chapter4-1藥物定量分析與分析方法驗證

第四章藥物定量分析與分析方法驗證

⊙定量分析樣品的前處理方法⊙定量分析方法的特點(diǎn)⊙藥品分析方法的驗證⊙生物樣品分析方法的基本要求10/4/20231一、定量分析樣品前處理方法Pretreatmentofsampleusedinquantitativeanalysis化學(xué)原料藥藥物制劑含金屬或含鹵素、硫、磷、硒等特殊元素10/4/20232泛影酸碘番酸磺溴酞鈉三氯叔丁醇碘苯酯10/4/20233含金屬的有機(jī)藥物酒石酸銻鉀富馬酸亞鐵卡巴胂有機(jī)金屬藥物10/4/20234定量分析樣品前處理方法＊不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1、直接測定法－含金屬或C-M不牢固的有機(jī)金屬配位滴定法－乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）配位化合物，葡萄糖酸鈣氧化還原滴定法－富馬酸亞鐵（硫酸鈰，鄰二氮菲）；葡萄糖酸銻鈉（碘量法，硫代硫酸鈉滴定液滴定）10/4/20235定量分析樣品前處理方法＊不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法2、經(jīng)水解后測定法－鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當(dāng)溶劑再水解）直接回流后測定 堿化回流后測定－三氯叔丁醇酸水解后測定－十一烯酸鋅10/4/20236定量分析樣品前處理方法＊不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法3、經(jīng)氧化還原后測定法－鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（一般用于測碘）堿性還原后測定法－如泛影酸酸性還原后測定法－如碘番酸利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測定含量10/4/20237＊經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法濕法破壞HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4金屬以高價態(tài)存在定量分析樣品前處理方法凱氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）1883年待測物與硫酸在凱氏燒瓶共熱，有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解（消解或消化）成CO2和H2O，有機(jī)結(jié)合的氮變?yōu)闊o機(jī)氮，與過量的硫酸結(jié)合為硫酸氫銨及硫酸銨，經(jīng)NaOH堿化后變?yōu)镹H3隨水蒸汽餾出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后進(jìn)行酸堿滴定。10/4/202382007出口美國寵物毒糧

2008中國結(jié)石兒奶粉三聚氰胺，melamine（化學(xué)式：C3H6N6），俗稱蜜胺、蛋白精

10/4/2023910/4/202310凱氏定氮法（kjeldahlnitrogendetermination）儀器裝置

凱氏燒瓶：為30~50ml（半微量法）或500ml（常量法）硅玻璃或硼玻璃制成的硬質(zhì)茄形燒瓶蒸餾裝置（半微量法）：1000ml的圓底燒瓶（A）、安全瓶（B）、連有氮?dú)馇虻恼麴s器（C）、漏斗（D）、直形冷凝管（E）、100ml錐形瓶（F）橡皮管夾（G、H）10/4/202311＊經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法干法破壞：無水碳酸鈉或氧化鎂，注意溫度氧瓶燃燒法（oxygenflaskcombustionmethod）定量分析樣品前處理方法10/4/202312空心A.燃燒瓶B.鉑絲網(wǎng)C.D.盛固體樣品濾紙及其折疊法E.F.G.稱取液體樣品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置及稱樣方法10/4/202313氧瓶燃燒法樣品吸收液

測定方法含氟有機(jī)藥物H2O

pH4.3HAc-NaAc

Buffer茜素氟藍(lán)

分光光度法含氯有機(jī)藥物NaOH溶液

銀量法汞量法

分光法含溴有機(jī)藥物H2O2-NaOH液

或NaOH液-

銀量法分光法

硫酸肼飽和液含碘有機(jī)藥物NaOH液-銀量法碘量法硫酸肼飽和液

汞量法分光法10/4/202314碘苯酯含量測定

取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用NaOHT.S.2ml與H2O10ml為吸收液，待吸收完全后，加溴-醋酸溶液10ml，密塞，振搖放置數(shù)分鐘，加甲酸約1ml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約3~5min，以除去剩余的溴蒸氣，加KI2g，密塞，搖勻，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的硫代硫酸鈉液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H29IO210/4/202315二、定量分析方法的特點(diǎn)容量分析法

光譜分析法色譜分析法10/4/202316定量分析方法的特點(diǎn)1、容量分析法滴定法－化學(xué)計量點(diǎn)－指示劑準(zhǔn)確，相對誤差<0.2％專屬性較差T，滴定度，單位體積（VB＝1ml）的滴定液相當(dāng)于被測藥物的量WA＝mB××MA，量綱為mg/ml。直接滴定法、間接定量法10/4/202317定量分析方法的特點(diǎn)2、光譜分析法(1) 紫外－可見分光光度法A＝lg＝ECL靈敏度高、準(zhǔn)確度高、操作簡單、應(yīng)用廣泛①對照品比較法、②吸收系數(shù)法、③計算分光光度法、④比色法(2) 熒光分光光度法靈敏度高、易被干擾、線性范圍窄10/4/202318定量分析方法的特點(diǎn)3、色譜分析法(1) HPLC內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量外標(biāo)法測定供試品中主成分含量(2) GC內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中主成分含量10/4/202319三、藥品分析方法驗證指導(dǎo)原則化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物非臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物臨床藥代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導(dǎo)原則藥物穩(wěn)定性試驗指導(dǎo)原則緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則10/4/202320目的：證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求效能指標(biāo)：評價分析方法的尺度效能指標(biāo)包括:精密度,準(zhǔn)確度,檢測限,定量限,選擇性,線性與范圍,耐用性藥品分析方法驗證10/4/202321藥品分析方法驗證1、準(zhǔn)確度（accuracy）：測量值與真實值接近的程度表示:回收率測定方法：回收試驗加樣回收試驗10/4/2023222、精密度（precision）：定義:同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表示：標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD),相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)重復(fù)性:同一實驗室,同一人多次測定的精密度中間精密度:同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度

重現(xiàn)性:不同實驗室，不同人測定的精密度藥品分析方法驗證10/4/2023233、專屬性（specificity）指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性)。藥品分析方法驗證10/4/2023244、檢測限（limitofdetection，LOD）藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)測定:信噪比法(S:N=3:1)5、定量限（1imitofquantitation，LOQ）藥物能被定量測出的最低濃度(μg/ml)測定:信噪比法(S:N=10:1)藥品分析方法驗證10/4/2023256、線性與范圍（linearityandrange）待測物濃度與響應(yīng)值成線性關(guān)系的濃度范圍線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關(guān)系數(shù)7、耐用性（robustness）測定條件稍有變動時，對測定結(jié)果的影響程度影響因素：被測溶液的穩(wěn)定性，流動相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等藥品分析方法驗證10/4/202326檢驗項目和驗證內(nèi)容項目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定定量限度準(zhǔn)確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度＋①＋①專屬性②＋＋＋＋檢測限－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗證10/4/202327四、生物樣品分析的基本要求常用樣品的種類、采集和貯藏生物樣品分析前處理技術(shù)定量分析方法的驗證10/4/202328生物樣品分析的基