液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

液相質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)2014年12月15日ContentsLC-MS簡介1LC-MS原理2LC-MS應用3具體實例4LC-MS的簡介

液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS）又叫液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，它以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補，將色譜對復雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點結(jié)合起來，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應用。

液質(zhì)(LC/MS)聯(lián)用系統(tǒng)的示意圖離子源離子束聚焦M/Z分析器檢測器數(shù)據(jù)處理HPLCLC-MS接口質(zhì)譜圖HPLCMSInterface(KeytoSuccess!)

LC-MS的接口傳送帶(movingbelt)式

LC-MS接口:目前已經(jīng)停用直接液體導入接口粒子束接口動態(tài)快原子轟擊接口熱噴霧(TSP)接口大氣壓電離源(API):目前最常用的方法電噴霧(ESI)氣動輔助電噴霧離子化大氣壓化學電離源(APCI)NeutralMoleculesAnalyteIonsClustersSalts毛細管液相的入口霧化器加熱

N2霧化氣入口碎片碰撞電壓(CID)錐孔八極桿四極桿高能打拿極/電子倍增器+++++透鏡+++++++++++++電噴霧(ESI)接口

特點：

軟電離化方式；

樣品可以是大分子、穩(wěn)定性差；

形成多電荷離子；

大分子樣品有利。毛細管碎片碰撞電壓（CID）Coronaneedle++++++++++++錐孔透鏡四極桿++++八極桿熱氮氣大氣壓化學電離源(APCI)接口高能打拿極/電子倍增器特點：

樣品為中等極性的化合物；

是ESI的補充，使一些ESI不電離的化合物電離；

主要產(chǎn)生單電荷離子，分子量小于1000。ESIAPCI分子量化合物極性1000100,00010,000非極性極性化合物GC-MS

LC/MS聯(lián)用技術(shù)的相對適用范圍質(zhì)譜原理質(zhì)譜分析是先將物質(zhì)離子化，按離子的質(zhì)荷比分離，然后測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法。以檢測器檢測到的離子信號強度為縱坐標，離子質(zhì)荷比為橫坐標所作的條狀圖就是我們常見的質(zhì)譜圖。質(zhì)譜質(zhì)量分析器離子阱質(zhì)量分析器(Trap)飛行時間質(zhì)量分析器（TOF）四級桿質(zhì)量分析器(Q)質(zhì)量分析器飛行時間質(zhì)量分析器

ConversionDynodeElectronMultiplier++++++MainRFLowAmplitudeDipoleField(1/3FrequencyoftheMainRF)ShutterOptimizedAsymptoteAngleOctapoleRing離子阱質(zhì)量分析器四級桿質(zhì)量分析器四級桿質(zhì)量分析器質(zhì)譜的特點優(yōu)點:定分子量準確，其它技術(shù)無法比。靈敏度高，常規(guī)10-7—10-8g,單離子檢測可達10-12g?？焖?，幾分甚至幾秒。便于混合物分析，LC/MS，MS/MS對于難分離的混合物特別有效,其它技術(shù)無法勝任。多功能，廣泛適用于各類化合物。局限性：異構(gòu)體，立體化學方面區(qū)分能力差。重復性稍差，要嚴格控制操作條件。所以不能象低場NMR，IR等自己動手，須專人操作。有離子源產(chǎn)生的記憶效應，污染等問題。價格稍顯昂貴，操作有點復雜。LC-MS應用領(lǐng)域醫(yī)藥學：藥物代謝、藥物動力學、雜質(zhì)分析、天然產(chǎn)物分析生物化學：肽、蛋白質(zhì)、寡核苷酸、糖環(huán)境化學：農(nóng)藥和農(nóng)殘分析、有機污染物、土壤/食品/水分析臨床醫(yī)學：新生兒檢查、糖化血紅蛋白（糖尿病）、血紅蛋白變異、膽酸食品科學：香料、添加物、包裝物、蛋白質(zhì)、致癌物法醫(yī)學：濫用藥物、爆炸物、興奮劑檢測合成化學：有機金屬化合物、有機合成物有機化學：表面活性劑、染料藥物代謝研究LC-MS應用多肽藥物分析雜質(zhì)分析臨床診斷和疾病生物標志物的分析寡核苷酸藥物分析微生物鑒定藥物代謝研究以新利司他片為受試制劑，研究了比格犬體內(nèi)單次給藥，新利司他代謝物在體內(nèi)的血藥濃度經(jīng)時過程，估算相應的藥代動力學參數(shù)。ABSciexAPI3000液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)：包括Agilent1100高效液相色譜儀，ESI離子源，API3000三重四極桿質(zhì)譜，AnalystSoftware工作站。給藥后0.5h，新利司他代謝物檢樣結(jié)果內(nèi)標雜質(zhì)分析在現(xiàn)代制藥業(yè)、藥物開發(fā)和制造中，準確地鑒定微量雜質(zhì)和副產(chǎn)物是極端重要的，因為雜質(zhì)和副產(chǎn)物可能對人體有潛在的毒性。在藥物研發(fā)的各個階段分析雜質(zhì)是非常重要的，而且是整個工藝的瓶頸。在藥物價值傳遞鏈上，藥物雜質(zhì)分析日益成為了一項具有挑戰(zhàn)性的任務。LC-MS用于藥物中雜質(zhì)分析和定性提供一個指南，以提高工作效率。雜質(zhì)分析例如我們實驗室做醋酸阿比特龍的基因毒性雜質(zhì)分析時，由于其限度在ppm級，用HPLC法無法檢測出來，而有時有的雜質(zhì)檢測時，HPLC保留時間不斷變化,在一個新的保留時間出現(xiàn)一個新的峰值不能確定是不是一個新的雜質(zhì)，因此因為LC-MS的高靈敏度和高選擇性而運用液質(zhì)檢測。ABSciexAPI3000液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)：包括Agilent1100高效液相色譜儀，ESI離子源，API3000三重四極桿質(zhì)譜，AnalystSoftware工作站。多肽藥物分析LC-MS可實現(xiàn)多肽的快速高靈敏