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文檔簡介

應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測AFP在轉(zhuǎn)錄水平上的的表達(dá)情況實驗?zāi)康耐ㄟ^RT-PCR技術(shù)，AFP的mRNA在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以mRNA為模版合成cDNA,再以此cDNA為模版進(jìn)行PCR反應(yīng)甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,

AFP)是腫瘤相關(guān)的胚胎特異α-球蛋白,分子量約為70

kDa，是一直以來都被認(rèn)為是臨床診斷胎兒出生缺陷和肝細(xì)胞癌的經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物。

AFP基因的DNA結(jié)構(gòu)AFP基因約為20

kbp大小,

由15個內(nèi)含子和14個外顯子組成,

包含590個氨基酸,

其中在N末端有19個氨基酸是信號肽序列,

AFP蛋白質(zhì)的分子量約70

kDa.

AFP被歸類于白蛋白基因超家族,

這個家族的結(jié)構(gòu)特點為:

由半胱氨基酸殘基,

通過二硫鍵結(jié)合,

內(nèi)折成一個環(huán),

形一個U形的3級結(jié)構(gòu)域.

這些分子,

通過晶體X-射線結(jié)果確定都含有3個結(jié)構(gòu)域。甲胎蛋白的基因序列實驗方法：

RT-PCR技術(shù)

RT-PCR（ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction）即逆轉(zhuǎn)錄PCR，是將RNA的反轉(zhuǎn)錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細(xì)胞中基因表達(dá)水平，細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。

另：熒光PCR技術(shù)實驗原理原理是：提取組織或細(xì)胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機(jī)引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，而獲得目的基因或檢測基因表達(dá)。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。試驗技術(shù)路線1、

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