HIV初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文件

HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)室SOP文獻(xiàn)科室：檢查科目錄第一局部工作制度-2-實(shí)驗(yàn)室工作制度-2-HIV標(biāo)本采集與接受登記制度-3-艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度-3-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度-4-過失事故解決制度-5-報(bào)告單簽發(fā)審核制度-6-設(shè)備管理制度-7-試劑管理制度-8-艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)制度-9-艾滋病病毒職業(yè)暴露防止解決方案-10-第二局部原則操作規(guī)程-13-第二章樣品采集與解決-13-第二章原則操作程序-14-一、金豪-14-二、科華生物-15-三、英科新創(chuàng)-16-第三章成果報(bào)告與考前須知-18-第三局部設(shè)備SOP文獻(xiàn)-20-一、多功效自動(dòng)酶標(biāo)儀DNM-9602-20-二、DG3080洗板機(jī)-22-三、電熱恒溫水箱-25-第四局部流程圖-26-一、HIV抗體篩查流程圖-26-二、暴露級別的評定-27-附件：血清加樣表-28-第一局部工作制度實(shí)驗(yàn)室工作制度室應(yīng)經(jīng)常保持整潔，多個(gè)儀器設(shè)備要安裝適宜，器皿試劑擺放整潔，標(biāo)志清晰，有良好的通風(fēng)設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室工作人員工作時(shí)一律穿制服，保持衣帽整潔，實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)用心致志、認(rèn)真負(fù)責(zé)，堅(jiān)守工作崗位，不得隨意串崗、閑談，保持實(shí)驗(yàn)室安靜，下班離開實(shí)驗(yàn)室前要檢查并關(guān)好水、電、門、窗等，注意實(shí)驗(yàn)室平安。認(rèn)真開展實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制工作，儀器設(shè)備應(yīng)定時(shí)保養(yǎng)，有溫度統(tǒng)計(jì)，檢測標(biāo)本的保存規(guī)定符合規(guī)規(guī)定。實(shí)驗(yàn)室不得放置與測試無關(guān)的物品，水、溫、濕度、光照、防震、防塵、防噪聲等，環(huán)境必須符合實(shí)驗(yàn)室的工作規(guī)定。實(shí)驗(yàn)和樓道必須配備足夠的平安防火方法，并定時(shí)檢查保養(yǎng)。對不同屬性、品種和含量水平的試樣，應(yīng)有足夠的實(shí)驗(yàn)區(qū)域，予以別離檢查，特別是含有生物危害的試樣必須別離檢查。避免損害工作人員安康和污染環(huán)境。與檢查無關(guān)人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，外單位人員聯(lián)系工作，一律在辦公室接待。實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)與時(shí)清理實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場和用品，對染菌帶毒的器具廢棄物應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)展消毒無菌解決。實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙、用餐和進(jìn)食。HIV標(biāo)本采集與接受登記制度采樣前和接受標(biāo)本時(shí)應(yīng)核對病人身份，嚴(yán)格執(zhí)行核對制度。采血時(shí)應(yīng)戴好手套、帽子、口罩。HIV標(biāo)本采集應(yīng)建立具體的統(tǒng)計(jì)本，統(tǒng)計(jì)容涉及：送檢單位、病人、門診號、數(shù)量、種類〔血清〕、送樣者、接受者或采集者。采集后，應(yīng)將HIV樣本單獨(dú)分裝，勿與其它項(xiàng)目共用。艾滋病實(shí)驗(yàn)室制度為確保艾滋病實(shí)驗(yàn)室全部資料嚴(yán)格，應(yīng)恪守下列制度1、與HIV/AIDS有關(guān)檢測項(xiàng)目的全部資料均應(yīng)嚴(yán)格，涉及采樣統(tǒng)計(jì)與檢測統(tǒng)計(jì)的保管，報(bào)告單的發(fā)放和送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室檢測等。2、工作人員不得向無關(guān)人員提供檢查成果，要妥善保存多個(gè)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)。3、對初篩疑似陽性感染者不能告訴受檢者本人，更不能到處亂講。4、實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)檢查資料，檔案、成果統(tǒng)計(jì)其別人不得翻錄查閱，修改和銷毀。5、實(shí)驗(yàn)室工作人員，不能在非正式場合對外提供任何成果、數(shù)據(jù)。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室常規(guī)消毒清理工作制度1、檢測可疑樣品時(shí)，充足準(zhǔn)備好廢棄物消毒具與消毒藥、液。如：次氯酸鈉含有效氯—5000mg/L，75%乙醇和2%戊二醛。2、實(shí)驗(yàn)室用的吸頭與時(shí)打入消毒器皿中。3、一次性手套，隔離服更換后，應(yīng)丟棄在一次性垃圾袋。4、慣用消毒辦法4.1、物理消毒辦法、高壓蒸汽消毒，121°C，保持15—20min；4.2、化學(xué)消毒辦法、廢棄物缸：5000mg/L次氯酸鈉、工作臺(tái)面與儀器外表：75%乙醇、溢出物：5000mg/L次氯酸鈉、污染的臺(tái)面和器具：mg/L次氯酸鈉5、實(shí)驗(yàn)室中發(fā)生可疑樣品溢出時(shí)，應(yīng)與時(shí)用75%乙醇噴灑，然后用消毒劑浸泡的吸水物質(zhì)覆蓋10-15分鐘，最后再用消毒劑清洗該地方，擦干。6、全部實(shí)驗(yàn)工作完畢后，應(yīng)對實(shí)驗(yàn)臺(tái)、儀器、設(shè)備〔接觸部位〕地面進(jìn)展徹底消毒解決。7、廢棄物解決

從HIV實(shí)驗(yàn)室出來的全部廢棄物，涉及不再需要的樣品、包裝盒和其它物品，均應(yīng)視為感染性廢棄物。過失事故解決制度艾滋病檢測工作人員必須要有高度的責(zé)任心和嚴(yán)肅的法制觀念，嚴(yán)防過失事故的發(fā)生。由于責(zé)任心不強(qiáng)、不認(rèn)真執(zhí)行規(guī)章制度，不恪守操作規(guī)程或技術(shù)因素而引發(fā)檢查錯(cuò)誤，對病人未造成嚴(yán)重后果的，稱為過失。過失按程度不同，分為普通過失和嚴(yán)重過失。一級過失記過失一次，二級過失扣款50元，三級過失扣除當(dāng)月效益工資。一級過失：

〔1〕違反操作規(guī)程，造成標(biāo)本損壞，需重新采集標(biāo)本或由于接受標(biāo)本未認(rèn)真核對，違反核對制度，影響檢查者?！?〕工作環(huán)境不能做到5S管理、違反生物平安者?！?〕未準(zhǔn)時(shí)統(tǒng)計(jì)成果、繪制質(zhì)控圖、當(dāng)發(fā)現(xiàn)失控時(shí)隱瞞不報(bào)者。二級過失：〔1〕未準(zhǔn)時(shí)間先后次序使用試劑，造成試劑過期或由于寄存不當(dāng)造成試劑變質(zhì)者?！?〕項(xiàng)目漏查、做錯(cuò)項(xiàng)目，且標(biāo)本已解決，需再次采用標(biāo)本檢查者。(3)因操作不當(dāng)，造成設(shè)備故障，影響較大者。三級過失：〔1〕漏做、錯(cuò)做普通標(biāo)本的檢查目的，編錯(cuò)試管，標(biāo)錯(cuò)標(biāo)本聯(lián)號、采錯(cuò)病人標(biāo)本，寫錯(cuò)檢查成果并已發(fā)出報(bào)告者?！?〕粗心大意寫錯(cuò)報(bào)告難以挽回者。(3)因責(zé)任心不強(qiáng)、管理不善造成陽性標(biāo)本喪失者。報(bào)告單簽發(fā)審核制度各崗位的工作由本崗位人員進(jìn)展操作檢查，然后填寫檢查報(bào)告單。工作完畢后，再對本崗位全部的檢查報(bào)告進(jìn)展核查一次，在你認(rèn)為能夠發(fā)出時(shí)，蓋上檢查者印章，填寫好報(bào)告日期。交給本實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或有資質(zhì)的高年資檢查人員核查簽名；但在危急狀況下或單獨(dú)一人值班時(shí)〔如夜班〕除外。沒有上崗證人員不得單獨(dú)簽發(fā)檢查成果報(bào)告單。專業(yè)責(zé)任主管技師對本專業(yè)的全部報(bào)告單進(jìn)展審核，審核的根本容有：臨床醫(yī)師所申請的檢查項(xiàng)目與否已全部檢查，有無漏項(xiàng)；檢查成果的填寫與否清晰、對的；檢查報(bào)告單上全部容與否全部填寫完整；有無非常異常的、難以解釋的成果；有無書寫錯(cuò)誤；與否有需要復(fù)查的成果當(dāng)發(fā)現(xiàn)檢查成果有凝議時(shí)可指令本崗位人員對檢查項(xiàng)目進(jìn)展復(fù)查。確認(rèn)報(bào)告無問題時(shí)蓋章后，方可發(fā)出報(bào)告。設(shè)備管理制度由科主任或科室主管負(fù)責(zé)監(jiān)視和檢查儀器設(shè)備的使用狀況，定時(shí)校準(zhǔn)儀器的精確度。各科應(yīng)對本科室儀器設(shè)備建立臺(tái)賬明細(xì)。每月應(yīng)向總庫遞交儀器設(shè)備使用狀況表，并存檔。貴重儀器應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理。儀器操作前必須培訓(xùn)、考核，認(rèn)真閱讀儀器操作闡明書，純熟掌握該儀器的使用辦法與維護(hù)辦法，考核合格前方可操作。當(dāng)班者在使用中應(yīng)嚴(yán)格恪守操作規(guī)程，碰到問題應(yīng)作與時(shí)解決，并具體統(tǒng)計(jì)。問題嚴(yán)重者，應(yīng)與時(shí)上報(bào)科主任或主管加以解決。每次使用完畢，應(yīng)檢查儀器的電源、廢液傾倒?fàn)顩r，并具體統(tǒng)計(jì)該次使用狀況。對有溫度規(guī)定的儀器設(shè)備，如冰箱冷藏室、冷凍室與恒溫培養(yǎng)箱、水浴箱等，均應(yīng)建立登記本，每天監(jiān)測溫度。試劑管理制度為了更加好地管理檢查科試劑，由主管對檢查科試劑申購、品牌、質(zhì)量、價(jià)格、使用與管理狀況進(jìn)展督查。每七天上報(bào)周計(jì)劃，各組人員根據(jù)各崗狀況，認(rèn)真、具體填寫計(jì)劃表，務(wù)必注明具體的名稱、規(guī)格、數(shù)量與品牌。檢查科試劑必須由主管審核，并負(fù)責(zé)報(bào)物流中心采購，品牌不得隨意更改。杜絕浪費(fèi)和積壓。所用的試劑必須符合質(zhì)量規(guī)定，必須有三證。不得使用過期、劣質(zhì)試劑。供應(yīng)商所送的試劑由總庫清點(diǎn)后才干接受，特殊試劑由檢查科主管清點(diǎn)后才干在貨單上簽字，有出入者必須向科主任或物流中心主任報(bào)告，再將貨單交物流中心統(tǒng)一結(jié)賬。領(lǐng)用時(shí)應(yīng)檢查物品質(zhì)量和試劑品名、廠家、人份、批號、過期時(shí)間與外包裝有無滲漏等，假設(shè)有問題，應(yīng)與時(shí)向總庫反映。冰箱不能貯存乙醚、異戊烷或類似的易燃、可燃性液體。艾滋病篩查實(shí)驗(yàn)室平安防護(hù)制度為確保實(shí)驗(yàn)室人員的工作平安，避免穿插感染，請嚴(yán)格恪守平安防護(hù)制度1、工作人員要完畢與工作有關(guān)的充足有效的技術(shù)培訓(xùn)，要理解HIV危害，提高全員平安意識(shí)，實(shí)驗(yàn)室平安負(fù)責(zé)人要對工作和環(huán)境的平安負(fù)責(zé)，全部工作人員都有責(zé)任保護(hù)自己和別人的平安。3、對有放試劑、樣品血清的冰箱專人管理。4、實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)純熟掌握操作知識(shí)和消毒技術(shù)。5、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿隔離衣，戴手套，傳染性危險(xiǎn)大時(shí)應(yīng)戴雙層手套，戴防護(hù)鏡，口罩，如防護(hù)用品破損應(yīng)與時(shí)更換，不用戴手套的手觸摸暴露的皮膚等部位。6、實(shí)驗(yàn)期間盡量避免使用利器，易碎器皿，嚴(yán)禁采用口腔吸液管。7、送檢樣品應(yīng)視為有潛在傳染性，由專人接受，登記，寄存，提取。9、實(shí)驗(yàn)用吸頭、手套、隔離服、污染物、廢棄物均放在指定垃圾袋中統(tǒng)一進(jìn)展消毒，燃燒到無害化解決。10、不得在實(shí)驗(yàn)室中吃食物，化妝打扮等，不得在實(shí)驗(yàn)室會(huì)客。11、實(shí)驗(yàn)室用品〔涉及工作服〕不得用于其它用途，不可將私人和無關(guān)的物品帶入實(shí)驗(yàn)室。12、工作完畢，脫去手套后洗手，再脫去工作服，用肥皂和流動(dòng)水洗手，洗手后離開實(shí)驗(yàn)室。

13、實(shí)驗(yàn)完畢后，要對工作平臺(tái)、儀器、地面進(jìn)展消毒解決。14、遇故意外事故，應(yīng)立刻口頭和書面報(bào)告上級部門，并進(jìn)展局部解決，如含氯消毒劑浸泡傷口，洗眼，漱口等，如遇高危意外事故，除進(jìn)展局部解決外，同時(shí)應(yīng)立刻采用防止方法，涉及對其隨訪，HIV檢測，休息并暫離崗位二個(gè)月，按醫(yī)囑服用HIV藥品等。艾滋病病毒職業(yè)暴露防止解決方案為維護(hù)醫(yī)務(wù)人員與其它部門有關(guān)人員的職業(yè)平安，有效防止在工作中發(fā)生職業(yè)暴露感染艾滋病病毒，一旦發(fā)生職業(yè)暴露后最大程度的避免或減少艾滋病病毒感染，特制訂本方案。

一、職業(yè)暴露〔一〕職業(yè)暴露是指醫(yī)務(wù)人員以與有關(guān)工作人員，在從事艾滋病防治工作與有關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或者艾滋病患者的血液、體液污染了皮膚或者粘膜，或者被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭與其它銳器刺破皮膚，有可能被艾滋病病毒感染的狀況?！捕硵?shù)據(jù)分析闡明，醫(yī)護(hù)和防止保健等人員對艾滋病病毒和艾滋病患者從事醫(yī)療和實(shí)驗(yàn)檢測活動(dòng)是比擬平安的。執(zhí)行嚴(yán)格的平安操作與防護(hù)方法，醫(yī)護(hù)與檢查等人員的暴露事件是能夠避免的。二、職業(yè)暴露的防止1、醫(yī)務(wù)人員對全部病人的血液、體液(涉及羊水、心包液、胸腔液、腹腔液、腦脊液、滑液、陰道分泌物等人體物質(zhì)，下同)與被血液、體液污染的物品均視為含有傳染性的病原物質(zhì)，在接觸這些物質(zhì)時(shí)，必須采用防護(hù)方法。2、醫(yī)務(wù)人員進(jìn)展有可能接觸血液、體液的診療和護(hù)理操作時(shí)必須戴手套，操作完畢，脫去手套后立刻洗手，必要時(shí)進(jìn)展手消毒。3、在診療、護(hù)理操作過程中，有可能發(fā)生病人血液、體液飛濺到醫(yī)務(wù)人員的面部時(shí)，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)戴手套、含有防滲入性能的口罩、防護(hù)眼鏡；有可能發(fā)生血液、體液大面積飛濺或者有可能污染醫(yī)務(wù)人員的身體時(shí)，還應(yīng)當(dāng)穿戴含有防滲性能的隔離衣或者圍裙。4、醫(yī)務(wù)人員手部皮膚發(fā)生破損，在進(jìn)展有可能接觸病人血液、體液的診療和護(hù)理操作時(shí)必須戴雙層手套。5、醫(yī)務(wù)人員在進(jìn)展侵襲性診療、護(hù)理操作過程中，要確保充足的，并特別注意避免被針頭、縫合針、刀片等銳器刺傷或劃傷。

6、使用后的銳器應(yīng)當(dāng)直接放入耐刺、防滲漏的利器盒，或者運(yùn)用針頭解決設(shè)備進(jìn)展平安處置，也能夠使用品有平安性能的注射器、輸液器等醫(yī)用銳器，以防刺傷。7、嚴(yán)禁將使用后的一次性針頭重新套上針頭套。嚴(yán)禁用手直接接觸使用后的針頭、刀片等銳器。三、艾滋病病毒暴露后的防止解決〔一〕緊急局部解決：1、用肥皂液和流動(dòng)水清洗污染的皮膚，用生理鹽水沖洗粘膜。2、如有傷口，應(yīng)當(dāng)在傷口旁端輕輕擠壓，盡量擠出損傷處的血液，用再肥皂液和流動(dòng)清水沖洗；嚴(yán)禁進(jìn)展傷口的局部擠壓。3、受傷部位的傷口沖洗后，應(yīng)當(dāng)用消毒液，如70%乙醇或者0.5%碘伏進(jìn)展消毒，并包扎傷口；被暴露的粘膜，應(yīng)當(dāng)重復(fù)用生理鹽水沖洗干凈?！捕潮┞逗蟮膱?bào)告與解決程序1、醫(yī)護(hù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，要立刻上報(bào)醫(yī)院領(lǐng)導(dǎo)〔具體由醫(yī)院擬定院程序，注意給暴露者〕。與時(shí)報(bào)告天山區(qū)疾控中心，組織專家對暴露的級別和暴露源的病毒載量水平進(jìn)展評定和擬定。2、醫(yī)務(wù)人員發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后，區(qū)疾控中心應(yīng)當(dāng)會(huì)同有關(guān)醫(yī)療衛(wèi)生單位對其進(jìn)展隨訪和咨詢。隨訪和咨詢的容涉及：在暴露后第4周、第8周、第12周與6個(gè)月時(shí)對艾滋病病毒抗體進(jìn)展檢測，對服用藥品的毒性進(jìn)展監(jiān)控解決，觀察和統(tǒng)計(jì)艾滋病病毒感染的早期病癥等。不進(jìn)展暴露后防止用藥者，也要定時(shí)檢測艾滋病病毒抗體，檢測時(shí)間同上。3、在對艾滋病病毒職業(yè)暴露事件的整個(gè)解決過程中，必須始終做好工作。凡涉與暴露者個(gè)人的有關(guān)資料，不得向無關(guān)單位和人員泄露。四、暴露后防止性用藥

對發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露的醫(yī)務(wù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)暴露源病毒載量水平實(shí)施防止性用藥方案。

防止性用藥應(yīng)當(dāng)在發(fā)生艾滋病病毒職業(yè)暴露后盡早開場，最佳在4小時(shí)實(shí)施，最遲不得超出24小時(shí)；即使超出24小時(shí)，也應(yīng)當(dāng)實(shí)施防止性用藥。暴露后防止性用藥的推薦方案：1、根本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶克制劑，使用常規(guī)治療劑量，持續(xù)服用28天。如雙汰芝〔AZT與3TC聯(lián)合制劑〕

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mg/次，每日2次，用藥時(shí)間為持續(xù)服用28天。或參考抗病毒治療指導(dǎo)方案。本程序合用于輕度低危暴露。2、強(qiáng)化用藥程序：根本用藥程序加一種蛋白酶克制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量，持續(xù)服用28天。本程序合用于嚴(yán)重暴露。鑒于醫(yī)務(wù)人員暴露后的感染率很低而用藥的毒、副作用很大，因此應(yīng)嚴(yán)格掌握用藥的指征。第二局部原則操作規(guī)程第二章樣品采集與解決樣本采集接患者申請單后，填寫血樣采集統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)涉及患者日期、、年紀(jì)、門診號、采集人簽名等。用帶別離膠的負(fù)壓管采集一定量的靜脈血，顛倒混勻5~6次，室溫下自然放置半小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用3000r/min離心15min。標(biāo)本采集考前須知樣本采集嚴(yán)格按靜脈穿刺規(guī)操作。采集樣本時(shí)應(yīng)注意平安，直接接觸HIV感染/艾滋病病人血液的操作，應(yīng)戴雙層手套，里層是PE手套，外層為乳膠手套。樣本保存在一周檢測的樣本，可寄存于2~8℃；在一周后來檢測的樣本，須寄存于-20℃。樣本運(yùn)輸樣本運(yùn)輸普通為血清或血漿，不運(yùn)輸全血。容器規(guī)定：①血清應(yīng)置于帶蓋的1.5ml離心管，管外應(yīng)有明顯的標(biāo)記，與門診號要清晰；②在離心周邊應(yīng)墊有可緩沖吸水材料，以免破碎；③隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣本分開放置。④外層容器規(guī)定耐受性好、防滲漏、容納并保護(hù)第一層容器。天氣過熱，需采用干冰或冰壺冷藏運(yùn)輸。第二章原則操作程序一、金豪【辦法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反響板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV〔1+2〕抗體?！綡IV篩查實(shí)驗(yàn)操作程序】實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18~23℃〕半小時(shí)。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。或液體有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。實(shí)驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個(gè)陰性對照孔，2個(gè)HIV-1陽性對照孔。取陽性對照和陰性對照分別充足混勻各50ul參加對照孔中，空白對照孔只加樣品稀釋液。2、每檢測孔參加樣品稀釋液50ul，待檢樣品50ul，可振搖5~10S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育30min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍〔用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方與底部不應(yīng)殘存液體，嚴(yán)禁在濾紙上拍干〕。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反響板，37±2℃孵育30min。6、同環(huán)節(jié)4。7、每孔參加底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔參加50ul1M硫酸終止反響，充足混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值?！踩硨?shí)驗(yàn)成果1、NC≤0.022、Cutoff值＝0.1+NC＝0.123、標(biāo)本OD值不大于Cutoff為陰性，不不大于或等于Cutoff為陽性〔四〕報(bào)告：對呈陰性反響的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反響的樣品，須進(jìn)展復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。二、科華生物【辦法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】本試劑盒采用HIV特異性抗原gp160和gp36等包被微孔反響板，用gp36、gp41標(biāo)記辣根過氧化物酶、采用雙抗原夾心法捕獲人血清、血漿標(biāo)本中的HIV〔1+2〕抗體?！綡IV篩查實(shí)驗(yàn)操作程序】實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18~23℃〕半小時(shí)。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：25倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。或液體有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解。實(shí)驗(yàn)操作：1、裝好所需使用數(shù)目的孔條。設(shè)空白對照孔2孔，2個(gè)陰性對照孔，3個(gè)HIV-1陽性對照孔。2、每孔參加100ul待檢樣品與對照〔對照要后加〕，可振搖15S。3、覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育60±2min。4、置洗板機(jī)上洗滌5遍〔用洗液將反映孔完全加滿，靜置30S，共洗滌5遍，洗完后孔上方與底部不應(yīng)殘存液體，嚴(yán)禁在濾紙上拍干〕。5、每孔加酶結(jié)合物100ul，取新粘膠紙覆蓋反響板，37±2℃孵育30min。6、同環(huán)節(jié)4。7、每孔參加底物緩沖液50ul，TMB50ul，混勻，不必覆蓋粘膠紙，37±2℃孵育10min。8、每孔參加50ul1M硫酸終止反響，充足混勻。9、在2h置于酶標(biāo)儀讀數(shù)，單波長450nm，或雙波長450/630nm測OD值。實(shí)驗(yàn)成果1、NC≤0.082、Cutoff值＝陽性對照值×10%3、標(biāo)本OD值不大于Cutoff為陰性，不不大于或等于Cutoff為陽性報(bào)告：對呈陰性反響的樣品，可由實(shí)施檢測的實(shí)驗(yàn)室出具HIV抗體陰性報(bào)告；對呈陽性反響的樣品，須進(jìn)展復(fù)檢，不能出陽性報(bào)告。三、英科新創(chuàng)【辦法】膠體金法【原理】本試劑盒采用膠體金免疫技術(shù)和層析原理，定性測定血清樣本中的HIV1/2型抗體。血清陽性樣本中HIV抗體與膠體金標(biāo)記抗原結(jié)合形成復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿紙條向前移動(dòng)，通過檢測線時(shí)與預(yù)包被的重組Au－HIV〔1+2〕－Ag那么在對照線處與抗HIV單克隆抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標(biāo)本那么僅在對照線處顯色，30分鐘觀察成果即可?！綡IV篩查實(shí)驗(yàn)操作程序】實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18~23℃〕半小時(shí)，編號。戴好帽子、口罩、雙層手套。將所需測試卡從包裝盒中取出，置于臺(tái)面上。實(shí)驗(yàn)操作：1、用微量加樣器取60ul樣本血清，加到測試卡的加樣處。2、加樣后，陽性標(biāo)本可在1~30分鐘檢出。30分鐘后觀察成果將造成影響。實(shí)驗(yàn)成果陽性：測試卡在檢測區(qū)和對照區(qū)位置出現(xiàn)兩條紫紅色條帶。如果檢測的紫紅色條帶隱約可見，應(yīng)用酶免試劑重復(fù)檢測。陰性：測試卡只在對照區(qū)位置出現(xiàn)一條紫紅色條帶。失效：對照區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶?！巨k法】雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法【原理】采用雙抗原夾心兩步法檢測人血清或血漿樣本中的HIV抗體。當(dāng)待檢樣本中存在HIV抗體時(shí)，在反響過程中形成“固相HIV抗原－HIV抗體－酶標(biāo)記HIV抗原〞的免疫復(fù)合物，參加底物后形成顯色反響?！綡IV篩查實(shí)驗(yàn)操作程序】〔一〕實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：實(shí)驗(yàn)開場前將試劑和樣品放置于室溫〔18~25℃〕半小時(shí)，編號。換隔離衣，戴好帽子、口罩、雙層手套。緩沖液配制：用蒸餾水1：19倍稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。或液體有結(jié)晶，應(yīng)放置在37℃直至溶解?！捕硨?shí)驗(yàn)操作1.按次序分別在對應(yīng)孔參加50ul待測樣品與陰、陽性對照血清。2.覆上封板膜，置37℃3.用洗滌液充足洗滌5次〔每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時(shí)間〕，扣干。4.分別在每孔中參加酶標(biāo)抗原100ul。5.覆上封板膜，置37℃6.用洗滌液充足洗滌5次〔每次應(yīng)保持30~60秒浸泡時(shí)間〕，扣干。7.每孔加底物A、B各50ul，輕拍混勻，覆上封板膜，置37℃8.每孔參加終止液50ul。9.用酶標(biāo)儀測定?！踩硨?shí)驗(yàn)成果3.樣品OD值不不大于或等于臨界值為初篩陽性，不大于臨界值為陰性。第三章成果報(bào)告與考前須知【復(fù)檢實(shí)驗(yàn)】對初篩呈陽性反響的樣品用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的篩查試劑重復(fù)檢測。如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反響，那么報(bào)告HIV抗體陰性；如均呈陽性反響，或一陰一陽，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展確認(rèn)?！簿唧w詳見流程圖〕【篩實(shí)驗(yàn)成果的報(bào)告】對HIV抗體篩查實(shí)驗(yàn)，呈陰性反響者可出具“HIV抗體陰性〞報(bào)告。對初篩實(shí)驗(yàn)呈陽性反響者不能出陽性報(bào)告，可出具“HIV抗體待復(fù)查〞報(bào)告。【初篩實(shí)驗(yàn)呈陽性反響樣品的轉(zhuǎn)送】如需送上級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)展復(fù)測或確認(rèn)，需要填寫“HIV抗體復(fù)測送檢單〞，經(jīng)1名檢查人員和1名含有中級以上技術(shù)職稱的人員審核簽字，與血樣品一同送天山區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室，再轉(zhuǎn)送市疾控中心艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室，或在本實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢后直接送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室?！静僮髋_(tái)消毒解決】用3~5%84消毒液擦拭臺(tái)面，如工作臺(tái)被溢出物污染，那么用消毒液浸泡30分鐘后，再行擦拭。【房間消毒】每日用紫外線照射30~60min【辦法學(xué)特性與考前須知】試劑盒4~30℃枯燥保存。使用期16個(gè)月。抗凝全血應(yīng)采用EDTA，樣品應(yīng)避免溶血。樣品應(yīng)在收集后7天檢測，2~8℃保存，如果不不大于7天，應(yīng)冷凍保存。測試卡僅用于HIV抗體的現(xiàn)場初篩，檢測陽性必須用ELISA辦法進(jìn)一步確認(rèn)。樣本的加樣應(yīng)使用微量加樣器精確參加。實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持一定濕度、避風(fēng)，18~25℃進(jìn)展。本試劑盒應(yīng)視為有感染源的物品，應(yīng)按生物危險(xiǎn)樣品解決?！狙寮訕颖怼恳姼郊?。每次檢測完畢需填寫血清加樣表，由審核者簽字復(fù)核，存檔，以備查。第三局部設(shè)備SOP文獻(xiàn)一、普朗自動(dòng)酶標(biāo)儀DNM-9602儀器介紹RT-2100C是一臺(tái)網(wǎng)絡(luò)化的酶標(biāo)免疫測試分析儀器，可廣泛用于傳染病、腫瘤標(biāo)志物、血液病、艾滋病、分泌障礙測定等診療領(lǐng)域。儀器原理光學(xué)與比色系統(tǒng)光學(xué)與比色系統(tǒng)信號放大A/D轉(zhuǎn)換計(jì)算機(jī)LCD顯示屏觸摸屏打印機(jī)環(huán)境規(guī)定：避免直曬溫度：10℃~40℃，濕度20%~85%電源必須接地良好電源穩(wěn)定，嚴(yán)禁與大功率用電器共用電源操作環(huán)節(jié)4．1開機(jī)翻開儀器背面的電源開關(guān)，等待約10秒鐘，開機(jī)初始化流程要完畢下列工作：系統(tǒng)程序加載系統(tǒng)自檢讀取顧客數(shù)據(jù)前端初始化等待光源穩(wěn)定：儀器需要等待光源穩(wěn)定約1分鐘左右。光路自檢：期間濾光片輪會(huì)轉(zhuǎn)動(dòng)，酶標(biāo)板將來回走板一次。開機(jī)完畢后，進(jìn)展主菜單窗口。4．2項(xiàng)目設(shè)立在主菜單中按[項(xiàng)目設(shè)立]鍵，進(jìn)入項(xiàng)目列表窗口。4．2．1新建與更改項(xiàng)目按[新建]或[更改]鍵，添加或更改項(xiàng)目，如果項(xiàng)目數(shù)已經(jīng)超出100，將無法創(chuàng)立新項(xiàng)目。按圖所示設(shè)立參數(shù)設(shè)立。項(xiàng)目名稱：該項(xiàng)必須輸入，注意不要與已經(jīng)存在的項(xiàng)目名重復(fù)。試劑名稱：根據(jù)所用試輸入，也能夠不輸入。波長：從列表中選用，注意主波長和次波長不能重復(fù)。計(jì)算辦法：從列表中選用雙樣本：假設(shè)選擇雙樣本，那么布板時(shí)每個(gè)樣本孔的相鄰孔自動(dòng)設(shè)立為重復(fù)孔，計(jì)算時(shí)取兩者吸光度的平均值。空白上限：職由試劑規(guī)定空白必須不超出0.05,那么空白應(yīng)設(shè)為<0.05，測試時(shí)如果空白孔吸光度值超出設(shè)定的上限，系統(tǒng)會(huì)提示顧客“空白也吸光度值過高〞。定量計(jì)算，根據(jù)試劑闡明輸入：原則品數(shù)量：選擇2~8個(gè)原則品。濃度單位：從列表中選擇。雙原則：假設(shè)選擇雙原則：那么布板時(shí)每個(gè)原則孔的相鄰孔被自動(dòng)設(shè)立為重復(fù)孔，計(jì)算時(shí)取兩者吸光度的平均值。原則品吸光度：雙擊原則品濃度列表項(xiàng)，能夠在彈出窗口中輸入濃度值，注意原則品濃度次序必須為由小到大。8〕計(jì)算，按試劑闡明在窗口中輸入：Cut-off公式系數(shù)：各鐘試劑的定性公式如有不同形式如S/N，〔N-S〕/N等均可轉(zhuǎn)換為S/〔X*N+Y*P+Fac〕的形式。陰性對照和陽性對照的吸光度圍：對照的吸光度超出上限和下限進(jìn)分別按上限和下限計(jì)算。例如有試劑規(guī)定陰性對照不大于0。05按0。05計(jì)，那么陰性對照下限應(yīng)設(shè)為0。05。對照：能夠任意設(shè)立對照，但對照的數(shù)量不超出5個(gè)，計(jì)算時(shí)取全部對照吸光度的平均值。9〕陰陽性鑒定設(shè)立窗口在此窗口中輸入鑒定陰性和陽性的臨界值，吸光度模式下，臨界值為吸光度值：Cut-off方式下，臨界值為樣本與Cut-off值的比值，定量計(jì)算方式下，臨界值為濃度值。定性方式分為3類：正向閾值模式：陰性＜陰性臨界值，陽性≥陽性臨界值，兩者之間為灰區(qū)，在此區(qū)間的樣本鑒定為可疑。反向閾值模式：陰性＞陰性臨界值，陽性≤陽性臨界值。不需要鑒定陰陽性：在定性方式中選擇“無。全部參數(shù)設(shè)立完畢，按[完畢]鍵。4．3樣品測試在主菜單中按[樣品測試]鍵，進(jìn)入以下窗口：布板方向：橫向或縱向進(jìn)板方式：選擇持續(xù)方式〔＜5秒〕提高測量速度，選擇步進(jìn)方式〔＜15秒〕獲得更高的測量精度。振板參數(shù)：振板速度分快速，中速和慢速3檔，振板時(shí)間1~60秒，也能夠選擇不振板。設(shè)定完以上參數(shù)后，按[擬定]鍵，進(jìn)入布板窗口。4．4布板4．4．1樣本任意點(diǎn)擊欲設(shè)立為樣本的孔位，樣本號從1起自動(dòng)遞增并顯示在該孔位上。如果要修改樣本號，可再次點(diǎn)擊該孔位。4．4．2空白空白孔在項(xiàng)目測試中用以吸光度調(diào)零，即其它孔位的吸光度均要減去空白孔吸光度值。根據(jù)不同項(xiàng)目測試的規(guī)定，能夠選擇與否設(shè)定空白。舊空白的保存和使用：空白孔的測試成果將自動(dòng)保存，如果在同一項(xiàng)目的后續(xù)測試中不重新設(shè)定空白，那么系統(tǒng)自動(dòng)用舊空白進(jìn)展計(jì)算。第個(gè)項(xiàng)目只允許設(shè)立一種空白孔，如果在設(shè)立空白孔時(shí)多次點(diǎn)擊不同的孔位，那么只有最后一次點(diǎn)擊的孔位被設(shè)定為空白孔，前面設(shè)立的空白孔被自動(dòng)去除。4．4．3依次設(shè)立陰性對照和陽性對照。按[開場]鍵，系統(tǒng)確認(rèn)布板無誤后，開場走板測試。走板完畢，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入吸光度顯示。4．5關(guān)機(jī)在主菜單中按[關(guān)機(jī)]，系統(tǒng)顯示關(guān)機(jī)確認(rèn)窗口，按[YES]執(zhí)行關(guān)機(jī)程序，按[NO]返回主菜單。儀器維護(hù)保持儀器工作環(huán)境的清潔。儀器外表的清潔，能夠用中性清潔劑和濕布擦拭。液晶顯示屏請用柔軟的布清潔勿讓任何溶劑，油脂類，腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。二、DG3080自動(dòng)洗板機(jī)1

目的規(guī)洗板機(jī)的操作程序，確保洗板機(jī)的正常狀態(tài)。

2

合用圍

本實(shí)驗(yàn)室DNM-9602洗板機(jī)的操作。

3

操作人員

本實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)人員。

4

操作環(huán)節(jié)

4.1

拔掉廢液瓶口的塞子〔接有與洗板機(jī)相連的廢液管〕，倒掉廢液瓶的廢液，再把塞子安緊在廢液瓶口上。注意不要讓廢液管擰緊，以確保廢液管的暢通。

4.2

擰開洗液瓶的蓋子〔接有與洗板機(jī)相連的洗液管〕，倒掉前一天洗液瓶里剩的洗液，倒進(jìn)新配的洗液。擰緊蓋子，注意不要讓洗液管擰緊，以確保洗液管

的暢通。

4.3

確保待洗反響板全部的孔處在同一水平位置，以免孔邊沿過高碰到洗板機(jī)的吸液針。

4.4

開機(jī)

插上電源，翻開電源開關(guān)〔按背面板【POWER】鍵〕，儀器顯示“儀器復(fù)位中，請稍候〞儀器初始化完畢后。儀器顯示：“就緒，現(xiàn)在程序#X請選擇功效鍵〞X處顯示的數(shù)字〔圍0~15之間〕表達(dá)現(xiàn)在準(zhǔn)備就緒的是第幾號程序。此時(shí)儀器正處在待機(jī)狀態(tài)，顧客可進(jìn)展下一步操作。

4.5

預(yù)洗

在待機(jī)狀態(tài)下，使預(yù)洗槽處在清洗頭下方，按下【預(yù)洗/返回】鍵，清洗頭抬起，電磁閥翻開，洗液進(jìn)入預(yù)洗槽。清洗頭將對預(yù)洗槽洗滌3次，清洗容量為400UL，但清洗時(shí)沒有暫停和浸泡環(huán)節(jié)。

4.6

編程

按下【編程】鍵。進(jìn)入編程菜單界面。畫面最左邊有閃動(dòng)的批示光標(biāo)“→〞，按下【↑】鍵或【↓】鍵移動(dòng)所需要設(shè)定的參數(shù)前，按下【擬定】鍵，即選中了該參數(shù)項(xiàng)，再按下【↑】或【↓】鍵設(shè)定該參數(shù)的參數(shù)值。

4.7

運(yùn)行

按下【運(yùn)行】鍵，系統(tǒng)將立刻按照顧客設(shè)定的程序執(zhí)行。

4.8

關(guān)機(jī)

5

鍵盤功效

5.1

【編程】：進(jìn)入編程菜單。用來設(shè)定儀器的運(yùn)行方式與各項(xiàng)參數(shù)。

5.2

【運(yùn)行】：執(zhí)行先定的程序。

【↑】：處在待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來順次遞增程序號；處在編程狀態(tài)時(shí)，用來使光標(biāo)“→〞上移。

【↓】：處在待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來順次遞減程序號；處在編程狀態(tài)時(shí)，用來使光標(biāo)“→〞下移。

5.3

【復(fù)位】：終止現(xiàn)在操作，使儀器恢復(fù)到開機(jī)狀態(tài)。

5.4

【預(yù)洗/返回】：處在待機(jī)狀態(tài)時(shí)，此鍵用來使儀器執(zhí)行預(yù)洗程序；處在編程狀態(tài)時(shí)，此鍵可使顯示面板界面回到待機(jī)狀態(tài)

5.5

【擬定】：確認(rèn)光標(biāo)所批示的參數(shù)項(xiàng)。

6

編制洗滌程序

編程菜單中涉及清洗方式、清洗頭數(shù)、清洗條數(shù)、清洗容量、加洗次數(shù)、清洗次數(shù)、暫停時(shí)間、浸泡時(shí)間8種參數(shù)項(xiàng)目。

6.1

清洗方式，條洗和板洗。

6.2

清洗頭數(shù)，可設(shè)定為12頭或8頭。

6.3

清洗條數(shù)，或設(shè)定在1~12圍，該參數(shù)設(shè)立與清洗頭數(shù)有關(guān)，當(dāng)頭數(shù)為12時(shí)條數(shù)最大值為8。反之當(dāng)頭數(shù)為8時(shí)，條數(shù)最大值為12。

6.4

清洗容量，可在50UL、100UL、150UL、200UL、250UL、300UL、350UL、400UL、450UL中選擇設(shè)定。

6.5

加洗次數(shù)，加洗次數(shù)可在1~3圍設(shè)定。

6.6

清洗次數(shù)，清洗次數(shù)可在1~10圍設(shè)定。

6.7

暫停時(shí)間，當(dāng)清洗方式為知洗時(shí)，清洗頭在注滿酶標(biāo)板每行后啟動(dòng)暫停，時(shí)間可在0~10秒任意設(shè)定，增量為1秒；當(dāng)清洗方式為板洗時(shí)，清洗頭在每次過板注滿水后啟動(dòng)暫停，時(shí)間可在0~60秒任意設(shè)定，增量為5秒。

6.8

浸泡時(shí)間，普通清洗過程中，清洗頭在酶標(biāo)板最后一行中注滿水后，即啟動(dòng)浸泡功效。浸泡時(shí)間可在0~300秒任意設(shè)定，增量為30秒，但在加洗程序中不能啟動(dòng)浸泡功效。

7

維護(hù)保養(yǎng)程序

7.1

日常不用時(shí)，拔掉電源插頭。

7.2

每天洗板機(jī)工作完畢時(shí)，要對外其進(jìn)展清潔，用濕抹布擦洗洗板機(jī)的外壁與載物臺(tái)，以確保其干凈。用蒸餾水將全部的管道清洗一遍，避免洗液的結(jié)晶堵塞管道。

7.3

與時(shí)倒棄廢液，以免廢液瓶過滿致使廢液回流而造成洗板機(jī)的故障。

7.4

確保待洗的反響板的孔邊沿不要過高且水平，以免造成吸液針損傷。

7.5

定時(shí)將洗液與廢液管道拆卸下來進(jìn)展沖洗，以確保管道的暢通。

8

儀器消毒9

考前須知10

職責(zé)

10.1

實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照本SOP進(jìn)展操作。

10.2

本SOP的改動(dòng)，可由任一使用本儀器的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、科主任簽字同意方可通過。三、電熱恒溫水箱原理接通電源，通過控溫器設(shè)定溫度值，電熱管加熱，水溫升到設(shè)定溫度時(shí)，電源斷開，停止加熱；當(dāng)水溫低于設(shè)定值時(shí)，電源接通，重新加熱，如此循環(huán)工作。使用辦法使用時(shí)應(yīng)平放在固定臺(tái)面上，將蒸餾水加至屜板50mm以上。批示燈：綠燈