正交試驗(yàn)法優(yōu)化茵梔黃顆粒提取工藝

正交試驗(yàn)法優(yōu)化茵梔黃顆粒提取工藝【摘要】?jī)?yōu)化茵梔黃顆粒的提取工藝。［方法］以干膏得率和綠原酸提取率為考核指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)法對(duì)茵梔黃顆粒水提取工藝進(jìn)行考察。［結(jié)果］茵梔黃顆粒最佳提取工藝的方案為A2B1C2，即加水量為8倍，提取2次，每次1h。［結(jié)論］優(yōu)選的提取工藝科學(xué)合理，適于大規(guī)模生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】茵梔黃顆粒高效液相色譜法正交試驗(yàn)提取工藝

Abstract：［Objective］TooptimizeextractingprocessionofYinzhihuanggranules.［Methods］Theextractionprocessionwasstudiedbyorthogonaldesignwithdryextractyieldandtotalflavonoidsasthedetectivemarker.［Results］TheoptimumextractionconditionisA2B1C2,whichisadded8foldofwater,anddecoctedfor2times,1hourateverytime.［Conclusion］Theoptimizedwaterdecoctingconditionisreasonableandscientific,anditcouldbeusedinfuturelargescaledpreparationofYinzhihuanggranules.

Keywords：Yinzhihuanggranules;HPLC;orthogonaldesign;extractiontechnical

茵梔黃顆粒系由中藥茵陳、梔子、黃芩經(jīng)水提醇沉工藝而制成的顆粒劑，具有解熱利尿、保肝降酶、退黃利膽的作用，用于治療各種黃疸性肝炎。本實(shí)驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)方法，以干膏得率和綠原酸提取率為指標(biāo)，對(duì)茵梔黃顆粒水提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。

1儀器與材料

Waters600高效液相色譜儀，Waters600E四元泵，Waters2996PDA檢測(cè)器，Empower工作站。

綠原酸對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110753200212。藥材購(gòu)于義烏市醫(yī)藥有限公司，經(jīng)鑒定符合《中國(guó)獸藥典》2000版［1］規(guī)定。水為重蒸餾水，乙腈為色譜純，磷酸為分析純。

2方法與結(jié)果

正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選用L9正交表，以干膏得率和綠原酸提取率為考核指標(biāo)，考察水提取中的加水量、煎煮時(shí)間和煎煮次數(shù)3個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)3水平。其因素水平見(jiàn)表1。

表1正交試驗(yàn)因素水平表

樣品提取液的制備按處方配比稱取藥材適量，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行水提取，藥液經(jīng)濾紙濾過(guò)，濾液濃縮至1∶，備用。

干膏得率的測(cè)定精密量取上述提取液20ml，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥至恒重，計(jì)算出干浸膏得率，結(jié)果見(jiàn)表2。

綠原酸含量的測(cè)定色譜條件色譜柱為SymmetryRC18柱；流動(dòng)相為乙腈%磷酸水溶液；流速：1mL/min；進(jìn)樣量：20mL；柱溫：30℃；柱效：理論板數(shù)不低于4000。在此條件下，綠原酸與其他組分能達(dá)到較好分離,峰純度達(dá)到要求，見(jiàn)圖1。

圖1綠原酸對(duì)照品與樣品的高效液相色譜圖對(duì)照品；2.樣品

對(duì)照品溶液的制備精密稱取綠原酸度對(duì)照品4mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，即得。供試品溶液的制備精密吸取提取液1ml，置10ml量瓶中，加冰醋酸，加水稀釋至刻度，搖勻，離心，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液避光保存，作為供試品溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取綠原酸對(duì)照品溶液、、、、置10ml量瓶中，加入冰醋酸，加水稀釋至刻度，混勻，以微孔濾膜濾過(guò)。各取續(xù)濾液20μl分別注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)作圖,得到一條直，其回歸方程：y=，說(shuō)明綠原酸在～范圍內(nèi)，與峰面積之間呈良好的線性關(guān)系。

圖2綠原酸對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密度考察精密吸取對(duì)照品溶液20μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，在上述色譜條件下測(cè)定綠原酸對(duì)照品的峰面積，平均峰面積為1609030；RSD=%。穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品溶液20μl，分別于0、1、2、3、4和6h進(jìn)樣，測(cè)定供試品溶液中綠原酸的峰面積，RSD=%，說(shuō)明樣品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。重現(xiàn)性試驗(yàn)精密量取同一批提取液5份，按供試品溶液的制備項(xiàng)下制備試液；進(jìn)樣20μl，測(cè)定峰面積，RSD為％，重現(xiàn)性良好。回收率試驗(yàn)精密量取已知含量的提取液6份，置10ml棕色量瓶中，分別加入綠原酸對(duì)照品，按供試品溶液的制備項(xiàng)下制備試液；進(jìn)樣20μl，依法測(cè)定綠原酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。平均回收率為%，RSD=%。含量測(cè)定精密量取對(duì)照品溶液4ml置10ml量瓶中，加冰醋酸，加水至刻度，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾，制成每1ml含綠原酸32μg的對(duì)照品溶液。精密吸取提取液1ml，置10ml量瓶中，加冰醋酸，加水稀釋至刻度，搖勻，離心，用微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液避光保存，作為供試品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20ml；注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，結(jié)果見(jiàn)表2。

表3回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2正交試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果分析方差分析結(jié)果見(jiàn)表4和表5。以干膏得率為考察指標(biāo)，表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為CAB；方差分析結(jié)果表明：C因素影響有顯著性差異，A和B因素對(duì)干膏得率則無(wú)顯著性影響，以A3B3C3組合為佳。以綠原酸提取率為考察指標(biāo)，表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次為CAB；方差分析結(jié)果表明：A因素和B因素對(duì)綠原酸提取量無(wú)顯著性影響，而C因素的影響有極顯著性差異，以A2B1C2組合為佳。

表4浸膏得率方差分析表

表5綠原酸提取率方差分析表

驗(yàn)證試驗(yàn)鑒于綠原酸提取量這一指標(biāo)較重要，同時(shí)兼顧省時(shí)節(jié)能，故擬確定水提取工藝為A2B1C2。取同一批藥材，按處方比例稱取藥材按A2B1C2進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，按上述方法測(cè)定干膏得率及綠原酸提取率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

由表6可見(jiàn)，A2B1C2工藝提取的干膏得率和綠原酸提取率均與原4號(hào)樣品無(wú)顯著差異，故確定水提取工藝為A2B1C2，即加水量為8倍，提取2次，每次1h。

3討論

茵梔黃顆粒系復(fù)方制劑，成分復(fù)雜。根據(jù)方中各藥的有效成分及其溶解性能，設(shè)計(jì)確定采用水提工藝。綠原酸系本方中主藥茵陳的利膽活性成分和質(zhì)量控制的指標(biāo)成分［2,3］，也為本方中君藥梔子中主要的有機(jī)酸類成分，具有顯著的抗炎活性［4］。因此，除以干膏得率為考核指標(biāo)外，同時(shí)測(cè)定綠原酸提取率，以綜合評(píng)價(jià)工藝的合理性。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定綠原酸含量，可不經(jīng)分離，直接測(cè)定。方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏，重現(xiàn)性及回收率均符合要求。

【參考文獻(xiàn)】

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中