臨床檢驗(yàn)技術(shù)操作手冊(cè)

第一節(jié)臨床血液學(xué)檢查血常規(guī)檢查【標(biāo)本】抗凝靜脈血（有些儀器也可用末梢血）?！痉椒ā垦杭?xì)胞自動(dòng)分析儀測(cè)定法?！驹噭垦杭?xì)胞自動(dòng)分析儀配套試劑?！静僮鳌吭斠?jiàn)自己實(shí)驗(yàn)室血液細(xì)胞自動(dòng)分析儀使用手冊(cè)?！靖阶ⅰ?.血常規(guī)涉及白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞比積、血小板計(jì)數(shù)等項(xiàng)目。這些項(xiàng)目亦有對(duì)應(yīng)的手工辦法，詳見(jiàn)有關(guān)資料。2.半自動(dòng)及全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀從設(shè)計(jì)上均規(guī)定用抗凝靜脈血。其優(yōu)點(diǎn)為：（1）靜脈血能對(duì)的地反映病人實(shí)際狀況，重復(fù)性好；（2）利于延長(zhǎng)儀器的使用壽命；（3）解決了采血盤的交叉感染問(wèn)題等。3.血細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)用EDTA·K2：為抗凝劑（EDTA·K2·2H2O1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。4.貯血容器應(yīng)選用有蓋塑料管。抗凝血采集后在室溫中貯存應(yīng)不超出6h；如需制作血涂片應(yīng)在2h內(nèi)完畢。5.測(cè)定前必須將EDTA·K2抗凝血充足混勻。6.血細(xì)胞分析儀測(cè)定最適溫度為18～22℃，低于15℃或高于7.血細(xì)胞分析儀用于白細(xì)胞分類只能當(dāng)作一種過(guò)篩手段，當(dāng)白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白和血小板的任何一項(xiàng)有明顯升高或減少；白細(xì)胞分類出現(xiàn)異常成果（中間細(xì)胞群百分率≥8.0%）；紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的任何一種直方圖出現(xiàn)異常圖形等狀況，須用顯微鏡檢查及分類。嗜酸性粒細(xì)胞直接計(jì)數(shù)【標(biāo)本】末梢血或抗凝靜脈血。【方法】直接計(jì)數(shù)法。【試劑】1.Hinkelmann液；2.乙醇-伊紅稀釋液；3.伊紅-丙酮稀釋液?！静僮鳌?．小試管中加稀釋液0.38ml。2．常法取末梢血20ul，加入管內(nèi)混勻，待紅細(xì)胞溶解后兩側(cè)充池。3．靜置3～5min，用低倍鏡（必要時(shí)用高倍鏡）鏡下計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)。總數(shù)×20×106=嗜酸性粒細(xì)胞/L。【附注】1.血液稀釋后應(yīng)于1h內(nèi)計(jì)數(shù)完畢。2.充池前要充足混勻，但又不適宜用力過(guò)猛。3.住院病人采集標(biāo)本時(shí)間力求統(tǒng)一，以免受日間生理變化的影響。紅細(xì)胞沉降率測(cè)定【標(biāo)本】抗凝靜脈血。【方法】魏氏法。【試劑】109mmol/L枸櫞酸鈉溶液。【操作】1.3mm×100mm試管1支，在2ml容量處刻上記號(hào)，加抗凝劑0.4ml。2.靜脈采血后，取下針頭，加血至刻度，旋轉(zhuǎn)混合。3.用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混勻血液至"0"刻度處，拭去管外附著的血液，將管垂直立在血沉架上。4.記時(shí)，室溫中靜置1h，觀察血漿高度，以紅細(xì)胞下沉的毫米數(shù)報(bào)告之。【附注】1.紅細(xì)胞在單位時(shí)間內(nèi)下沉的速度與血漿蛋白的量與質(zhì)，血漿中脂類的量和質(zhì)，紅細(xì)胞的大小與數(shù)量，與否成串錢相聚以及血沉管的內(nèi)徑、清潔度、放置位置與否垂直，室溫高低等因素都有關(guān)系。2.標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)空腹。3.血液和抗凝劑的比例要精確。4.血沉管內(nèi)徑要原則（2.5mm），放置要垂直。5.做血沉的標(biāo)本要在采集后3h內(nèi)測(cè)定，并充足混勻。6.室溫過(guò)低、過(guò)高和貧血時(shí)，對(duì)成果有影響。為此，血沉應(yīng)盡量放在18～25℃室溫下測(cè)定。室溫過(guò)高時(shí)血沉加緊，能夠按溫度系數(shù)校正。室溫過(guò)低時(shí)血沉減慢，無(wú)法校正。網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)【標(biāo)本】末梢血或抗凝靜脈血?！痉椒ā堪俜钟?jì)數(shù)法?！驹噭?0g/L煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或10g/L煌焦油藍(lán)ACD溶液?！静僮鳌?.于小試管中滴加1滴煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液或煌焦油藍(lán)ACD溶液。2.加入末梢血或靜脈血2滴于上述試管中，混勻。3.靜置15～20min后，取用1滴制成薄片。4.油鏡下檢查1000個(gè)紅細(xì)胞中網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)，以百分率或絕對(duì)值報(bào)告?！靖阶ⅰ?.活體染色時(shí)間不能過(guò)短，室溫低時(shí)，放37℃2.網(wǎng)織紅細(xì)胞也可用Miller窺盤計(jì)數(shù)法、熒光染色或流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)。

嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計(jì)數(shù)【標(biāo)本】末梢血?！痉椒ā堪俜钟?jì)數(shù)法?！驹噭?.甲醇；2.堿性亞甲基藍(lán)染液（保存2～3周）?！静僮鳌?.按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。2.用堿性亞甲基藍(lán)染液染色1～2min，水洗待干。3.用油鏡計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞中嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，以百分率報(bào)告?！靖阶ⅰ?.用堿性亞甲基藍(lán)染液染色后，紅細(xì)胞呈淺藍(lán)綠色，嗜堿性點(diǎn)彩呈深藍(lán)色。2.也可用瑞氏染色，嗜堿性點(diǎn)彩呈藍(lán)黑色。3.由于點(diǎn)彩紅細(xì)胞分布不勻，必要時(shí)擴(kuò)大計(jì)數(shù)紅細(xì)胞數(shù)。紅斑狼瘡細(xì)胞檢查【標(biāo)本】靜脈血。【方法】改良血塊法。【操作】1.抽取患者血液2～3ml，注于干燥試管內(nèi)，于室溫待凝。2.于凝固剛形成時(shí)，用竹簽將凝塊攪碎，并將殘存凝塊除去。3.以r/分鐘離心沉淀10分鐘，使白細(xì)胞聚集在同一層面，以利于狼瘡細(xì)胞形成。4.置37℃溫箱內(nèi)溫育2h5.取出白細(xì)胞層及其上下各少量，置紅細(xì)胞比積管中，以r/分鐘離心，沉淀10分鐘。6.吸去上層液，輕輕吸取白細(xì)胞層，制成薄片3～4張。7.以瑞氏染液染色、鏡檢?！靖阶ⅰ?.整個(gè)操作時(shí)間不能超出3h。2.注意與果餡細(xì)胞鑒別。一氧化碳血紅蛋白定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】末梢血?！驹噭?0g/LNaOH?！静僮鳌?.取試管2支，各加蒸餾水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人對(duì)照血3滴，混勻。此時(shí)，如患者血中有一氧化碳，則血液呈櫻桃紅色。2.每管各加50g/LNaOH1滴，輕輕混合，正常對(duì)照管呈綠褐色，如患者血液中有一氧化碳血紅蛋白，則溶血液仍呈櫻桃紅色，為陽(yáng)性；如與正常對(duì)照色澤一致為陰性?！靖阶ⅰ?.觀察成果須及時(shí)，否則櫻桃紅色逐步退去，不易分辨。2.本實(shí)驗(yàn)敏感性較差，血液中一氧化碳含量到一定程度時(shí)才顯陽(yáng)性。如患者事先已采用通氣方法，血中一氧化碳含量下降，實(shí)驗(yàn)可陰性。但臨床癥狀、體征仍可能存在。（徐珍貴朱炎）第二節(jié)體液及排泄物檢查尿液檢查尿常規(guī)檢查【標(biāo)本】新鮮尿液?！痉椒ā炕瘜W(xué)試帶法?！驹噭扛餍吞?hào)尿液化學(xué)分析儀配套試帶。【操作】詳見(jiàn)自己實(shí)驗(yàn)室的尿液化學(xué)分析儀使用手冊(cè)。【附注】1.尿常規(guī)檢查使用尿液化學(xué)分析儀，現(xiàn)在能進(jìn)行8～10項(xiàng)檢測(cè)（PH、蛋白、葡萄糖、酮體、隱血、尿膽紅素、尿膽素原、亞硝酸鹽、比重、白細(xì)胞）。這些項(xiàng)目亦有對(duì)應(yīng)的手工辦法，詳見(jiàn)有關(guān)資料。2.必須理解所用試帶各膜塊注意事項(xiàng)、藥品干擾。3.要注意尿液化學(xué)分析儀測(cè)定成果與手工法的差別，必要時(shí)用手工法復(fù)查。4.尿液化學(xué)分析儀檢測(cè)僅是一種過(guò)篩手段，當(dāng)?shù)鞍?、隱血、白細(xì)胞等出現(xiàn)異常成果（如尿蛋白“＋”或以上）時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鏡檢。5.尿液顏色、透明度等普通性狀異常時(shí)也應(yīng)報(bào)告。

本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性檢查【標(biāo)本】新鮮尿液。【方法】熱沉淀反映法?！驹噭?.200g/L2.2mol/L醋酸鹽緩沖溶液（pH4.9±0.1）。【操作】1.先將尿液用磺基水楊酸法作蛋白定性檢查，如呈陰性反映，則可認(rèn)為尿液標(biāo)本中本－周氏蛋白陰性。2.取透明尿液4ml于試管中，再加入醋酸鹽緩沖液1ml，混勻后，放置56℃水浴中15分鐘。如有渾濁或出現(xiàn)沉淀，再將試管放入沸水中，煮沸3分鐘，觀察試管中渾濁或沉淀的變化，如渾濁變清、渾濁削弱或沉淀減少，均提示本-周氏蛋白陽(yáng)性。若煮沸后，渾濁增加或沉淀增多，表明此尿液中尚有其它蛋白質(zhì)，此時(shí)應(yīng)將試管從沸水中取出，立刻過(guò)濾。如濾液開(kāi)始透明，溫度下降后渾濁，再煮沸時(shí)又透明，提示本-【附注】1.過(guò)多的本-周氏蛋白，在90℃2.煮沸過(guò)濾除去尿中白、球蛋白時(shí)，動(dòng)作要快速，并需保持高溫，否則本-周氏蛋白也會(huì)濾去。肌紅蛋白定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮尿液?！驹噭?.10g/L鄰甲聯(lián)苯胺（о-tolidine2.過(guò)氧化氫醋酸溶液；3.硫酸銨粉末?！静僮鳌?.首先測(cè)試尿液中有無(wú)血紅素的存在，即依次加入新鮮尿液4滴，鄰甲聯(lián)苯胺溶液2滴，混和后，加入過(guò)氧化氫醋酸溶液3滴，如有藍(lán)色或藍(lán)綠色出現(xiàn)，表達(dá)尿中有Hb或/及Mb的存在。2.離心或過(guò)濾使尿液透明，吸取5ml，加入硫酸銨粉末2.8g，使之溶解混合，約為80%飽和度，靜置5分鐘，用濾紙過(guò)濾。取濾液重復(fù)測(cè)試有無(wú)血紅素存在，如仍有，表達(dá)Mb陽(yáng)性。如不顯藍(lán)色，表達(dá)血紅素已被硫酸銨沉淀，為Hb陽(yáng)性。【附注】1.標(biāo)本必須新鮮，并避免激烈攪拌。2.本法為過(guò)篩實(shí)驗(yàn)，在少數(shù)正常人中可出現(xiàn)假陽(yáng)性。尿含鐵血黃素定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮尿液?！痉椒ā苛_斯（Rous）法【試劑】1．20g/L2．3%鹽酸?！静僮鳌?.取混勻的新鮮尿液15ml，以r/min離心5min，傾去上清液。2.在沉渣中加入新鮮配制的20g/L亞鐵氰化鉀水溶液及3%鹽酸液各2ml，充足混勻，室溫靜置10min。3.再離心沉淀，取沉淀物涂片，加蓋玻片后用高倍鏡（必要時(shí)用油鏡）檢查。4.如見(jiàn)有分散或成堆藍(lán)色閃光顆粒（直徑1～3um）即為陽(yáng)性，如在細(xì)胞內(nèi)則更為可信。【附注】1.全部試管、玻片、試劑均應(yīng)避免鐵劑污染，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。2.普通應(yīng)做陰性對(duì)照，如亞鐵氰化鉀與鹽酸混和后即顯深藍(lán)色，表達(dá)試劑已污染高鐵，不適宜再用。

尿乳糜定性檢查【標(biāo)本】新鮮尿液。【試劑】1.乙醚（AR）；2.蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液?！静僮鳌?.取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振搖后，使脂肪溶于乙醚。靜置數(shù)分鐘后，r/min離心5min。2.吸取乙醚與尿液的界面層涂片，加蘇丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩紅染色液1滴。3.鏡檢觀察與否有紅色脂肪小滴。【附注】1.尿液中加少量飽和氫氧化鈉，再加乙醚，有助于澄清。2.將分離的乙醚層隔水蒸干，若留有油狀沉淀，也可加蘇丹Ⅲ，鏡檢證明有無(wú)脂肪小滴。

尿膽色素原定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮尿液?！驹噭?.對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑；2.飽和醋酸鈉溶液；3.氯仿；4.正丁醇。【操作】1.在試管中，加入尿標(biāo)本2ml及對(duì)二甲氨基苯甲醛試劑2ml，混合。2.立刻加飽和醋酸鈉溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振搖混合后，上層水溶液呈紅色者為陽(yáng)性反映。3.陽(yáng)性成果應(yīng)用下法證明：如尿膽原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿膽原，應(yīng)多次用氯仿抽提，直至氯仿層呈淡粉紅色或無(wú)色為止，再觀察上層水溶液色澤。如上層水溶液為紅色時(shí)，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈紅色則證明尿中膽色素元為陽(yáng)性?！靖阶ⅰ?.醋酸鈉溶液必須為飽和液。2.當(dāng)尿膽色素原濃度太高時(shí)，應(yīng)將尿標(biāo)本稀釋25～100倍。3.尿液必須新鮮，不能久置。

尿苯丙酮酸定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮尿液?！痉椒ā咳然F法?！驹噭?.100g/L2.磷酸鹽沉淀劑。【操作】1.尿液4ml加磷酸鹽沉淀劑1ml，混勻，靜置3min，如出現(xiàn)沉淀，可用濾紙過(guò)濾或離心除去。2.濾液中加入濃鹽酸2～3滴和100g/L三氯化鐵溶液2～3滴，每加1滴立刻觀察顏色變化。以尿液顯藍(lán)綠色并持續(xù)2~4min，為陽(yáng)性。【附注】1.尿中若含酚類藥品（如水楊酸制劑）及氯丙嗪，也可與氯化鐵結(jié)合顯色，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)停用這類藥品。膽紅素也可造成假陽(yáng)性。2.小兒出生后6周內(nèi)不易查出。故于出生6周后檢查為宜。3.大多數(shù)苯丙酮尿癥患者的尿液可出現(xiàn)陽(yáng)性。但約1/4～1/2病例可能會(huì)漏檢4.亦可采用2，4-二硝基苯肼法。

尿沉渣檢查【標(biāo)本】新鮮尿液（最佳采集清晨中段尿）?！痉椒ā匡@微鏡檢查法?！静僮鳌?.取刻度離心管，倒入混合后的新鮮尿液10ml，1500r/min離心5min。2.棄去上層清液，留下0.2ml沉渣，輕搖離心管，使尿沉渣有形成分充足混勻。3.取尿沉渣0.02ml，滴在載玻片上，用18mm×18mm的蓋玻片覆蓋。4.鏡檢觀察，用10×10鏡頭，觀察其中有形成分的全貌及管型。用10×40鏡頭觀察鑒定細(xì)胞成分及計(jì)算數(shù)量，應(yīng)觀察10個(gè)視野所見(jiàn)最低和最高值，統(tǒng)計(jì)成果。管型用高倍鏡鑒定，但計(jì)數(shù)數(shù)量按低倍鏡觀察20個(gè)視野，算出一種視野的平均值，統(tǒng)計(jì)成果。尿結(jié)晶和鹽類數(shù)量以每一高倍視野＋、2＋、3＋、4＋報(bào)告。【附注】1.清晨空腹第一次尿（普通狀況應(yīng)采集中段尿），應(yīng)在1h內(nèi)送檢。2.見(jiàn)到多個(gè)上皮細(xì)胞也應(yīng)報(bào)告，報(bào)告方式參考白細(xì)胞。3.亦可采用染色尿沉渣鏡檢。

尿沉渣定量檢查【標(biāo)本】新鮮晨尿?！痉椒ā恳恍r(shí)尿沉渣計(jì)數(shù)法?！静僮鳌?.標(biāo)本收集：患者先排尿棄去，精確收集3h尿液于干燥容器內(nèi)送檢（標(biāo)本留取時(shí)間5:30～8:30）。2.精確測(cè)量3h尿量，充足混合。取混勻尿液10ml，置刻度離心管中，1500r/min離心5min，用吸管吸棄上層尿液9ml，留下1ml，充足混勻。吸取混勻尿液1滴，注于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)。細(xì)胞共數(shù)10個(gè)大方格，管型共數(shù)20個(gè)大方格。最后計(jì)算出紅細(xì)胞/h、白細(xì)胞/h、管型/h。【附注】1.尿液應(yīng)新鮮，PH應(yīng)在6下列。2.尿液比重最佳在1.026以上。3.如尿液中含多量磷酸鹽時(shí)，應(yīng)加少量稀醋酸液（切勿加多），使其溶解；含大量尿酸鹽時(shí)，應(yīng)加溫使其溶解。4.亦可采用尿沉渣定量分析板或尿沉渣自動(dòng)分析儀進(jìn)行尿沉渣定量檢查，詳見(jiàn)有關(guān)資料。

絨毛膜促性腺激素檢測(cè)【標(biāo)本】新鮮尿液。【方法】金標(biāo)抗體檢測(cè)法。【操作】見(jiàn)試劑盒闡明書?！靖阶ⅰ咳糍|(zhì)控點(diǎn)和測(cè)定點(diǎn)均不呈現(xiàn)紅色，表達(dá)試劑失效。

糞便檢查糞便的顯微鏡檢查【標(biāo)本】新鮮糞便。【方法】直接涂片鏡檢法。【操作】1.干凈玻片上加等滲鹽水1～2滴，選擇糞便的不正常部分，或挑取不同部位的糞便做直接涂片（最佳取大玻片，制成涂片后，應(yīng)覆以蓋片。涂片的厚度以能透過(guò)印刷物筆跡為準(zhǔn)）檢查。2.在涂片中如發(fā)現(xiàn)疑似包囊，則在該涂片上滴加1滴碘液，在高倍鏡下認(rèn)真鑒別，如仍不能決定時(shí)，可取全量糞便濃縮法檢查。

隱血實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮糞便?！痉椒ā棵庖邔W(xué)檢測(cè)法?！静僮鳌咳∫黄蓛舾稍锏妮d玻片，滴加2～3滴蒸餾水，取糞便少量，調(diào)成均勻混懸液。取糞便隱血試紙條，按闡明書操作，將試紙條的反映端浸濕。在5min內(nèi)觀察成果。以反映線及質(zhì)控線均呈藍(lán)色帶為陽(yáng)性?！靖阶ⅰ?.若兩條線均不顯色，闡明試紙條失效。2.本法由于間斷性出血或出血在糞便中分布不均等因素，可造成假陰性成果。3.本法由于藥品等因素，對(duì)正常人檢查有時(shí)會(huì)得到陽(yáng)性成果。4.亦可采用化學(xué)試帶法、鄰甲聯(lián)苯胺法、愈創(chuàng)木酯法等。收集標(biāo)本前3日應(yīng)禁食動(dòng)物性食物及富含葉綠素食物、鐵劑、中藥。但本法不受動(dòng)物血紅蛋白的干擾，實(shí)驗(yàn)前不須禁食肉類。糞膽素檢查【標(biāo)本】新鮮糞便?！痉椒ā柯然吖蠓蟹ā！驹噭匡柡吐然吖芤骸！静僮鳌?.于小試管內(nèi)置糞便一小塊，加飽和氯化高汞溶液數(shù)毫升。2.將糞塊調(diào)勻，加熱煮沸3min，立刻觀察顏色反映。【附注】1.成果不易鑒定時(shí)，應(yīng)注意糞便顏色，必要時(shí)以鹽水替代試劑做空白對(duì)照。2.當(dāng)糞便顆粒經(jīng)煮沸后如有紅色又有綠色出現(xiàn)，闡明標(biāo)本內(nèi)既含糞膽素又含膽紅素，常見(jiàn)于腸炎、腹瀉等。

腦脊液檢查潘氏（Pandy）球蛋白定性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】新鮮腦脊液?！驹噭?%苯酚溶液（棕色瓶?jī)?nèi)保存）?！静僮鳌咳≡噭?～3ml，置于小試管內(nèi)，用毛細(xì)滴管滴入腦脊液1～2滴，襯以黑色背景，立刻觀察成果，報(bào)告陰性或陽(yáng)性及陽(yáng)性的程度。

細(xì)胞計(jì)數(shù)【標(biāo)本】新鮮腦脊液?！驹噭?.細(xì)胞計(jì)數(shù)板；2.紅細(xì)胞稀釋液；3.冰乙酸；4.1%冰乙酸?！静僮鳌?.細(xì)胞總數(shù)：（1）澄清腦脊液：混勻后用滴管直接滴入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)10個(gè)大方格內(nèi)紅、白細(xì)胞數(shù)，其總和即為每ul的細(xì)胞數(shù)。（如細(xì)胞較多，可計(jì)數(shù)一大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)×10）。（2）渾濁或帶血腦脊液：用血紅蛋白吸管吸取混勻的腦脊液20ul，加入含紅細(xì)胞稀釋液0.38ml的小試管內(nèi)，混勻后滴入計(jì)數(shù)池內(nèi)，用低倍鏡計(jì)數(shù)4個(gè)大方格中的細(xì)胞總數(shù)，再乘以50即為每ul腦脊液的細(xì)胞總數(shù)。2．白細(xì)胞數(shù)：（1）非血性標(biāo)本：小試管內(nèi)放入冰乙酸1～2滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使內(nèi)壁沾有冰乙酸后傾去之，然后滴加混勻的腦脊液3～4滴，數(shù)分鐘后，混勻充入計(jì)數(shù)池，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。（2）血性標(biāo)本：將混勻的腦脊液用1%冰乙酸溶液稀釋后，按細(xì)胞總數(shù)操作中的紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)，成果×稀釋倍數(shù)。3．細(xì)胞分類：（1）直接分類法：白細(xì)胞計(jì)數(shù)后，將低倍鏡換成高倍鏡，直接在高倍鏡下根據(jù)細(xì)胞核的形態(tài)分別計(jì)數(shù)單個(gè)核細(xì)胞（涉及淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞）和多核細(xì)胞，應(yīng)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，并以百分率表達(dá)。若白細(xì)胞少于100個(gè)，應(yīng)直接寫出單核、多核細(xì)胞的具體數(shù)字。（2）染色分類法：如直接分類不易辨別細(xì)胞時(shí)，可將腦脊液離心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清1滴，推片制成均勻薄膜，置室溫或37℃如見(jiàn)有不能分類的細(xì)胞，應(yīng)另行描述報(bào)告。【附注】1.腦脊液常規(guī)涉及普通性狀檢查、潘氏（Pandy）球蛋白定性實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞計(jì)數(shù)。2.計(jì)數(shù)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行。3.細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)注意新型隱球菌與白細(xì)胞的區(qū)別。4.計(jì)數(shù)池用后，應(yīng)用75%乙醇消毒60min。漿膜腔積液檢查漿膜粘蛋白定性實(shí)驗(yàn)（Rivalta反映）【標(biāo)本】新鮮漿膜腔積液?！驹噭勘姿??！静僮鳌咳?00ml量筒，加蒸餾水100ml，滴入冰醋酸0.1ml（PH3～5），充足混勻，靜止數(shù)分鐘，將穿刺液靠近量筒液面逐滴輕輕滴下，在黑色背景下，觀察白色霧狀沉淀的發(fā)生及其下降速度等，報(bào)告陰性或陽(yáng)性及陽(yáng)性的程度。細(xì)胞學(xué)檢查【標(biāo)本】新鮮漿膜腔積液?！静僮鳌?.細(xì)胞總數(shù)及有核細(xì)胞計(jì)數(shù)辦法基本與腦脊液同，漏出液中有核細(xì)胞數(shù)量常在100×106/L下列；滲出液中有核細(xì)胞數(shù)量較多，常在500×106/L以上。2.細(xì)胞分類：穿刺液應(yīng)在抽出后立刻離心，用沉淀物涂片后以瑞氏染色法進(jìn)行分類。必要時(shí)制備稍厚涂片，在干燥前放置乙醚乙醇等量混合液中固定30min，用蘇木素-伊紅（HE）或巴氏法染色查找癌細(xì)胞。精液檢查精子活動(dòng)率【標(biāo)本】新鮮精液。【操作】取新鮮標(biāo)本混勻后，在溫?zé)岵Ｆ嫌酶弑剁R觀察100個(gè)精子，計(jì)數(shù)活動(dòng)精子與不活動(dòng)精子的比例，計(jì)算精子活動(dòng)的百分率?！靖阶ⅰ咳缡覝氐陀?0℃時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本先放入37℃溫育5～10min精子活力【標(biāo)本】新鮮精液。【操作】取上述新鮮濕片標(biāo)本，觀察精子的活動(dòng)力，以0級(jí)至Ⅳ級(jí)報(bào)告。精子計(jì)數(shù)【標(biāo)本】新鮮精液?！驹噭烤酉♂屢骸！静僮鳌?.于小試管內(nèi)加精子稀釋液0.38ml，吸液化精液20ul，加入稀釋液內(nèi)搖勻。2.充足搖勻后，滴入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置1～2min，待精子下沉后，以精子頭部作為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)數(shù)。3.如精子數(shù)少，可計(jì)數(shù)2個(gè)大方格內(nèi)精子數(shù)，數(shù)得總數(shù)乘10萬(wàn)即為每毫升精液內(nèi)精子數(shù)，再換算成×109/L報(bào)告。4.如精子數(shù)多，可計(jì)數(shù)5個(gè)中方格內(nèi)精子數(shù)，加6個(gè)零，即為每ml精液內(nèi)精子數(shù)再換算成×109/L報(bào)告。【附注】1.收集精液前應(yīng)避免性生活3~7天，精液宜用清潔干燥之小瓶收集，避孕套內(nèi)的精液不適宜采集。收集精液標(biāo)本后應(yīng)在一小時(shí)內(nèi)檢查，冬季應(yīng)注意保溫。2.出現(xiàn)一次異常成果，應(yīng)隔一周后復(fù)查，重復(fù)查2～3次方能得出比較對(duì)的的成果。3.如低倍鏡、高倍鏡檢查均無(wú)精子，應(yīng)將精液離心沉淀后再涂片檢查，如兩次均無(wú)精子，報(bào)告“無(wú)精子”。

精子形態(tài)觀察【標(biāo)本】新鮮精液。【試劑】革蘭或瑞氏染液。【操作】革蘭或瑞氏染色后用油鏡觀察，報(bào)告異常精子的比例。

前列腺液檢查【標(biāo)本】新鮮前列腺液（臨床醫(yī)師作前列腺按摩術(shù)后，采集標(biāo)本于清潔玻片上，立刻送檢）。【操作】1.肉眼觀：統(tǒng)計(jì)液體顏色、與否混有血液、粘稠度（有無(wú)膿塊）。2.濕片鏡檢：高倍鏡下觀察白細(xì)胞、紅細(xì)胞、卵磷脂小體，另一方面為上皮細(xì)胞、精子、淀粉樣體等，必要時(shí)革蘭染色查細(xì)菌。陰道分泌物檢查【標(biāo)本】陰道分泌物。【操作】1.清潔度：取陰道分泌物，用生理鹽水涂片，高倍鏡檢查，根據(jù)所含白細(xì)胞（或膿細(xì)胞）、上皮細(xì)胞、桿菌、球菌的多少，分成Ⅰ～Ⅳ度。2.滴蟲檢查：在濕片鏡下如見(jiàn)梨形，比白細(xì)胞大2倍，頂端有鞭毛4根，在25～42℃溫度下可活動(dòng)的滴蟲（在嚴(yán)寒天氣，標(biāo)本要采用保溫方法），報(bào)告之。

3.胃液檢查基礎(chǔ)胃酸分泌量（BAO）及最大胃酸分泌量（MAO）測(cè)定【標(biāo)本】胃液。【操作】1.先將晨間空腹殘存胃液抽空棄去。持續(xù)抽取1小時(shí)胃液放入瓶?jī)?nèi)，作為一種標(biāo)本計(jì)胃液量。用酸度計(jì)精確測(cè)定氫離子濃度（也可用pH紙測(cè)定，或做胃酸濃度滴定）。2.一次皮下注射五肽胃泌素（Pentagastrin）6ug/kg，注后每15min收集一份標(biāo)本，持續(xù)抽4次，分別用上法測(cè)胃液量、胃酸氫離子濃度。3.根據(jù)上述測(cè)定值，分別計(jì)算出BAO及MAO值。pH值測(cè)定【標(biāo)本】胃液?！静僮鳌靠上扔胮H試紙測(cè)定，凡pH值＞3者，用pH計(jì)測(cè)定氫離子濃度。十二指腸引流液及膽汁檢查【標(biāo)本】膽汁及十二指腸引流液。【操作】1.按照膽汁來(lái)源不同，分為甲、乙、丙、丁四管（在容器上必須注明）。2.觀察各管膽汁的顏色、透明度、粘稠度。3.測(cè)定酸堿度，每管分別統(tǒng)計(jì)。4.高倍鏡下鏡檢，注意細(xì)胞、寄生蟲、結(jié)晶等存在的狀況。痰液檢查顯微鏡檢查【標(biāo)本】痰液。【操作】選擇膿樣、干酪樣或帶膿樣血液部分，取1小塊置玻片上，直接與生理鹽水混合，涂成薄片，加蓋片后輕壓之，用低倍鏡及高倍鏡檢查。注意有無(wú)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、彈力纖維、枯什曼螺旋體、夏科-雷登結(jié)晶、膽紅素結(jié)晶、硫磺樣顆粒（放線菌塊）、寄生蟲卵（可見(jiàn)蛔蟲卵、肺吸蟲卵）、痢疾阿米巴、真菌孢子、心力衰竭細(xì)胞、載碳細(xì)胞、癌細(xì)胞等。嗜酸性粒細(xì)胞檢查【標(biāo)本】痰液?！驹噭咳鹗匣蛞良t-美藍(lán)染色液?！静僮鳌咳√狄鹤鲋苯油科稍锖笥萌鹗匣蛞良t-美藍(lán)染色液染色，油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞，報(bào)告嗜酸性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。（徐珍貴朱炎）第三節(jié)血栓與止血的檢查血管壁與內(nèi)皮細(xì)胞檢查出血時(shí)間（BT）出血時(shí)間檢測(cè)是指皮膚受特定條件的外傷后，出血自行停止所需的時(shí)間。此過(guò)程反映皮膚毛細(xì)血管與血小板互相作用，涉及血小板粘附，血小板活化和釋放以及血小板聚集等反映。1.出血時(shí)間“測(cè)定器法”自肘前窩凹下二橫指處，經(jīng)常規(guī)消毒后，使刀片由“測(cè)定器”內(nèi)刺入皮膚，啟動(dòng)秒表，每隔半分鐘用干凈濾紙吸干流出的血液，直至出血自然停止，按停秒表，統(tǒng)計(jì)出血時(shí)間。2.Duke法，自耳垂或指尖取血?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【注意事項(xiàng)】測(cè)定器法：1.采用部位應(yīng)保暖，血液應(yīng)自動(dòng)流出。2.由于刺入皮膚的刀片長(zhǎng)度和深度均固定，故“測(cè)定器法”的成果較為精確。3.濾紙吸干流出血液時(shí)，應(yīng)避免與傷口接觸。4.實(shí)驗(yàn)前1周內(nèi)不能服用抗血小板藥品，如阿司匹林等，以免影響成果。阿司匹林耐量實(shí)驗(yàn)（ATT）口服少量阿司匹林后，可使某些血栓和出血患者的出血時(shí)間延長(zhǎng)。【辦法與操作】定量口服阿司匹林后2h，測(cè)定出血時(shí)間，當(dāng)成果可疑時(shí)，可于4h后重復(fù)測(cè)定出血時(shí)間一次，詳見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！驹噭堪⑺酒チ制?.3g/片）?！靖阶ⅰ?.服藥前出血時(shí)間明顯延長(zhǎng)者，或臨床有明顯出血癥狀者，或有阿司匹林禁忌證患者，不適宜作此實(shí)驗(yàn)。2.阿司匹林有引發(fā)出血副作用，對(duì)準(zhǔn)備手術(shù)或術(shù)后1周以內(nèi)及血友病患者忌作本實(shí)驗(yàn)。內(nèi)皮細(xì)胞功效實(shí)驗(yàn)血管性假血友病因子抗原（vWF:Ag）測(cè)定（ELISA法）【標(biāo)本】自靜脈取血1.0~1.5ml，注入抗凝管〔30mmol/L枸緣酸-枸椽酸鈉緩沖液（PH5.0）〕內(nèi)，（1:9v/v）充足混勻，在1h內(nèi)分離血漿，立刻測(cè)定或放-20℃1【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【附注】1.對(duì)血漿中血管性假血友病因子抗原含量過(guò)高的標(biāo)本，應(yīng)作稀釋后再測(cè)定。2.凡ELISA檢測(cè)中須注意的問(wèn)題均要重視。3.除此法外，還可選用免疫火箭電泳法或單抗酶聯(lián)免疫吸附法。6-酮－前列腺素Fla（6-酮－PGFla）測(cè)定【標(biāo)本】采用血漿標(biāo)本。【辦法與操作】ELISA法?，F(xiàn)有商品試劑盒出售，嚴(yán)格按闡明書環(huán)節(jié)操作。【附注】1.如第二抗體為羊抗兔，則不適宜測(cè)定兔血標(biāo)本。2.除ELISA法外，尚有放射免疫法。血小板數(shù)量和功效檢查血小板計(jì)數(shù)和平均血小板體積測(cè)定血小板計(jì)數(shù)：目視計(jì)數(shù)法?！緲?biāo)本】末梢血或抗凝靜脈血?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！驹噭?.草酸銨法稀釋液。2.許汝和稀釋液。【附注】1.血小板稀釋液要清潔。防微粒和細(xì)菌污染。試管和吸管也應(yīng)清潔、干凈。2.針刺應(yīng)稍深，使血流暢通。拭去第一滴血后，首先采血作血小板檢測(cè)，動(dòng)作要快，避免血小板聚集和破壞。采用標(biāo)本后盡快計(jì)數(shù)。3.血液稀釋液充足混勻后，滴入計(jì)數(shù)池內(nèi)后，要靜置10~15min。室溫高時(shí)注意保持計(jì)數(shù)池周邊的濕度，以免水分蒸發(fā)。4.計(jì)數(shù)時(shí)光線要適中，注意有折光性的血小板與雜質(zhì)灰塵相區(qū)別，附在血細(xì)胞旁邊的血小板也要注意，不要遺漏。血小板計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)【標(biāo)本】末梢血。【辦法與操作】使用血小板計(jì)數(shù)儀及與其相匹配的稀釋液。操作詳見(jiàn)儀器使用闡明書。平均血小板體積（MPV）測(cè)定【標(biāo)本】根據(jù)儀器的規(guī)定用末稍血或靜脈取血注入抗凝管（EDTA.Na2或肝素）【辦法與操作】自動(dòng)化血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀均可檢測(cè)血小板功效檢查血小板粘附實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】自靜脈取血1.0~1.5ml。【方法】1.玻珠柱法：（1）操作：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。（2）注意事項(xiàng)：1）取血過(guò)程必須順利，掌握血液通過(guò)玻珠柱的速度，流速太快，粘附率減少，流速太慢會(huì)使粘附率增高。2）玻珠柱為一次性用品，用后即棄去。3）待用玻珠柱應(yīng)置于干燥器中貯存，受潮后粘附率下降。2.玻璃濾器法：【標(biāo)本】自靜脈取血1.5ml。【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。血小板聚集實(shí)驗(yàn)（PAgT）【標(biāo)本】自肘靜脈取血4.5ml注入于含0.5ml109mmol/L枸椽酸鈉的硅化離心管內(nèi)，充足混勻。【試劑】1.富含血小板血漿（PRP）及貧含血小板血漿（PPP）。2.血小板聚集誘導(dǎo)劑ADP、腎上腺素、膠原、瑞斯托霉素（Ristocetin）等?！巨k法與操作】PAgT比濁法，按《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）環(huán)節(jié)操作。【注意事項(xiàng)】1.血標(biāo)本中pH6.8~8.5之間時(shí)，可測(cè)得最佳成果。pH＜6.4或＞10.0時(shí)，可使聚集克制或消失。2.阿司匹林、潘生丁、肝素、雙香豆素等可克制聚集，特別阿司匹林克制聚集作用時(shí)間可持續(xù)1周。3.采血后標(biāo)本應(yīng)放在15~25℃下，切忌冰箱內(nèi)保存，并在3h凝血因子檢查全血凝固時(shí)間檢查（CT）【標(biāo)本】靜脈取血3ml?！巨k法與操作】試管法、硅管法操作參見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】1.靜脈取血要一針見(jiàn)血，盡量減少組織液和空氣混入。2.水浴箱溫度要恒定，過(guò)高或過(guò)低，可影響成果。活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定（APTT）【標(biāo)本】自靜脈取血，用109mmol/L枸椽酸鈉作1:9抗凝?！驹噭渴惺鄢商自噭！巨k法與操作】按試劑及有關(guān)儀器闡明書規(guī)定進(jìn)行?！靖阶ⅰ?.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)檢測(cè)，最遲不超出2h。2.分離血漿應(yīng)在3000r/min，離心10min。3.本實(shí)驗(yàn)較試管法全血凝血時(shí)間敏感，能檢出因子Ⅷ：C＜25％輕型血友病。血漿凝血酶原時(shí)間測(cè)定（PT，一期法）【標(biāo)本】靜脈血1.8ml，用109mmol/L枸椽酸鈉0.2ml抗凝?！驹噭?.組織凝血活酶浸出液；2.0.025mol/LCaCl2【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】1.采血后宜在1h內(nèi)完畢，置冰箱4℃保存,不應(yīng)超出4h，-20℃下可放置2周，-702.水溫箱控制在37℃±1簡(jiǎn)易凝血活酶生成實(shí)驗(yàn)（STGT）【標(biāo)本】取全血0.04ml加5ml蒸餾水，混勻，即成溶血液，備用?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）纖溶系統(tǒng)檢查優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間測(cè)定（ELT）【標(biāo)本】采用靜脈血1.8ml注入含0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉液中，混勻。【試劑】1.109mmol/L枸櫞酸鈉液；2.1%醋酸液；3.（pH9.0）硼酸鹽緩沖液；4.0.025mol/LCaCl2【辦法與操作】加鈣法。操作參見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）。【注意事項(xiàng)】1.采血時(shí)，止血帶不適宜扎得過(guò)緊，不得超出5min。2.觀察溶解標(biāo)本以不見(jiàn)絮狀物為準(zhǔn)。3.當(dāng)纖溶極度亢進(jìn)時(shí)，體內(nèi)纖酶原基本被消耗盡時(shí)，本實(shí)驗(yàn)可呈假陰性。組織纖溶酶原激活物測(cè)定（t-pA:A）【標(biāo)本】自靜脈采血?！巨k法與操作】發(fā)色底法。操作見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【注意事項(xiàng)】1.采血時(shí)最佳不用止血帶，加壓后會(huì)引發(fā)t-pA進(jìn)入血液，取血后盡快在低溫分離血漿。2.標(biāo)本必須酸化解決，否則受纖溶酶原激活克制物（PAI）的影響較大。纖溶酶原活性測(cè)定（PLG:A）【標(biāo)本】自靜脈取血0.9ml,加0.1ml109mmol/l枸櫞酸鈉液混勻?！驹噭?.0.05mol/LTris緩沖液（PH7.42.尿激酶。3.50%（v/v）甘油溶液。4.50%（v/v）醋酸液。5.正常人混合血漿。6.國(guó)產(chǎn)發(fā)色底物140450（上海生化所東風(fēng)試劑公司產(chǎn)品）?！巨k法與操作】發(fā)色底物法。操作參見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。D-二聚體測(cè)定高凝狀態(tài)的患者，血栓性疾病和彌漫性血管內(nèi)凝血時(shí)，血漿D-二聚體明顯升高是診療DIC的重要根據(jù)。【標(biāo)本】采靜脈血1~1.5ml，注入抗凝管（枸櫞酸鈉，EDTA.Na2及肝素）內(nèi)混勻。【辦法、試劑與操作】ELISA法，操作嚴(yán)格按商品出售的試劑盒闡明書進(jìn)行。【注意事項(xiàng)】1.使用的抗凝劑量，不應(yīng)超出血總體積10%。2.待檢血漿在室溫保存8h或4℃4天內(nèi)，D-二聚體含量基本不變，若需長(zhǎng)久保存，可置-20℃保存，操作時(shí)置于3.市售D-二聚體乳膠試劑盒及金標(biāo)試劑盒使其檢測(cè)更為方便，但不能定量。血漿魚精蛋白副凝固時(shí)間（3P）實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】自靜脈抽取1.0~1.5ml血，注入枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，混勻?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！驹噭?.109mmol/L枸櫞酸鈉液。2.10g/L硫酸魚精蛋白液（pH6.5）。【注意事項(xiàng)】1.本實(shí)驗(yàn)不適宜用草酸鹽、肝素或EDTA鹽作抗凝劑。2.抽血不順利、抗凝不完全、標(biāo)本保存于冰箱、實(shí)驗(yàn)時(shí)間已到未及時(shí)觀察成果等均可致假陽(yáng)性成果。3.水浴箱溫度太低或纖維蛋白原的含量過(guò)低，會(huì)出現(xiàn)假陰性成果。血清纖維蛋白降解產(chǎn)物（FDP）測(cè)定【標(biāo)本】采用無(wú)溶血的血清?！巨k法、試劑與操作】ELISA法。試劑現(xiàn)已有商品試劑盒供應(yīng)，操作按闡明書環(huán)節(jié)進(jìn)行。

循環(huán)抗凝物質(zhì)檢查凝血酶時(shí)間測(cè)定（TT）【標(biāo)本】自靜脈取血1~1.5ml，注入枸櫞酸鈉抗凝管內(nèi)，混勻?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）【試劑】1.109mmol/L枸櫞酸鈉液2.凝血酶溶液【附注】1.采血后宜在1h內(nèi)完畢，置冰箱內(nèi)保存不應(yīng)超出4h。2.肝素或EDTA.Na2抗凝血漿不適宜作本實(shí)驗(yàn)。血漿肝素或類肝素抗凝物質(zhì)檢查（甲苯胺藍(lán)糾正實(shí)驗(yàn)）【標(biāo)本】靜脈枸櫞酸鈉抗凝血。【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】本實(shí)驗(yàn)中加甲苯胺藍(lán)后，凝血酶時(shí)間縮短5s以上者，提示待檢血，有肝素或類肝素增多。蘄蛇酶時(shí)間測(cè)定（AT）【標(biāo)本】采靜脈血0.9ml加0.1ml（109mmol/L）枸椽酸鈉抗凝。【試劑】1.蘄蛇酶溶液0.5mg/支；2.109mmol/L枸椽酸鈉液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。（何金昌徐淑屏）第四節(jié)溶血性貧血的檢查紅細(xì)胞滲入脆性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】1.簡(jiǎn)易法，靜脈血為宜。2.比色法，用肝素抗凝管，抽取靜脈血1.0~1.5ml，混勻?！巨k法及操作與試劑】1.簡(jiǎn)易法：用配有6號(hào)針頭的干燥無(wú)菌注射器取靜脈血1.0~1.5ml，立刻滴入試管架上含有不同量的NaCL及蒸餾水的各管中，每管１滴，貧血患者可加2滴，搖勻，靜置，室溫2h，觀察成果。詳見(jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診療學(xué)上冊(cè)》。2.比色法：見(jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診療學(xué)上冊(cè)》。【附注】1.簡(jiǎn)易法：（1）試劑配制要精確，每次配制量不適宜過(guò)大，1~2個(gè)月內(nèi)需更換1次試劑。（2）如取耳垂血要使血液流出暢通，如靜脈血規(guī)定注射器干燥。（3）如用抗凝血，以去纖維蛋白或肝素抗凝血為適宜。（4）如開(kāi)始及完全溶血的成果不易判斷時(shí)，可離心后觀察。（5）地中海貧血的滲入脆性減少，需作低濃度NaCL液檢測(cè)。2.比色法：（1）如在室溫下實(shí)驗(yàn)，需在2小時(shí)內(nèi)比色結(jié)束。（2）血與NaCL緩沖液的PH值及溫度對(duì)檢查成果都有一定影響。紅細(xì)胞孵育后滲入脆性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】用肝素抗凝血1~1.5ml，混勻后備用?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版【試劑】9g/LNaCl磷酸鹽緩沖液（pH7.4）【附注】1.試劑及試管需消毒，試管需加塞。2.試管中PH及溫度必須恒定，pH變化0.1或溫度升高5℃紅細(xì)胞自體溶血實(shí)驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)是測(cè)定患者的紅細(xì)胞在自體血清中經(jīng)孵育后，自發(fā)發(fā)生的溶血程度?！驹噭?.100g/L葡萄糖（無(wú)菌）；2.等滲鹽水（無(wú)菌）；3.HiCN稀釋液；4.0.4mol/LATP【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ繎?yīng)嚴(yán)守?zé)o菌操作規(guī)程。熱溶血實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】靜脈全血?！巨k法與操作】以無(wú)菌干燥注射器取靜脈血2ml，取下針頭，緩緩地沿管壁注入消毒小試管中，避免產(chǎn)憤怒泡，加少量消毒石臘油覆蓋，37℃孵育24h【附注】1.注射器及試管要干凈，操作過(guò)程避免發(fā)生溶血。2.在孵育24h后，血塊仍未改收縮，可用小玻璃棒沿管壁輕輕分離之，然后再離心沉淀，觀察成果。酸溶血實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】取靜脈血5ml，取下針頭，將血沿瓶壁注入放有玻珠的三角燒瓶?jī)?nèi)，輕輕搖動(dòng)，使纖維蛋白析出，并附于玻璃珠內(nèi)，繼續(xù)搖轉(zhuǎn)至血液不凝止?！痉椒ā?.Ham's實(shí)驗(yàn)法。2.簡(jiǎn)易酸溶血實(shí)驗(yàn)法?！驹噭?.0.2mol/LHCL液。2.8.5g3與患者同型或AB型血清（最佳采用多人混合新鮮血清，以確保足夠的補(bǔ)體）?！静僮鳌恳?jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診療學(xué)》上冊(cè)?！靖阶ⅰ?.血清酸化后，試管須塞緊，否則二氧化碳逸出，可使血清酸度減少。2.抗凝劑會(huì)影響PH值，故不適宜用抗凝血漿，可自末梢取血10余滴，直接滴入鹽水中，混勻，離心棄去上清液，再配成50％紅細(xì)胞懸液。蔗糖水溶血實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】取枸櫞酸鹽或草酸鹽抗凝管，抽靜脈血1ml?！驹噭?2.4g/L蔗糖溶液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.所用儀器清潔干燥，以免溶血。2.若無(wú)蔗糖也可用葡萄糖替代。葡萄糖6－磷酸脫氫酶活性測(cè)定【標(biāo)本】取靜脈血0.5~1.0ml注入抗凝管（肝素、EDTA或ACD液抗凝管），混勻?！痉椒ā勘壬??！驹噭?.0.25mol/LTris-HCL緩沖液（pH7.42.0.154mol/LKCl。3.0.12mol/LMgCl4.0.00625mol/LG－6－PNa2（2mg/ml）。5.0.00625mol/LNADP（TPN）（5mg/ml）。6.氰化血紅蛋白試劑?！静僮鳌恳?jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診療學(xué)》上冊(cè)?！靖阶ⅰ啃迈r抗凝血（EDTA或ACD抗凝血），在4℃下保存，48高鐵血紅蛋白還原實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】采靜脈血2~2.5ml于含0.2ml枸櫞酸鈉（109mmol/L）試管內(nèi)，混勻?！驹噭?.0.18mol/L亞硝酸鈉和0.28mol/L2.0.4mmol/L3.0.02mol/L磷酸鹽緩沖液（PH7.44.109mmol/L枸櫞酸鈉液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.紅細(xì)胞比積低于30％時(shí)，高鐵血紅蛋白還原率顯暑減少，因此，須調(diào)節(jié)紅細(xì)胞與血漿比例為1：1后，再取標(biāo)本作實(shí)驗(yàn)。2.如采用ACD作抗凝劑，用量ACD與血之比為0.15：1。該抗凝血可保存1周。不適宜使用草酸鹽作抗凝劑，因其含有還原性。3.標(biāo)本不應(yīng)有凝塊或溶血。分光光度計(jì)的波長(zhǎng)應(yīng)精確，普通規(guī)定St比B大8倍以上。變性珠蛋白小體（Heinz小體）檢查【標(biāo)本】采用新鮮未梢血一滴。【方法】1.耐爾藍(lán)法。2.結(jié)晶紫法?！驹噭?.1.5g2.2.10g【操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版。紅細(xì)胞谷胱甘肽（GSH）含量及其穩(wěn)定性檢查【標(biāo)本】取靜脈血2.0~2.5ml，加入于抗凝管（肝素、EDTA.Na2或ACD抗凝劑），混勻?！痉椒ā?.還原型谷胱甘肽比色測(cè)定法。2.谷胱甘肽穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。還原型谷胱甘肽比色測(cè)定法：【試劑】1.0.3mol/LNa2HPO4液。2.1g/LEDTA.Na2液。3.沉淀劑：偏磷酸1.67g、EDTA.Na20.2g、NaCl30g4℃4.二硫代雙硝基苯甲酸（DTNBN）試劑。5.1.62mmol/LGSH貯存液。6.162umol/LGSH應(yīng)用液?！静僮鳌恳?jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.GSH相稱穩(wěn)定，標(biāo)本用ACD抗凝，置于冰箱內(nèi)，可貯存3周不影響成果。2.血液中GSH幾乎全部存在于紅細(xì)胞內(nèi)。故用PCV除以全血GSH得紅細(xì)胞GSH含量。谷胱甘肽穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):當(dāng)紅細(xì)胞內(nèi)G6PD缺少時(shí)，GSH含量明顯減少，因此，本實(shí)驗(yàn)可間接則知G6PD的含量。【標(biāo)本】取靜脈血2.0~2.5ml于抗凝管（ACD、枸櫞酸鈉、EDTA.Na2）中，混勻?！驹噭咳∫阴１诫?00mg，溶于1ml丙酮中，每管加0.05ml（含乙酰苯肼5mg），然后置于37℃【操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版。冷溶血實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】采靜脈血8ml，以玻璃珠去纖維蛋白后，制備血清和紅血球懸液。【辦法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ坎僮髦械?、第2管最佳在20℃血紅蛋白電泳檢查【標(biāo)本】采用末梢血或靜脈血1.0~1.5ml于EDTA.Na2抗凝管內(nèi)，混勻?！驹噭?.0.26mol/LTris緩沖液（pH9.1）（用于陽(yáng)極）。2.pH8.6巴比妥緩沖液（用于陰極）。3.醋纖薄膜浸泡液：用于陽(yáng)極和陰極的緩沖液等量混和。4.氨基黑10B染色液。5.漂洗液。6.0.4mol/LNaOH。7.透明液。8.或市售成套試劑盒?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）或嚴(yán)格按試劑盒和配套儀器的使用闡明書操作。血紅蛋白H包涵體檢查【標(biāo)本】取末梢血3~4滴加入于含0.5ml煌焦油藍(lán)液中?！驹噭?0g/L煌焦油藍(lán)液：煌焦油藍(lán)1g，枸櫞酸鈉0.4g溶于100ml生理鹽水中，貯于棕色瓶中，臨用前過(guò)濾?！静僮鳌恳?jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.HbH普通要在10min后在1h內(nèi)產(chǎn)生包涵體。其它不穩(wěn)定Hb形成Heinz小體，需更長(zhǎng)時(shí)間（3h或更長(zhǎng)）。2.網(wǎng)織紅細(xì)胞呈蜘蛛網(wǎng)狀，與紅細(xì)胞包涵體的顆粒狀不同需注意鑒別。血紅蛋白A2定量【標(biāo)本】自靜脈取血1.0~1.5ml，注入抗凝管（EDTANa2肝素）【辦法及操作與試劑】見(jiàn)《臨床實(shí)驗(yàn)診療學(xué)》上冊(cè)。Hb－F堿變性實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】采靜脈血1~2ml于抗凝管（肝素、EDTANa2、ACD液）內(nèi)，混勻?！驹噭?.0.083mol/L氫氧化鉀（PH12.7）。2.半飽和硫酸銨液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版?！靖阶ⅰ?.如濾液呈淡黃或淡紅色，可能為血紅蛋白含量高；但首先要檢查使用的堿液及酸性半飽和硫酸銨的質(zhì)量。因堿液的堿度局限性或酸性半飽和硫酸銨的濃度和酸度局限性，皆可引發(fā)濾液不呈水樣透明，而致檢測(cè)成果偏高。2.堿濃度必須精確，pH值必須不不大于12，校準(zhǔn)后最佳是小分裝密閉保存，使用量和作用時(shí)間都必須十分精確。3.酸性半飽和硫酸銨須配準(zhǔn)，pH應(yīng)為3.0，最佳小批量分裝。4.過(guò)濾的濾紙應(yīng)為化學(xué)實(shí)驗(yàn)用品，濾液必須澄清，透明，否則應(yīng)重新過(guò)濾１次或離心沉淀。5.實(shí)驗(yàn)用試管，吸管等儀器不可沾污酸堿。6.每次實(shí)驗(yàn)最佳重復(fù)做二份，用正常人血和臍帶血（Hb－F含量高）作對(duì)照實(shí)驗(yàn)。見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》第二版。不穩(wěn)定血紅蛋白過(guò)篩實(shí)驗(yàn)異丙醇實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】自靜脈取血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素、EDTA.Na2、ACD液），混勻?！驹噭?.17%（V/V）異丙醇液。2.Hb溶液：用四氯化碳抽提，不能用甲苯。【操作】取2ml17％異丙醇溶液，置有塞試管中，37℃水浴預(yù)熱數(shù)分鐘后，加入0.2mlHb溶液，加塞混勻，計(jì)時(shí)觀察，同時(shí)作正常對(duì)照。若放在37℃水浴中，5min出現(xiàn)混濁，【附注】1.異丙醇溶液（17％）及溫度（37℃）要嚴(yán)格控制pH不得低于7.22.Ｈb液濃度應(yīng)控制在70~130g/L之間，最佳為100g/L，抗凝劑無(wú)影響。3.Ｈb液需新鮮配制，久置可轉(zhuǎn)變?yōu)椋蚭t－Ｈb，造成假陽(yáng)性。4.Hb－F含量超出4％，可出現(xiàn)假陽(yáng)性；新鮮的溶血液或貯存于4℃2周內(nèi)的全血，在８滴Ｈb液中加１滴20g/L熱不穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)【標(biāo)本】采靜脈血0.5~1.0ml，注入抗凝管（肝素，EDTA.Na2，ACD液），混勻。【試劑】1.0.1mol/LTris緩沖液（PH7.4）。2.氰化高鐵血紅蛋白稀釋液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）。丙酮酸激酶活性測(cè)定【試劑】1.0.3mol/LTris-HCl緩沖液。2.ADP溶液。3.5mmol/LNADH溶液。4.LDH溶液600u/ml。5.30mmol/L磷酸烯醇型丙酮酸(PEP)溶液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作常規(guī)》（第二版）。【附注】1.血液標(biāo)本需新鮮，若以4℃2.白細(xì)胞中含相稱高PK活性，即使在紅細(xì)胞PK缺少癥亦是如此。因此，須盡量從紅細(xì)胞懸液中除去。血漿游離血紅蛋白測(cè)定【標(biāo)本】采用靜脈血1~1.5ml于干燥試管內(nèi)，分離血清。或收集尿液送檢。【試劑】1．0.2g/100ml鄰一甲聯(lián)苯胺溶液。2．1%H2O2溶液。3．10%乙酸溶液。4．Hb原則應(yīng)用液?！巨k法與操作】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。血清結(jié)合珠蛋白測(cè)定【標(biāo)本】采靜脈血0.5~1.0ml于干凈試管內(nèi)，分離清晰透明血清?！驹噭?．pH8.6巴比妥緩沖液（離子強(qiáng)度0.05）。2．醋酸纖維薄膜浸泡液。3．3%H2O2液。4．4mol/LH2SO4液。5．0.5mol/L醋酸緩沖液（pH4.70）。6．5mmol/L聯(lián)大茴香胺溶液。7．聯(lián)大茴香胺－過(guò)氧化氫顯色劑?！巨k法及操作】醋酸纖維薄膜電泳法，詳見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】在pH4.7時(shí)，結(jié)合的與游離的血紅蛋白顯色強(qiáng)度基本相似，因此，用PH4.7聯(lián)大茴香胺醋酸緩沖液顯色效果最佳。（何金昌徐淑屏）第五節(jié)骨髓細(xì)胞檢查及血細(xì)胞化學(xué)染色骨髓檢查骨髓取材1.骨髓穿刺部位：普通取胸骨、棘突、髂骨前嵴或髂骨后嵴等部位。兩歲以內(nèi)小兒主張用脛骨穿刺。穿刺部位不同，取材可能有明顯差別。如再生障礙性貧血的患者，進(jìn)行不同部位骨穿，可發(fā)現(xiàn)不同的細(xì)胞增生程度，以胸骨穿刺最佳，棘突次之，髂骨最差。故必要時(shí)應(yīng)多部位取材，方便能全方面地理解骨髓狀況。2.吸骨髓液：普通不超出0.2ml，否則易于稀釋。3.骨髓取材滿意的幾項(xiàng)指標(biāo)：抽吸骨髓時(shí)，患者有特殊酸痛感，骨髓液中應(yīng)含有骨髓小粒。鏡下可見(jiàn)骨髓特有細(xì)胞，如巨核細(xì)胞、漿細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、幼稚紅細(xì)胞、幼稚粒細(xì)胞。涂片與染色1．涂片：所用的載玻片應(yīng)干凈無(wú)油污，涂片均勻，有頭、體、尾三部分。選擇骨髓小粒部分制涂片。2．染色：用瑞氏和姬姆薩混合染色：選擇涂片良好的骨髓片或血片平放染色，染色普通為10～15min。骨髓增生程度的預(yù)計(jì)1．骨髓涂片觀察：首先在低倍鏡下全方面觀察成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞的大致比例，以擬定增生程度。2．國(guó)內(nèi)普通分為5級(jí)，判斷原則以下：（1）增生極度活躍：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為1:1，見(jiàn)于白血病、紅白血病。（2）增生明顯活躍：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比為10:1，見(jiàn)于白血病，增生性貧血。（3）增生活躍：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為20:1，見(jiàn)于正常骨髓和某些貧血。（4）增生減低：成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為50:1，見(jiàn)于造血功效低下時(shí)。（5）增生嚴(yán)重減低：成熟的紅細(xì)胞與有核細(xì)胞之比約為300:1，見(jiàn)于典型的再生障礙性貧血。粒、紅比值計(jì)算將粒細(xì)胞系統(tǒng)從原始到成熟階段的總和與紅細(xì)胞系統(tǒng)從原始到晚幼紅細(xì)胞總和相比，稱為粒、紅比值。參考值：成人為2～4：1粒紅比值增高見(jiàn)于化膿性感染，類白血病反映。粒細(xì)胞性白血病，紅細(xì)胞生成受克制等。減少見(jiàn)于粒細(xì)胞生成受克制，如粒細(xì)胞缺少癥或紅細(xì)胞系統(tǒng)增生，如急性溶血或失血，缺鐵性貧血等。骨髓有核細(xì)胞計(jì)數(shù)采用試管法：用血紅蛋白吸管吸取骨髓液20ul，放入裝有1ml血細(xì)胞稀釋液的試管中，充足振蕩2分鐘，搖勻，按白細(xì)胞計(jì)數(shù)辦法，數(shù)5個(gè)大方格細(xì)胞，其成果乘以102，即得每1ul有核細(xì)胞數(shù)。注意事項(xiàng)：骨髓穿刺時(shí)，勿混入血液，取骨髓液時(shí)，先計(jì)數(shù)后涂片，避免凝固。骨髓巨核細(xì)胞計(jì)數(shù)【操作】取骨髓液涂片，低倍鏡查找巨核細(xì)胞，尋找1.5×3cm為一單位面積，計(jì)數(shù)其巨核細(xì)胞。【注意事項(xiàng)】取材必須良好，涂片不適宜過(guò)厚，以透過(guò)涂膜看到筆跡為度。計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)瀏覽全片?！緟⒖贾怠烤藓思?xì)胞參考值：7～35個(gè)，分類：原巨核細(xì)胞0；幼巨核細(xì)胞0～0.05（0～5％），顆粒型巨核細(xì)胞0.10～0.27（10％～27％）；產(chǎn)板型巨核細(xì)胞0.44～0.60（44％～60％）；裸核型巨核細(xì)胞0.08～0.3（8％～30％）。骨髓象分析與報(bào)告閱讀骨髓片時(shí)，首先在低倍鏡下觀察取材、涂片、染色與否滿意，成熟紅細(xì)胞與有核細(xì)胞的大致比例，以擬定增生程度，計(jì)數(shù)全片巨核細(xì)胞數(shù)，注意有無(wú)體積較大的細(xì)胞，如轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞，尼曼匹克細(xì)胞，高雪細(xì)胞等。此后，用油鏡作分類計(jì)數(shù)，普通以體尾交界處為宜。在分類計(jì)數(shù)時(shí)，一張骨髓片計(jì)數(shù)200～500個(gè)有核細(xì)胞，發(fā)出骨髓報(bào)告時(shí)，應(yīng)將骨髓檢查成果與臨床及其它實(shí)驗(yàn)成果，特別是外周血的檢查成果聯(lián)系起來(lái)全方面分析。報(bào)告時(shí)應(yīng)提出下列方面所見(jiàn)：1．骨髓有核細(xì)胞增生狀況。2．粒、紅比值。3．粒細(xì)胞系統(tǒng)：觀察粒細(xì)胞系統(tǒng)在全部骨髓細(xì)胞中所占比例。正常狀況下約占1/2左右（50%～60％），各階段細(xì)胞之間的比例，原粒＜2％；早幼粒＜5％；中、晚幼粒百分率依次增多，但普通各＜15％。成熟細(xì)胞中，桿狀核細(xì)胞多于分葉核粒細(xì)胞，嗜酸粒細(xì)胞普通＜5％，嗜堿粒細(xì)胞＜1％，寫明各個(gè)細(xì)胞形態(tài)有無(wú)異常，如胞漿與胞核的發(fā)育與否平行，胞漿中有無(wú)空泡，毒性顆粒和Auen小體等。4．紅細(xì)胞系統(tǒng)：觀察幼紅細(xì)胞系統(tǒng)在全部骨髓細(xì)胞中所占有的比例，正常狀況下約占有核細(xì)胞的1/5（20％）左右。各階段幼紅細(xì)胞之間的比例，原始紅細(xì)胞普通＜1％；早幼紅細(xì)胞＜5%；中、晚幼紅細(xì)胞約為10％。觀察有無(wú)異常紅細(xì)胞。5．淋巴及單核細(xì)胞系統(tǒng)：注意細(xì)胞形態(tài)有無(wú)異常，各階段的比例關(guān)系。淋巴系統(tǒng)比例約為20％，小兒偏高，有時(shí)可達(dá)40％，單核細(xì)胞普通＜4％。6．其它細(xì)胞：如漿細(xì)胞，網(wǎng)狀細(xì)胞，組織嗜堿細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，吞噬細(xì)胞等的形態(tài)及比例。7．巨核細(xì)胞總數(shù)：分類及形態(tài)，血小板形態(tài)及數(shù)目。8．有無(wú)寄生蟲：如瘧原蟲、利朵小體。9．有無(wú)異常細(xì)胞。最后提出診療，如不能提出診療意見(jiàn)，可描述形態(tài)學(xué)所見(jiàn)，以供臨床參考。細(xì)胞化學(xué)染色檢查過(guò)氧化物酶（POX）染色檢查【標(biāo)本】已干的血片或骨髓片。【辦法與試劑】3-氨基-9-乙基咔唑法：固定液；染色液；Mayer蘇林素復(fù)染液。改良Pereira染色法：固定液；含磺化鉀的磷酸緩沖液；10g/L0.03%H2O2溶液；染色應(yīng)用液。【操作與成果判斷】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】標(biāo)本需新鮮制作并固定，染色液應(yīng)臨用前新鮮配制。蘇丹黑B（SB）染色檢查【標(biāo)本】新鮮或陳舊血片或骨髓片?！驹噭?7%甲醛液；蘇丹黑B貯存液；緩沖液；染色液?！静僮髋c成果判斷】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶（NAP）染色檢查【標(biāo)本】用末梢血或肝素抗凝血制血涂片均可。【試劑】固定液；緩沖液；染色液；蘇木素復(fù)染液?！静僮髋c成果判斷】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?．涂片要新鮮，厚薄適宜，及時(shí)固定。2．每次染色，最佳同時(shí)做1份化膿性感染患者血片作陽(yáng)性對(duì)照。酸性磷酸酶（ACP）染色檢查【標(biāo)本】新鮮骨髓涂片或血片?！驹噭?.固定液；2.底物染色液1號(hào)（不含酒石酸）；3.酒石酸液；4.底物染色液2號(hào)（含酒石酸）。【操作與成果判斷】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。【附注】ACP染色也有用Gomori硫化鉛法，但因操作復(fù)雜且成果不穩(wěn)定，現(xiàn)為本法取代。糖原染色檢查【標(biāo)本】干血片或骨髓涂片?！驹噭?.乙醇－甲醛固定液；2.淀粉酶緩沖液（pH6.0）；3.10g/L過(guò)碘酸液；4.Schiff液；5.蘇木素復(fù)染液?！巨k法、操作與成果判斷】高碘酸－雪夫反映，PAS法見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.過(guò)碘酸質(zhì)量要確保，氧化時(shí)間以15~20min為宜。2.染好的涂片不適宜久置，超出8天左右即逐步褪色。鐵粒染色檢查【標(biāo)本】干血片或骨髓片?！驹噭?.4％鹽酸液；2.40g/L亞鐵氫化鉀液；3.堿性復(fù)紅貯存液；4.堿性復(fù)紅應(yīng)用液。【辦法、操作與成果判斷】見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）?！靖阶ⅰ?.使用器材須除鐵解決，特別是載玻片。2.亞鐵氰化鉀－鹽酸應(yīng)用液須臨用時(shí)配制。3.作細(xì)胞外鐵檢查時(shí)，需用含有骨髓小粒的涂片。4.細(xì)胞內(nèi)鐵計(jì)數(shù)應(yīng)以中、晚幼粒細(xì)胞為準(zhǔn)。（何金昌徐淑屏）第六節(jié)臨床微生物及寄生蟲檢查細(xì)菌涂片檢查涂片不染色顯微鏡檢查標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)辦法：直接涂片法、壓滴法或懸滴法。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：觀察標(biāo)本中有無(wú)細(xì)菌或真菌，如有再觀察細(xì)菌的形態(tài)及運(yùn)動(dòng)狀況，報(bào)告所見(jiàn)。注意事項(xiàng)：注意微生物操作安全；標(biāo)本量不適宜太多，以免影響觀察；涂片制作后立刻觀察，涂片干涸后應(yīng)重新制作涂片。涂片革蘭染色顯微鏡檢查標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)辦法：常規(guī)法、快速法。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：觀察染色涂片有無(wú)細(xì)菌或真菌，如有則進(jìn)一步觀察細(xì)菌的染色性、形態(tài)、特殊構(gòu)造及排列方式。涂片中如有細(xì)胞，則觀察細(xì)菌菌體在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。報(bào)告所見(jiàn)。注意事項(xiàng)：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時(shí)，否則染色變性；只能報(bào)告所見(jiàn)細(xì)菌的染色性、形態(tài)、特殊構(gòu)造及排列方式，不能直接報(bào)告細(xì)菌菌種如報(bào)告涂片見(jiàn)淋病奈瑟菌、白喉棒狀桿菌。涂片抗酸染色顯微鏡檢查標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)辦法：萋尼染色法、快速染色法或熒光（金胺－羅丹）染色法。操作辦法：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：抗酸菌在萋尼染色法中呈紅色，在金胺－羅丹染色法中呈熒光金黃色。觀察染色涂片有無(wú)抗酸桿菌，如有則進(jìn)一步觀察細(xì)菌數(shù)量大致?tīng)顩r。涂片中如有細(xì)胞，則觀察菌體在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外。報(bào)告所見(jiàn)。注意事項(xiàng)：涂片厚薄適宜均勻；固定及染色不能超時(shí)，否則染色變性；只能報(bào)告有無(wú)抗酸桿菌，如有，可報(bào)告其數(shù)量大致?tīng)顩r及與否在細(xì)胞內(nèi)，不能直接報(bào)告見(jiàn)分枝桿菌或結(jié)核分枝桿菌，因奴卡菌屬、放線菌屬細(xì)菌也可為抗酸陽(yáng)性菌。涂片墨汁染色顯微鏡檢查標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)辦法：直接染色法。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果觀察：涂片背景為黑色，新型隱球菌或細(xì)菌莢膜在染色中呈折光環(huán)形菌體構(gòu)造。觀察染色涂片有新型隱球菌或細(xì)菌莢膜時(shí)為檢查陽(yáng)性。報(bào)告所見(jiàn)。注意事項(xiàng)：染液與標(biāo)本液的比例為1:1，比例不當(dāng)影響觀察效果；只能報(bào)告所見(jiàn)即有無(wú)折光性環(huán)狀樣菌體，不能直接報(bào)告見(jiàn)新型隱球菌等。細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌需氧培養(yǎng)標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)材料：隔水式培養(yǎng)箱及多個(gè)細(xì)菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果判斷：培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)為陰性。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度；培養(yǎng)陰性不完全表達(dá)標(biāo)本中無(wú)細(xì)菌，細(xì)菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)達(dá)不到規(guī)定等亦可造成培養(yǎng)陰性。細(xì)菌微需氧培養(yǎng)標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物。實(shí)驗(yàn)材料：二氧化碳培養(yǎng)箱、燭缸或化學(xué)產(chǎn)氣箱、盒、袋及多個(gè)微需氧細(xì)菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）成果判斷：培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)為陰性。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度，確保氣體質(zhì)量；培養(yǎng)陰性不完全表達(dá)標(biāo)本中無(wú)細(xì)菌，細(xì)菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)達(dá)不到規(guī)定、氣體不合原則等亦可造成培養(yǎng)陰性。細(xì)菌厭氧培養(yǎng)標(biāo)本規(guī)定：多個(gè)標(biāo)本或細(xì)菌培養(yǎng)物用厭氧菌專用運(yùn)輸工具或封閉性容器采集和運(yùn)輸。標(biāo)本采集后嚴(yán)格隔離空氣并立刻送檢。實(shí)驗(yàn)材料：厭氧培養(yǎng)箱、換氣罐或化學(xué)產(chǎn)氣箱、盒、袋及多個(gè)厭氧菌培養(yǎng)基。操作環(huán)節(jié)：見(jiàn)《全國(guó)臨床檢查操作規(guī)程》（第二版）。成果判斷：培養(yǎng)基上有細(xì)菌生長(zhǎng)為陽(yáng)性，無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)為陰性。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格控制培養(yǎng)箱內(nèi)溫度、濕度，確保氣體質(zhì)量；操作過(guò)程速度要快，并嚴(yán)格隔離空氣；培養(yǎng)陰性并不完全表達(dá)標(biāo)本中無(wú)細(xì)菌，細(xì)菌含量小、接種量少、接種工具溫度太高、培養(yǎng)基達(dá)不到規(guī)定、氣體不合原則等亦可造成培養(yǎng)陰性。細(xì)菌分離血液及骨髓細(xì)菌培養(yǎng)與分離