臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)十二 不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(yàn)(一)

實(shí)驗(yàn)十二不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的檢驗(yàn)(一)目的要求：1.熟悉不發(fā)酵革蘭陰性菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握不發(fā)酵革蘭陰性菌的形態(tài)、生化反應(yīng)特點(diǎn)和數(shù)值鑒定方法；3.掌握鑒定不發(fā)酵革蘭陰性菌生化反應(yīng)試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果分析。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.制備普通瓊脂平板（小組作，每人一個）2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌和不動桿菌接種普通瓊脂平板（2人一組，2人接種一種細(xì)菌）不發(fā)酵革蘭陰性桿菌的鑒定程序

細(xì)菌對糖類的利用有2種類型：一種是從糖類發(fā)酵產(chǎn)酸，不需要以分子氧作為最終受氫體，稱發(fā)酵型產(chǎn)酸，它在有氧無氧條件下均能分解葡萄糖；另一種則以分子氧作為最終受氫體，稱氧化型產(chǎn)酸，它在無氧條件下不分解葡萄糖，這種細(xì)菌也稱產(chǎn)堿型。前者包括的菌種類型為多數(shù)。

不發(fā)酵菌（NonfermentativeBacilli）是一群不發(fā)酵葡萄糖（-）或僅以氧化形式(o)利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌；多為條件致病菌，主要引起院內(nèi)感染。其共同的生化特征有：

1.葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（O/F試驗(yàn)）常顯示是氧化型或產(chǎn)堿型（O/-）。

2.氧化酶陽性：非發(fā)酵菌中，除不動桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外氧化酶試驗(yàn)均為陽性。

3.多有鞭毛（除外不動桿菌），但半固體上動力不明顯，可用懸滴法或鞭毛染色法檢測其動力。

4.KIA表層生長底層不生長（缺氧）。非發(fā)酵菌包括的菌種較多，主要有下列菌屬：假單胞菌屬:銅綠假單胞菌…

不動桿菌屬:鮑曼不動桿菌…

窄食單胞菌屬:嗜麥芽窄食單胞菌…

伯克菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、無色桿菌屬、莫拉菌屬、金氏桿菌屬、黃桿菌屬、艾肯菌屬、土壤桿菌屬、黃單胞菌屬、叢毛單胞菌屬、食酸菌屬……醫(yī)院環(huán)境用品/臨床標(biāo)本肉湯培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基血平板麥康凱平板可疑菌落OF試驗(yàn)涂片革蘭染色O革蘭陰性桿菌、氧化酶陽性非發(fā)酵菌系列生化反應(yīng)鑒定到種產(chǎn)綠膿素、青膿素

42℃生長、極端單鞭毛

乙酰胺酶陽性銅綠假單胞菌（鑒定程序）

臨床最常見院內(nèi)感染病原菌42度生長；精氨酸水解；明膠液化；色素；鞭毛數(shù)量操作步驟：倒普通瓊脂平板（小組作，每人一個）注意點(diǎn)：培養(yǎng)基冷卻溫度2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌接種普通瓊脂平板（2人一組，每人接種一種細(xì)菌），溫箱培養(yǎng)

注意點(diǎn)：劃線接種；無菌操作臨床意義：多為條件致病菌，主要引起院內(nèi)感染，最常見的是：呼吸道感染、尿道感染、傷口感染，也可引起腦膜炎、菌血癥、醫(yī)源性敗血癥、心內(nèi)膜炎等。引起細(xì)菌定植和感染的危險(xiǎn)因素有：機(jī)械通氣、廣譜抗生素的預(yù)防性應(yīng)用、化療、插管和中性粒細(xì)胞減少等。在非發(fā)酵菌引起的感染中，銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌是臨