滅菌與消毒器械消毒功效鑒定試驗(yàn)

滅菌與消毒器械消毒功效鑒定試驗(yàn)1干熱滅菌柜1.1目的測(cè)定干熱滅菌柜(下簡稱滅菌柜)對(duì)細(xì)菌芽孢的殺滅效果，以驗(yàn)證其滅菌性能是否符合設(shè)計(jì)規(guī)定。1.2試驗(yàn)器材(1)枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢菌片。染菌載體(10mm×10mm，以不銹鋼片或玻片為代表，必要時(shí)可隨滅菌對(duì)象，增用或改用其他載體)。菌片上細(xì)菌芽孢在160℃±2℃條件下，存活時(shí)間≥3.9min，殺滅時(shí)間≤19min，D值為1.3min～1.9min。(2)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(見：附A)。(3)活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見2.1.1.2)。(4)使用說明書中規(guī)定滅菌柜可以處理的物品(裝填滅菌柜，使達(dá)滿載要求)。(5)多點(diǎn)溫度測(cè)定儀。1.3柜內(nèi)溫度測(cè)定將溫度測(cè)定儀的多個(gè)探頭，分別放于滅菌柜的各層內(nèi)、中、外不同部位。在柜內(nèi)擺放模擬的設(shè)計(jì)程序進(jìn)行滅菌。每3min，記錄各點(diǎn)的溫度。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算各點(diǎn)不同時(shí)間的平均溫度，并在試驗(yàn)報(bào)告中以圖表列出。1.4滅菌試驗(yàn)(1)根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和芽孢樣片。(2)每次試驗(yàn)取2個(gè)菌片為一組，平放于無菌平皿內(nèi)，勿重疊。加蓋，分置于滅菌柜的各層，內(nèi)、中、外不同部位。試驗(yàn)時(shí)，滅菌柜內(nèi)除菌片樣本外，還應(yīng)滿載以模擬的常規(guī)處理物品。(3)關(guān)閉柜門，開啟電源，按滅菌柜設(shè)計(jì)程序進(jìn)行滅菌。滅菌完畢，取出平皿，將菌片取出接種于含5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管中，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)作定性培養(yǎng)。72h后觀察結(jié)果。肉湯管混濁者表示有菌生長，判為陽性;肉湯管澄清者表示無菌生長，繼續(xù)培養(yǎng)至第7d，若仍無菌生長，判為陰性。對(duì)難以判定的肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂抹勻，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后涂片染色，在顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，以判斷生長者是否為試驗(yàn)菌。若有非試驗(yàn)菌污染，應(yīng)查找原因重新進(jìn)行試驗(yàn)。(4)測(cè)試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組(菌片對(duì)照)與陰性對(duì)照組(培養(yǎng)基對(duì)照)。(5)定量陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下，待試驗(yàn)組滅菌接種后，立即將該菌片2片分別移入含5.0mlPBS試管中，各振蕩80次洗滌。按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。(6)定性陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片放在室溫下，待試驗(yàn)組滅菌接種后，立即將試驗(yàn)菌片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察細(xì)菌生長情況。(7)陰性對(duì)照組，以空白樣片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。(8)試驗(yàn)重復(fù)5次。(9)在5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中陽性對(duì)照菌片的回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好；陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。1.5評(píng)價(jià)規(guī)定(1)在3次測(cè)定溫度的試驗(yàn)中，各點(diǎn)平均溫度均達(dá)設(shè)計(jì)要求。(2)在5次滅菌試驗(yàn)中，各次試驗(yàn)定量陽性對(duì)照的回收菌量均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好；陰性對(duì)照組樣本應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片均無細(xì)菌生長時(shí)，可判為干熱滅菌合格。1.6注意事項(xiàng)(1)干熱滅菌效果檢測(cè)，應(yīng)使用枯草桿菌黑色變種芽孢，不得使用嗜熱脂肪桿菌芽孢，因在干熱條件下，前者對(duì)干熱的抗力較后者為強(qiáng)。(2)滅菌柜柜室容積和加熱裝置的變化，均可影響消毒效果，故在這方面的設(shè)計(jì)有所變動(dòng)時(shí)，殺菌效果應(yīng)重新測(cè)定。(3)滅菌效果觀察，樣本檢測(cè)稍有污染即可將滅菌成功的結(jié)果全部否定，故試驗(yàn)時(shí)必須注意防止環(huán)境的污染和嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作技術(shù)規(guī)定。(4)柜室內(nèi)滿載與非滿載，結(jié)果差別較大，故正式試驗(yàn)時(shí)必須在滿載條件下進(jìn)行。2紅外線消毒碗柜2.1目的檢測(cè)紅外線消毒碗柜(下簡稱消毒碗柜)對(duì)餐(飲)具的消毒效果，以驗(yàn)證其殺滅微生物性能是否符合設(shè)計(jì)規(guī)定。2.2試驗(yàn)器材(1)大腸桿菌(8099)懸液。脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。染菌玻片(10mm×10mm)載體（必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體）(4)活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見2.1.1.3)。(5)病毒滅活試驗(yàn)所需試液、培養(yǎng)基與器材(見2.1.1.10)。(6)食(飲)具(種類與數(shù)量按使用說明書規(guī)定，用于裝填消毒碗柜進(jìn)行滿載試驗(yàn))(7)多點(diǎn)溫度測(cè)定儀2.3柜內(nèi)溫度測(cè)定將溫度測(cè)定儀的多個(gè)探頭，分別放于消毒碗柜每層的內(nèi)、外兩點(diǎn)(大型碗柜可在內(nèi)、中、外3點(diǎn)放置)，擺放食(飲)具至使用說明書規(guī)定的最高裝載量(滿載)。關(guān)閉柜門，開啟電源，按消毒碗柜規(guī)定程序進(jìn)行消毒。每3min，記錄各點(diǎn)的溫度。試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算各點(diǎn)不同時(shí)間的平均溫度，并以表列出。2.4大腸桿菌殺滅試驗(yàn)(1)按2.1.1.2所示方法制備大腸桿菌菌片(載體為玻片)。(2)在消毒碗柜滿載的情況下，將干燥大腸桿菌菌片置無菌平皿內(nèi)，每平皿放2片，勿重疊。在消毒碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含菌片的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，打開平皿蓋。(3)關(guān)閉柜門，開啟電源，按消毒碗柜原設(shè)計(jì)程序進(jìn)行消毒。消毒完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間打開柜門，取出平皿。將菌片移入含5mlPBS試管內(nèi)，按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。(4)在上述消毒試驗(yàn)時(shí)，將未消毒菌片，放置室溫下，當(dāng)消毒組試驗(yàn)完畢后，取該菌片進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，作為陽性對(duì)照。另將同批培養(yǎng)基與PBS等培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。(5)試驗(yàn)重復(fù)3次，其平均殺滅率應(yīng)按2.1.1.7的規(guī)定進(jìn)行計(jì)算和表達(dá)。(6)在3次試驗(yàn)中，每次陽性對(duì)照回收菌數(shù)均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照無菌生長，陽性和陰性對(duì)照組結(jié)果若不符上述要求，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。2.5脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)(1)按2.1.1.10.3所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。(2)在消毒碗柜滿載的情況下，將干燥的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體置無菌平皿內(nèi)，每平皿放2片，勿重疊。在消毒碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含染有脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，打開平皿蓋。(3)關(guān)閉柜門，開啟電源，按原規(guī)定程序進(jìn)行消毒。消毒完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間，打開柜門，取出平皿。將載體移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振蕩洗滌后，取樣按2.1.1.10.4所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度。（4）陽性對(duì)照，將未消毒的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體2片，放置于消毒碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組消毒完畢后，立即將載體移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按2.1.1.10.4所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度。脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度應(yīng)≥105TCID50。（5）陰性對(duì)照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，以觀察培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞是否生長良好。(6)試驗(yàn)重復(fù)3次。(7)根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對(duì)病毒的滅活指數(shù)，病毒的滅活指數(shù)應(yīng)達(dá)4個(gè)對(duì)數(shù)值。2.6評(píng)價(jià)規(guī)定對(duì)消毒碗柜實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)所得消毒效果的評(píng)價(jià)，應(yīng)以對(duì)微生物的殺滅效果為準(zhǔn)。當(dāng)所測(cè)結(jié)果均達(dá)到以下要求者可判為合格：(1)柜內(nèi)最低溫度點(diǎn)達(dá)到120℃，并可持續(xù)15min以上。(2)對(duì)大腸桿菌，每次試驗(yàn)，陽性對(duì)照組回收菌數(shù)均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照無菌生長，對(duì)大腸桿菌的殺滅對(duì)數(shù)值，各點(diǎn)均≥3.00為消毒合格。(3)對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒，每次試驗(yàn)，培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞生長良好。脊髓灰質(zhì)炎病毒感染滴度（TCID50）≥105，滅活對(duì)數(shù)值≥4.00。可判為消毒合格。2.7注意事項(xiàng)(1)消毒碗柜內(nèi)滿載與非滿載，結(jié)果可有相當(dāng)大差別，故正式試驗(yàn)必須在滿載條件下進(jìn)行。(2)不同大小的消毒碗柜，柜內(nèi)裝有紅外線燈的功率或安裝支數(shù)，均可影響消毒效果，故在這方面的設(shè)計(jì)有所變動(dòng)時(shí)，應(yīng)重新測(cè)定。(3)大腸桿菌殺滅試驗(yàn)注意事項(xiàng)見2.1.1.7。(4)脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)注意事項(xiàng)見2.1.1.10。3微波滅菌柜3.1目的測(cè)定微波滅菌柜（下簡稱滅菌柜）對(duì)微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其消毒或滅菌性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。3.2試驗(yàn)器材(1)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、銅綠假單胞菌（ATCC15442）、龜分枝桿菌（ATCC93326）、枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢等細(xì)菌或芽孢懸液。(2)染菌載體(10mm×10mm，以布片或玻片為代表，必要時(shí)可隨滅菌對(duì)象，增用或改用其他載體)。(3)微波漏能測(cè)試儀(檢測(cè)滅菌柜微波有無泄漏)。(4)營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基：見附錄A?；罹囵B(yǎng)計(jì)數(shù)所用器材(見2.1.1.2)。(5)使用說明書中規(guī)定的處理的物品(裝填滅菌柜，使達(dá)滿載)。3.3細(xì)菌及其芽孢和真菌殺滅試驗(yàn)操作程序（1）按2.1.1.2所示相關(guān)方法制備試驗(yàn)用細(xì)菌及其芽孢和真菌菌片。若無特殊要求，菌片以布片為載體(10mm×10mm)。每一牛皮紙小袋裝2個(gè)菌片。（2）按實(shí)用情況，在滅菌柜內(nèi)模擬擺放常規(guī)處理物品至使用說明書中規(guī)定的最高裝載量(滿載)。將試驗(yàn)菌片放于柜室各層中央和四角的物品中間，每層共放置5袋。放入試驗(yàn)菌片前，按使用方法，做預(yù)濕處理。柜室容量小者可適當(dāng)減少放置菌片數(shù)量。（3）菌片布放完以后，關(guān)閉柜門，進(jìn)行微波照射。至預(yù)定時(shí)間，停止照射，打開柜門，取出物品和試驗(yàn)菌片。（4）消毒試驗(yàn)時(shí)，按2.1.1.7要求的方法，作定量殺菌效果的檢測(cè)。滅菌試驗(yàn)時(shí)，將取出的試驗(yàn)菌片移種于營養(yǎng)肉湯中，置溫箱內(nèi)作定性培養(yǎng)(37℃)。培養(yǎng)7d，若仍無菌生長，判為陰性。對(duì)難以判斷的肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。48h后涂片染色顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。（5）測(cè)試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組(菌片對(duì)照)與陰性對(duì)照組(培養(yǎng)基對(duì)照)。（6）定量陽性對(duì)照組，將同批試驗(yàn)用的菌片放在室溫下，待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別移入含5.0mlPBS試管中，各振蕩80次。取洗液按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。（7）定性陽性對(duì)照組，將同批試驗(yàn)用的菌片放在室溫下，待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該批試驗(yàn)用的菌片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察細(xì)菌生長情況。（8）陰性對(duì)照組，在滅菌試驗(yàn)中，將同批試驗(yàn)用的菌片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。在消毒試驗(yàn)中，則應(yīng)對(duì)所用中和劑、稀釋液和培養(yǎng)基進(jìn)行無菌檢測(cè)，觀察有無細(xì)菌污染。（9）試驗(yàn)重復(fù)5次。（10）在5次試驗(yàn)中，陽性對(duì)照組各次試驗(yàn)樣片的回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好；陰性對(duì)照組樣本應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。3.4評(píng)價(jià)規(guī)定（1）在5次消毒試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片，檢測(cè)回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照組應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3.00。可判為消毒合格。（2）在5次滅菌試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的定量陽性對(duì)照組，檢測(cè)回收菌量均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好。陰性對(duì)照組樣本應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片都無細(xì)菌生長時(shí)，可判為滅菌合格。3.5注意事項(xiàng)(1)微波強(qiáng)弱受電壓影響很大。試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)注意電壓是否符合說明書規(guī)定值。波動(dòng)較大時(shí)，應(yīng)使用穩(wěn)壓電源。水量，一方面可防止棉織品燒焦，金屬物品對(duì)磁控管的破壞；一方面可提高其殺菌效果。(3)微波殺菌效果與樣本的含水量密切有關(guān)。在使用中規(guī)定需預(yù)濕者，試驗(yàn)時(shí)亦必須預(yù)濕，不可省略。端放電損壞磁控管。(5)測(cè)試人員長時(shí)間受微波照射，對(duì)健康有害。試驗(yàn)時(shí)必須穿戴專用的防護(hù)用具。測(cè)試的滅菌柜應(yīng)先用微波漏能測(cè)試儀檢測(cè)有無微波泄漏。4紫外線燈4.1目的測(cè)定紫外線燈(包括雙燈管組合燈具)輻照強(qiáng)度及對(duì)微生物的殺滅作用，以驗(yàn)證其殺菌性能是否達(dá)到合格標(biāo)準(zhǔn)。4.2試驗(yàn)器材(1)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、銅綠假單胞菌（ATCC15442）、枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢、白色葡萄球菌（8032，空氣消毒時(shí)用）、等細(xì)菌及其芽孢和真菌懸液。(2)染菌載體(10mm×10mm，以玻片為代表，必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體)。(3)紫外線照度計(jì)(在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)，下簡稱照度計(jì))。(4)紫外線燈測(cè)定架(測(cè)定時(shí)，紫外線燈固定于測(cè)定架頂端。頂端高2m，可上下移動(dòng)。下簡稱測(cè)定架)。(5)穩(wěn)壓器(220V)（6）細(xì)菌及其芽孢和真菌殺滅試驗(yàn)所需器材(見2.1.1.7，2.1.1.9)。4.3輻照強(qiáng)度測(cè)定(1)將待測(cè)紫外線燈管固定于測(cè)定架，調(diào)節(jié)距離使燈管距其下方垂直中心放置照度計(jì)處1m。(2)開啟紫外線燈5min后，用照度計(jì)在燈管下方垂直距離1m的中心處測(cè)量其輻照度值(μW/cm2)。(3)測(cè)量時(shí)，電壓應(yīng)穩(wěn)定在220V。(4)普通型或低臭氧型直管紫外線燈(30W)，在燈管下方垂直1m的中心處，新燈管的輻照度值應(yīng)≥90μW/cm2。(5)使用中的燈管，可在原裝置處進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定位置仍在燈管下方垂直距離1m的中心處。使用中燈管的輻照度值應(yīng)≥70μW/cm2，低于此值者應(yīng)予更換。(6)多燈管組合燈具的測(cè)定方法和合格標(biāo)準(zhǔn)，同單支燈管。(7)對(duì)異型(非直管型)、高強(qiáng)度型，或非30W功率等燈管的檢測(cè)距離和輻照度值合格標(biāo)準(zhǔn)，隨產(chǎn)品用途和使用方法而定。原則上，應(yīng)不低于產(chǎn)品使用說明書注明的輻照度值，并按其推薦劑量[即輻照度值乘以照射時(shí)間(s)]進(jìn)行殺菌試驗(yàn)，證明能滿足應(yīng)用所需效果者可判為實(shí)驗(yàn)室測(cè)試合格。(8)輻照強(qiáng)度檢測(cè)，每次鑒定抽查10支燈管，每支燈管重復(fù)測(cè)定3次。各次數(shù)據(jù)均達(dá)標(biāo)準(zhǔn)可判輻照強(qiáng)度合格。4.4細(xì)菌及其芽孢和真菌殺滅效果的測(cè)定(1)按2.1.1.2所示方法制備細(xì)菌及其芽孢和真菌菌片。菌片以玻片為載體。(2)試驗(yàn)時(shí)，確定菌片照射位置。若無特殊要求，30W燈管應(yīng)在燈管下方垂直距離1m的中心處。(3)將菌片平置于無菌平皿中，勿重疊。平皿放于測(cè)定架預(yù)先確定的照射位置上進(jìn)行照射。(4)照射分為3個(gè)時(shí)間組。各組時(shí)間的設(shè)置應(yīng)使能測(cè)出將試驗(yàn)細(xì)菌及其芽孢和真菌殺滅對(duì)數(shù)值≥3.00所需的最低劑量，否則應(yīng)調(diào)整時(shí)間，重新試驗(yàn)，直至取得所需結(jié)果為止。(5)將照射后樣本送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)(見2.1.1.2)的測(cè)定。(6)測(cè)試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立陽性對(duì)照組(菌片對(duì)照)與陰性對(duì)照組(培養(yǎng)基對(duì)照)。(7)陽性對(duì)照組，以試驗(yàn)用的同批菌片置室溫下，待試驗(yàn)組消毒完畢后，立即將該批菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，電動(dòng)混勻器震蕩20s或各振敲80次。取洗液按2.1.1.2所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。(8)陰性對(duì)照組，以同次實(shí)驗(yàn)用培養(yǎng)基或PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。(9)試驗(yàn)重3次。每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片，檢測(cè)回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照組應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3.00。該照射時(shí)間可判為消毒合格所需照射的時(shí)間。陽性或陰性對(duì)照組結(jié)果若不符上述要求，該次試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。(10)對(duì)異型(非直管型)、高強(qiáng)度型，或非30W功率等燈管的照射距離，隨產(chǎn)品用途和使用方法而定。4.5評(píng)價(jià)規(guī)定在3次消毒試驗(yàn)中，對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌，每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片，檢測(cè)回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3?？膳袨橄竞细?。4.6臭氧產(chǎn)生量的測(cè)定紫外線燈產(chǎn)生的臭氧量不同可影響殺菌效果和使用的安全，故應(yīng)測(cè)定臭氧濃度以便進(jìn)行綜合考慮。臭氧濃度測(cè)定方法見本規(guī)范理化鑒定技術(shù)。檢測(cè)條件應(yīng)以產(chǎn)品使用說明中規(guī)定的使用方法、面積(或容積)和時(shí)間為準(zhǔn)，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)(或模擬現(xiàn)場(chǎng))測(cè)定。臭氧濃度應(yīng)寫明于使用說明書中，低臭氧紫外線燈產(chǎn)生的臭氧濃度，應(yīng)不超過國家規(guī)定的工作場(chǎng)所安全濃度(0.3mg/m3)。4.7有效使用期的測(cè)定將燈管裝設(shè)于測(cè)試架上，通電連續(xù)照射。每周測(cè)試一次輻照度值，直至低于70μW/cm2時(shí)為止。該樣本連續(xù)照射的時(shí)間(h)，即為其有效使用時(shí)間(h)。隨機(jī)抽樣，重復(fù)測(cè)試5支燈管，取其最低值。4.8注意事項(xiàng)(1)測(cè)試前應(yīng)先用酒精棉球擦除燈管上的灰塵和油垢，以免影響紫外線的照射強(qiáng)度。(2)殺菌試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)使紫外線直接照射擬消毒表面，否則不能反映該劑量真實(shí)的殺菌效果。試人員的傷害。在有人工作環(huán)境中，空氣中臭氧濃度不得超過0.3mg/m3。測(cè)定輻照度值或進(jìn)行殺菌試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)保持室內(nèi)潔凈無塵。5紫外線消毒箱5.1目的測(cè)定紫外線消毒箱(下簡稱消毒箱)對(duì)物體表面微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其殺菌性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。5.2試驗(yàn)器材（1）金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、銅綠假單胞菌（ATCC15442）、枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢、白色念珠菌(ATCC10231)、龜分枝桿菌膿腫亞種（ATCC93326）等懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。（2）染菌載體(10mm×10mm，以玻片為代表，必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體)。（3）紫外線照度計(jì)(在計(jì)量標(biāo)定有效期內(nèi)，下簡稱照度計(jì))。（4）紫外線燈測(cè)定架[見4.2(3)](見2.1.1.7，2.1.1.8，2.1.1.9)。（6）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)所需試液、培養(yǎng)基和器材（見2.1.1.10）（7）使用說明書中規(guī)定消毒箱可處理的物品(裝放于消毒箱，使達(dá)滿載要求)。5.3紫外線照射強(qiáng)度測(cè)定打開消毒箱的蓋或門，將內(nèi)裝紫外線燈管取下，在紫外線燈測(cè)定架上按2.1.6.4測(cè)定其照射強(qiáng)度的輻照度值，以確定是否與產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的相同。必要時(shí)，以與箱門(或蓋)一樣大小的鋁板，用膠帶固定于消毒箱的門框(或消毒箱蓋)上。鋁板中央處鉆一直徑為15mm小圓孔，開啟箱內(nèi)紫外線燈，照射5min，待穩(wěn)定后，通過鋁板上小圓孔用照度計(jì)測(cè)定射出紫外線的輻照度值(μW/cm2)。5.4對(duì)微生物殺滅效果的測(cè)定（1）細(xì)菌及其芽孢、龜分枝桿菌和真菌殺滅效果的測(cè)定①按2.1.1.2所示相關(guān)方法制備細(xì)菌及其芽孢和真菌菌片。菌片以玻片為載體。②每次試驗(yàn)只測(cè)試一種微生物，以防交叉污染。試驗(yàn)用樣片每2片為一組，平放于無菌平皿中，勿重疊。箱內(nèi)容積過小時(shí)，可將試驗(yàn)細(xì)菌及其芽孢和真菌直接涂染于所設(shè)計(jì)消毒的物品表面進(jìn)行試驗(yàn)，每2件為一組。③根據(jù)消毒箱容積的大小，放入一定數(shù)量裝有樣片的平皿，或直接涂染的樣本，但消毒箱內(nèi)應(yīng)同時(shí)將所設(shè)計(jì)消毒的物品擺放至使用說明書中規(guī)定的最高裝載量(滿載)。④關(guān)閉消毒箱門(或蓋)，打開紫外線燈，照射至規(guī)定時(shí)間。⑤取出樣本，按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。對(duì)白色念珠菌的殺滅試驗(yàn)，用沙堡瓊脂培養(yǎng)基，對(duì)黑曲霉菌的殺滅試驗(yàn)，用胰蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，其他方法和步驟均與細(xì)菌殺滅試驗(yàn)相同。⑥陽性對(duì)照組，以試驗(yàn)用的同批菌片置室溫下，待試驗(yàn)組菌片消毒達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該批菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振蕩80下。取樣液按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。⑦陰性對(duì)照組，用同批次試驗(yàn)用培養(yǎng)基或PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。⑧試驗(yàn)重復(fù)3次。陽性對(duì)照菌片每次試驗(yàn)回收的含菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照組樣本應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3.00。該照射時(shí)間可判為消毒合格所需照射的時(shí)間。陽性或陰性對(duì)照組結(jié)果若不符上述要求，該次試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。（2）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)①按2.1.1.10.3所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。②每次試驗(yàn)2片脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片為一組，平放于無菌平皿中，勿重疊。箱內(nèi)容積過小時(shí)，可將脊髓灰質(zhì)炎病毒直接涂染于所設(shè)計(jì)消毒的物品表面進(jìn)行試驗(yàn)，每2件為一組。③根據(jù)消毒箱容積的大小，放入一定數(shù)量裝有樣片的平皿，或直接涂染的樣本，但消毒箱箱內(nèi)應(yīng)同時(shí)將所設(shè)計(jì)消毒的物品擺放至使用說明書中規(guī)定的最高裝載量(滿載)。④關(guān)閉消毒箱的門(或蓋)，打開紫外線燈，照射至規(guī)定時(shí)間。⑤將照射后將脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按2.1.1.10所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的滴度。⑥將未消毒的脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片2片，放置于消毒箱外室溫下。待試驗(yàn)組消毒完畢后，立即將脊髓灰質(zhì)炎病毒樣片移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振蕩后，取樣按2.1.1.10.4所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度，作為陽性對(duì)照。⑦陰性對(duì)照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，以觀察培養(yǎng)基有無污染，細(xì)胞是否生長良好。⑧試驗(yàn)重復(fù)3次。⑨根據(jù)各組的平均病毒的感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對(duì)病毒的滅活對(duì)數(shù)值。（3）評(píng)價(jià)規(guī)定在3次消毒試驗(yàn)中，對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌，每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片，檢測(cè)回收菌量均應(yīng)達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照組樣本應(yīng)無菌生長，各次試驗(yàn)的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3.00。對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒，培養(yǎng)基無污染，細(xì)胞生長良好，脊髓灰質(zhì)炎病毒的感染滴度（TCID50）≥105，滅活對(duì)數(shù)值≥4.00。可判為消毒合格。5.5注意事項(xiàng)(1)試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)注意箱內(nèi)物品有無未被紫外線直接照到處(如被箱內(nèi)支架遮擋)。如實(shí)用中擬消毒物品有可能處于該位置，在染菌樣片布點(diǎn)時(shí)應(yīng)考慮觀察該部位的消毒效果。(2)其他同4.6。6環(huán)氧乙烷滅菌器6.1目的測(cè)定環(huán)氧乙烷滅菌器(下簡稱滅菌器)對(duì)細(xì)菌芽孢的殺滅能力，以驗(yàn)證其滅菌性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。6.2試驗(yàn)器材(1)枯草桿菌黑色變種(ATCC9372)芽孢菌片。含菌量要求為5×105cfu/片～5×106cfu/片(按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì))。在環(huán)氧乙烷量為600mg/L±30mg/L，溫度為54℃±2℃，相對(duì)濕度為60%±10%條件下，菌片上芽孢存活時(shí)間應(yīng)≥7.8min，殺滅時(shí)間≤58min，D值為2.6min～5.8min。(2)染菌載體(10mm×10mm，以布片為代表，必要時(shí)可隨滅菌對(duì)象，增用或改用其他載體。(3)聚乙烯塑料袋(封裝菌片用，大小為60mm×40mm，厚0.2min～0.4mm)。(4)活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)所需器材(見2.1.1.3)。(5)使用說明書中規(guī)定滅菌器可處理的物品(裝填滅菌器，使達(dá)滿載要求)。6.3滅菌試驗(yàn)操作程序(1)根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝，每袋2片。每次試驗(yàn)用20袋。(2)將滅菌器上、中、下3層，每層內(nèi)、中、外各設(shè)一點(diǎn)，共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋，共需18袋試驗(yàn)菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對(duì)照。(3)按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時(shí)間、柜內(nèi)的溫度和相對(duì)濕度，在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿載用物品，隨滅菌器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，7d后觀察最終結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測(cè))。對(duì)難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷有無生長或生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。(4)測(cè)試中，應(yīng)同時(shí)設(shè)立定性和定量陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組。(5)定量陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。(6)定性陽性對(duì)照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入溫箱中作定性培養(yǎng)，觀察有細(xì)菌生長情況。(7)陰性對(duì)照組，以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2片，分別接種于5.0ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時(shí)將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。(8)試驗(yàn)重復(fù)5次。(9)在5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽性對(duì)照菌片，回收菌量均應(yīng)在5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好；陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對(duì)照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。6.5評(píng)價(jià)規(guī)定在5次滅菌試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的定量陽性對(duì)照組，檢測(cè)回收菌量均達(dá)5×105cfu/片～5×106cfu/片；定性陽性對(duì)照組，細(xì)菌生長良好。陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。所有試驗(yàn)菌片全部無細(xì)菌生長時(shí)，可判為滅菌合格。6.6注意事項(xiàng)(1)溫度和相對(duì)濕度對(duì)環(huán)氧乙烷氣體殺菌效果影響較大，故應(yīng)嚴(yán)格控制試驗(yàn)中的有關(guān)條件。(2)環(huán)氧乙烷液體可溶解聚乙烯、聚氯乙烯等，不可將其液體滴落于此類物品上。環(huán)氧乙烷不論液體或氣體，均可損壞賽璐璐制品，試驗(yàn)時(shí)應(yīng)予注意。(3)環(huán)氧乙烷易燃易爆，操作現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)采取防火防爆措施，不得有明火作業(yè)及電火花發(fā)生。環(huán)境中應(yīng)有良好的通風(fēng)。在每日8h工作中，環(huán)氧乙烷濃度應(yīng)不超過1.82mg/m3（1ppm），15min工作中暴露濃度不超過9.1mg/m3（5.0ppm）。如出現(xiàn)中毒癥狀，需迅速離開現(xiàn)場(chǎng)。輕者呼吸新鮮空氣，直到癥狀消除；重者應(yīng)及時(shí)送醫(yī)院治療。7臭氧消毒柜7.1目的測(cè)定臭氧消毒柜(下簡稱消毒柜)對(duì)物體表面上微生物的殺滅效果，以驗(yàn)證其殺菌性能是否符合原設(shè)計(jì)規(guī)定。7.2試驗(yàn)器材(1)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、銅綠假單胞菌（ATCC15442）、白色念珠菌(ATCC10231)懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。(2)染菌載體(10mm×10mm，以布片或玻璃片為代表，必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體)。(3)臭氧采樣裝置和濃度分析儀。(4)細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)用器材(見2.1.1.7，2.1.1.9)。(5)脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)用試液、培養(yǎng)基和器材(見2.1.1.10)。(6)溫度與濕度計(jì)。7.3臭氧濃度測(cè)定(1)儀器測(cè)定:臭氧濃度可用臭氧分析儀測(cè)定。操作按儀器使用說明書規(guī)定進(jìn)行。(2)化學(xué)滴定法測(cè)定:參考本規(guī)范理化鑒定實(shí)驗(yàn)技術(shù)。7.4殺滅微生物試驗(yàn)操作程序臭氧消毒柜的臭氧發(fā)生器臭氧發(fā)生量一般不可調(diào)，故試驗(yàn)時(shí)設(shè)3個(gè)作用時(shí)間組［時(shí)間分組見2.1.1.7.3（1）］。（1）細(xì)菌和真菌殺滅試驗(yàn)①按2.1.1.2所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增設(shè)其他試驗(yàn)微生物。②因臭氧在柜內(nèi)擴(kuò)散慢，分布不易均勻，故物品在柜內(nèi)應(yīng)擺放至使用說明書中規(guī)定的最高裝載量(滿載)，以盡量接近實(shí)際應(yīng)用時(shí)的情況。③以2片菌片一組，置一無菌平皿中，勿重疊。試驗(yàn)時(shí)，將放有菌片的平皿蓋打開，分層布放，每層內(nèi)、中、外各點(diǎn)分別放一組樣本。④按照使用說明書要求，調(diào)節(jié)柜內(nèi)溫度與相對(duì)濕度，并記錄備查，然后開啟臭氧發(fā)生器進(jìn)行消毒。⑤消毒至規(guī)定時(shí)間，取出菌片，按2.1.1.3所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。對(duì)白色念珠菌的殺滅試驗(yàn)，用沙堡瓊脂培養(yǎng)基，對(duì)黑曲霉菌的殺滅試驗(yàn)，用麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基，其他方法和步驟均與細(xì)菌殺滅試驗(yàn)相同。因臭氧氣體熏蒸，載體吸收的量少、分解快，可不必進(jìn)行去除殘留臭氧的處理。每組試驗(yàn)重復(fù)3次。⑥將未消毒的菌片2片，放置于消毒碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組消毒完畢后，同時(shí)進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)檢測(cè)。取本次試驗(yàn)同批的PBS接種培養(yǎng)基培養(yǎng)，作為陰性對(duì)照。[對(duì)未固定裝于消毒箱內(nèi)的臭氧發(fā)生器(如冰箱臭氧消毒器)，其殺菌效果鑒定，可按其用途，在相應(yīng)的密閉柜內(nèi)進(jìn)行。柜的大小應(yīng)與所設(shè)計(jì)的殺菌有效范圍相近]。（2）脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)①按2.1.1.10.3所示方法制備脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。若無特殊要求，用玻片為載體。②在消毒碗柜滿載的情況下，將干燥的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體置滅菌平皿內(nèi)，每平皿放2片，勿重疊。在消毒碗柜每層的內(nèi)、外兩個(gè)點(diǎn)各放一含染有脊髓灰質(zhì)炎病毒載體的平皿(大型碗柜可在內(nèi)、中、外各放一平皿)，平皿蓋打開。③關(guān)閉柜門，開啟電源，按原規(guī)定程序進(jìn)行消毒。消毒完畢，按說明書規(guī)定的時(shí)間，打開柜門，取出平皿。將載體移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按2.1.1.10.4所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度。④將未消毒的染有脊髓灰質(zhì)炎病毒的載體2片，放置于消毒碗柜外室溫下。待試驗(yàn)組消毒完畢后，立即將載體移入含1ml細(xì)胞維持液的試管中。振打后，取樣按2.1.1.10.4所示方法檢測(cè)殘留脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度，作為陽性對(duì)照。⑤陰性對(duì)照，用不含脊髓灰質(zhì)炎病毒的完全培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，以觀察培養(yǎng)基有無污染，細(xì)胞是否生長良好。⑥試驗(yàn)重復(fù)3次。⑦根據(jù)各組的平均病毒感染滴度（TCID50），分別計(jì)算其對(duì)病毒的滅活對(duì)數(shù)值。7.5評(píng)價(jià)規(guī)定對(duì)細(xì)菌及其芽孢和真菌，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對(duì)照組回收菌量在5×105cfu/片～5×106cfu/片，陰性對(duì)照無菌生長，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)細(xì)菌及其芽孢和真菌的殺滅對(duì)數(shù)值均≥3；對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒，在3次試驗(yàn)中，所設(shè)陽性對(duì)照組，脊髓灰質(zhì)炎病毒滴度達(dá)105(TCID50)，陰性對(duì)照細(xì)胞無污染，試驗(yàn)組中每次試驗(yàn)病毒滴度下降4個(gè)對(duì)數(shù)值者，該組作用時(shí)間可作為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)消毒合格的最短作用時(shí)間。若陽性或陰性對(duì)照組的結(jié)果與上述要求不符，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。7.6注意事項(xiàng)(1)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有懷疑時(shí)，可在試驗(yàn)時(shí)同步進(jìn)行臭氧濃度測(cè)定，以便作進(jìn)一步的分析。(2)每次試驗(yàn)完畢，應(yīng)充分排除消毒柜內(nèi)的臭氧氣體，勿使有臭氧殘留，以免影響隨后的試驗(yàn)。(3)空氣中臭氧濃度不得超過0.3mg/m3，臭氧吸入過多，可使人中毒，試驗(yàn)場(chǎng)所應(yīng)保持通風(fēng)良好。(4)溫度和相對(duì)濕度均可影響臭氧氣體對(duì)細(xì)菌的殺滅效果，試驗(yàn)時(shí)必須控制好這些條件，使其前后一致。8臭氧水消毒器8.1目的檢測(cè)臭氧水消毒器發(fā)生的臭氧水消毒劑對(duì)物品表面的消毒效果，以驗(yàn)證臭氧水消毒劑對(duì)物品表面消毒的實(shí)用劑量。臭氧水消毒劑指應(yīng)用臭氧消毒設(shè)備制備的含臭氧的水溶液，并以其作為消毒劑，用于對(duì)物品表面等的消毒。8.2試驗(yàn)器材(1)金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、銅綠假單胞菌（ATCC15442）、白色念珠菌(ATCC10231)懸液和脊髓灰質(zhì)炎病毒懸液。(2)染菌載體(10mm×10mm，以布片為代表，必要時(shí)可隨消毒對(duì)象，增用或改用其他載體)。(3)臭氧采樣裝置。(4)細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)用器材與培養(yǎng)基(見2.1.1.7，2.1.1.9)。(5)脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)用試液、培養(yǎng)基和器材(見2.1.1.10)。(6)溫度與濕度計(jì)。(7)500ml塑料杯。(8)水流量計(jì)（1L/min～10L/min）。(9)不銹鋼網(wǎng)。(10)臭氧濃度測(cè)定用臭氧分析儀和化學(xué)滴定法用試劑、器材等。8.3臭氧濃度測(cè)定臭氧濃度的測(cè)定方法分為化學(xué)滴定法和儀器測(cè)定法。儀器測(cè)定法按儀器使用說明書要求進(jìn)行。（1）通過式臭氧消毒設(shè)備測(cè)定水樣流出消毒設(shè)備后臭氧濃度由高到低的衰變曲線。測(cè)定時(shí)，若出水流量可調(diào)，設(shè)3個(gè)流量其中應(yīng)包括該設(shè)備的最大流量和最小流量，若出水流量不可調(diào)，則按說明書要求設(shè)1個(gè)流量，各流量水樣流出消毒設(shè)備后，即刻測(cè)定水樣中臭氧含量，然后再將水樣放20℃水浴中，設(shè)5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段，分別測(cè)定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度衰變曲線。（2）暴氣式臭氧消毒設(shè)備測(cè)定一定容量的水體中臭氧濃度由低到高，直到臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的濃度變化曲線。按說明書要求，加入規(guī)定容量的水樣，通入臭氧氣體，設(shè)5個(gè)～6個(gè)時(shí)間段（應(yīng)測(cè)出臭氧濃度達(dá)飽和時(shí)的最短時(shí)間），分別測(cè)定水樣中臭氧含量，并繪制臭氧濃度變化曲線。8.4殺滅微生物試驗(yàn)操作程序按臭氧設(shè)備制備臭氧水消毒劑的方式分為暴氣式與通過式兩類。（1）暴氣方式臭氧消毒設(shè)備制備臭氧水消毒劑的殺滅微生物試驗(yàn)①按2.1.1.2所示相關(guān)方法制備金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、枯草桿菌黑色變種芽孢、白色念珠菌、黑曲霉孢子的菌片。必要時(shí)，可增