染色法或熒光（金胺－羅丹）染色法。操作辦法：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：抗酸菌在萋尼染色法中呈紅色，在金胺－羅丹染色法中呈熒光金黃色。觀察染色涂片有無抗酸桿菌，如有則進一步觀察細菌數(shù)量大致狀況。涂片中如有細胞，則觀察菌體在細胞內(nèi)或細胞外。報告所見。注意事項：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時，否則染色變性；只能報告有無抗酸桿菌，如有，可報告其數(shù)量大致狀況及與否在細胞內(nèi)，不能直接報告見分枝桿菌或結核分枝桿菌，因奴卡菌屬、放線菌屬細菌也可為抗酸陽性菌。涂片墨汁染色顯微鏡檢查標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗辦法：直接染色法。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：涂片背景為黑色，新型隱球菌或細菌莢膜在染色中呈折光環(huán)形菌體構造。觀察染色涂片有新型隱球菌或細菌莢膜時為檢查陽性。報告所見。注意事項：染液與標本液的比例為1:1，比例不當影響觀察效果；只能報告所見即有無折光性環(huán)狀樣菌體，不能直接報告見新型隱球菌等。細菌培養(yǎng)細菌需氧培養(yǎng)標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗材料：隔水式培養(yǎng)箱及多個細菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果判斷：培養(yǎng)基上有細菌生長為陽性，無細菌生長為陰性。注意事項：嚴格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度；培養(yǎng)陰性不完全表達標本中無細菌，細菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基營養(yǎng)達不到規(guī)定等亦可造成培養(yǎng)陰性。細菌微需氧培養(yǎng)標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物。實驗材料：二氧化碳培養(yǎng)箱、燭缸或化學產(chǎn)氣箱、盒、袋及多個微需氧細菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）成果判斷：培養(yǎng)基上有細菌生長為陽性，無細菌生長為陰性。注意事項：嚴格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度，確保氣體質(zhì)量；培養(yǎng)陰性不完全表達標本中無細菌，細菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基營養(yǎng)達不到規(guī)定、氣體不合原則等亦可造成培養(yǎng)陰性。細菌厭氧培養(yǎng)標本規(guī)定：多個標本或細菌培養(yǎng)物用厭氧菌專用運輸工具或封閉性容器采集和運輸。標本采集后嚴格隔離空氣并立刻送檢。實驗材料：厭氧培養(yǎng)箱、換氣罐或化學產(chǎn)氣箱、盒、袋及多個厭氧菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見《全國臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果判斷：培養(yǎng)基上有細菌生長為陽性，無細菌生長為陰性。注意事項：嚴格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度，確保氣體質(zhì)量；操作過程速度要快，并嚴格隔離空氣；培養(yǎng)陰性并不完全表達標本中無細菌，細菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基達不到規(guī)定、氣體不合原則等亦可造成培養(yǎng)陰性。細菌分離血液及骨髓細菌培養(yǎng)與分離