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文檔簡介

實驗二細菌簡單染色法革蘭氏染色法一、目的要求1．鞏固油鏡的使用方法；2．學(xué)習(xí)微生物涂片、染色基本技術(shù)，掌握細菌的簡單染色法；3．學(xué)習(xí)、掌握細菌的革蘭氏染色法；4．建立“無菌操作”的概念，學(xué)習(xí)其技術(shù)。二、實驗原理簡單染色法：是利用單一染料對細菌進行染色的方法，常用堿性染料。只能觀察微生物的大小、形狀、和細胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：

革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。革蘭氏染色丹麥C.Gram創(chuàng)立，用于細菌分類學(xué)研究細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)G－肽聚糖層較薄，交聯(lián)度低，含較多脂質(zhì)，故用乙醇等有機溶劑脫色時融解了類脂質(zhì)，增加了細胞的通透性，使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，經(jīng)沙黃復(fù)染呈紅色。G＋細胞壁結(jié)構(gòu)致密，用脫色劑處理后，肽聚糖層孔徑縮小，通透性降低，故細菌仍保留初染時的紫色。三、實驗材料變形桿菌、表皮葡萄球菌載玻片、接種環(huán)、酒精燈、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙等。革蘭氏染色液一套四、實驗步驟1．簡單染色載玻片——中心加半滴水——無菌操作取菌——涂布于水中（1cm2±）——干燥——火焰固定——染色（1~2min）——水洗——干燥——鏡檢2.革蘭氏（Gram）染色

涂片——干燥——固定——結(jié)晶紫初染（1~2min）

——水洗——用碘液沖去殘水，并覆蓋1min——水洗——95%酒精脫色（約20－30秒）——立即水洗——番紅復(fù)染約5分鐘——水洗——干燥——鏡檢（混合涂片染色）（觀看視頻）注意：1．革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是掌握脫色程度2．用培養(yǎng)18

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