第5章熒光分光光度計課件

1第五章熒光分析法2熒光分光光度計3熒光分光光度法熒光分光光度法當(dāng)用紫外光照射某種物質(zhì)時，這些物質(zhì)會發(fā)出各種顏色和不同強(qiáng)度的光，當(dāng)紫外光停止照射時，這種光線也隨之消失。我們這種光線稱為熒光。依據(jù)物質(zhì)所發(fā)熒光的顏色和強(qiáng)度建立起來的定性和定量的分析方法稱為熒光分光光度法。

1、熒光分光光度法簡介4黃連牛蒡子元胡浙貝母5可用熒光鑒別的中藥黃連：根莖折斷面在紫外光下顯金黃色熒光浙貝母：粉末置于紫外光下呈亮淡綠色熒光元胡：切面或粉末置于紫外光下，亮黃色熒光牛蒡子：粉末，綠色熒光麻黃：縱剖面，邊緣顯亮白色熒光，中心顯棕色熒光甘草：粉末顯黃色熒光黃柏：斷面呈亮黃色熒光6熒光分光光度法

4、熒光分析中常用參數(shù)：

FΛ（nm）1、熒光物質(zhì)都具有熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜2、熒光的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜是用熒光分析法進(jìn)行定量和定性分析時的基本參數(shù)和依據(jù)激發(fā)光譜發(fā)射光譜7熒光分光光度法

4、熒光分析中常用參數(shù)Fλ激發(fā)激發(fā)光譜：當(dāng)改變激發(fā)光波長，測量熒光物質(zhì)在每一波長(λ)激發(fā)光照射下發(fā)射的熒光強(qiáng)度(F)，以熒光強(qiáng)度(F)為縱坐標(biāo)，激發(fā)光波長(λ)為橫坐標(biāo)作圖，得到熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜。λem(max)最大激發(fā)波長常作為入射波長8熒光分光光度法

4、熒光分析中常用參數(shù)Fλ發(fā)射發(fā)射光譜（熒光光譜）：當(dāng)用最大激發(fā)波長λem(max)照射熒光物質(zhì)，測量熒光物質(zhì)在照射下所發(fā)出的對應(yīng)每一波長(λ)的熒光強(qiáng)度(F)，以F為縱坐標(biāo)，λ為橫坐標(biāo)作圖，得到熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜。λex(max)最大發(fā)射波長常作為測定波長9熒光分光光度法

4、熒光分析中常用參數(shù)熒光分析法優(yōu)點：1、靈敏度高檢測限可達(dá)10-10-10-12g/mL2、定性更可靠缺點：1、干擾因素較多對實驗條件要求嚴(yán)格，測量精密度差2、應(yīng)用范圍有限但具有特殊重要性能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少，但中藥生化物質(zhì)、致癌物質(zhì)、天然產(chǎn)物都有熒光現(xiàn)象。10熒光分光光度法

3、熒光分光光度法的優(yōu)缺點3.1、優(yōu)點：

（1）靈敏度高

檢測限可達(dá)10-10-10-12g/mL，比紫外可見光度計高出3-4個數(shù)量級。

（2）定性更可靠熒光分析可提供激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、總熒光量、峰位、譜帶寬度、量子產(chǎn)率、熒光壽命等參數(shù)。干擾因素較多11熒光分光光度法

3、熒光分光光度法的特點缺點：（3）對實驗條件要求嚴(yán)格，測量精密度差（4）應(yīng)用范圍有限但具有特殊重要性能產(chǎn)生熒光的物質(zhì)較少，但中藥生化物質(zhì)、致癌物質(zhì)、天然產(chǎn)物都有熒光現(xiàn)象。12定量依據(jù)當(dāng)其他條件固定、熒光物質(zhì)溶液濃度很稀時，熒光強(qiáng)度(F)和熒光物質(zhì)溶液濃度(c)成正比，即：

F=Ac，A為常數(shù)1、熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。2、熒光強(qiáng)度是表示發(fā)射相對強(qiáng)度的物理量，它是最常用的熒光參數(shù)之一。單位為任意單位，表示的是相對強(qiáng)度。13熒光分光光度