臨床科研選題與科研設(shè)計(jì)

臨床科研選題與科研設(shè)計(jì)（做科研型醫(yī)生）中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院以幾個(gè)案例作例子來(lái)闡述Idea（新鮮）（創(chuàng)新點(diǎn)）Design[如何(從哪幾方面)來(lái)驗(yàn)證，它們的邏輯關(guān)系]Methods（邏輯，內(nèi)在聯(lián)系）新發(fā)SLE患者（創(chuàng)新點(diǎn)）調(diào)節(jié)性

T細(xì)胞的研究(表面標(biāo)志CD25與轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)、細(xì)胞的抑制作用、其臨床意義）國(guó)外的SLE患者絕大多數(shù)有激素或細(xì)胞毒藥物治療的經(jīng)歷案例一

自身免疫應(yīng)答靶抗原的的“暴露”或形成（隱蔽抗原）微生物感染激活自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞（分子模擬）協(xié)同刺激分子的異位表達(dá)多克隆淋巴細(xì)胞的非特異性活化（超抗原）

免疫調(diào)節(jié)紊亂（包括調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量減少或功能減弱）其它自身免疫病發(fā)病的免疫學(xué)因素CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（其抑制功能需Foxp3轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)）調(diào)節(jié)性T細(xì)胞案例一涉及的3項(xiàng)研究研究新發(fā)SLE患者周?chē)蠧D4+T細(xì)胞的CD25與FoxP3表達(dá)，及Glucocorticosteroid/cyclophosphamide治療對(duì)CD25與FoxP3

在CD4+T細(xì)胞表達(dá)的影響。研究對(duì)象為24例新發(fā)活動(dòng)期SLE患者、20例新發(fā)非活動(dòng)期SLE患者、21例年齡性別相合的正常志愿者。分離周?chē)膯蝹€(gè)核細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4T細(xì)胞CD25與FoxP3的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)FoxP3在新發(fā)SLE患者CD4+CD25+T細(xì)胞的表達(dá)下降，在CD4+CD25-T

細(xì)胞

的表達(dá)增強(qiáng)。還檢測(cè)了Glucocorticosteroid與cyclophosphamide治療對(duì)FoxP3在CD4+CD25+和CD4+CD25-T

細(xì)胞表達(dá)的影響第1項(xiàng)研究：ReductionofFoxp3levelsinCD4+CD25highTcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus.

ClinExpImmunol.2008;153(2):182-7.研究新發(fā)SLE患者周?chē)狢D4+CD25-Foxp3+

T細(xì)胞的臨床意義檢測(cè)10例活動(dòng)期、11例非活動(dòng)期新發(fā)SLE患者、及11例健康志愿者。用流式細(xì)胞儀分析Foxp3與CD25在CD4T細(xì)胞的表達(dá)。分離CD4+CD25+與CD4+CD25-T細(xì)胞，檢測(cè)它們對(duì)T細(xì)胞增殖的影響。G檢測(cè)CD4+CD25-T細(xì)胞與其他臨床指標(biāo)（如抗dsDNA、尿蛋白、血清C3水平、SLEDAI）的相關(guān)性這個(gè)故事并不復(fù)雜，內(nèi)容較簡(jiǎn)單，文內(nèi)僅2張圖與1個(gè)表格。但創(chuàng)新點(diǎn)明顯，文章發(fā)表于AnnRheumDis.2008;67(7):1037-40.Impactfector7.188。第2項(xiàng)研究：ClinicalsignificanceofincreasedCD4+CD25-Foxp3+Tcellsinpatientswithnew-onsetsystemiclupuserythematosus

第3項(xiàng)研究:AreCD4+CD25

Foxp3+cellsinuntreatednew-onsetlupuspatientsregulatoryTcells?ArthritisResTher2009;11(5):R153研究新發(fā)SLE患者周?chē)械腃D4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞與CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞表面表達(dá)的分子及分泌的細(xì)胞因子有何不同，及CD4+CD25-Foxp3+T細(xì)胞有否抑制。檢測(cè)22例新發(fā)SLE患者。用流式細(xì)胞儀分析比較CD4+CD25-Foxp3+細(xì)胞與CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞表面標(biāo)志子表達(dá)及細(xì)胞因子表達(dá)的差異。檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞增殖有否調(diào)節(jié)作用。

新發(fā)SLE患者其它免疫細(xì)胞有什么特點(diǎn)新發(fā)其它自身免疫病免疫細(xì)胞有什么特點(diǎn)新發(fā)其它自身免疫病其它免疫學(xué)指標(biāo)有什么特點(diǎn)從案例一能得到的啟發(fā)案例二新型抗流感藥DAS181的研發(fā)A型流感病毒的生活周期已批準(zhǔn)上市的抗流感藥物

M2離子通道阻滯劑

鹽酸金剛乙胺（1993年美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市）金剛烷胺（1966FDA年批準(zhǔn)為預(yù)防藥，1976年確認(rèn)其為治療藥）

神經(jīng)胺酸酶（NA）抑制劑

達(dá)菲（1999年美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市）扎那米韋（1999年5月首先在澳大利亞獲準(zhǔn)上市）除了毒副作用外，主要的問(wèn)題是流感病毒產(chǎn)生抗藥性，因?yàn)椴《净蛲蛔冄邪l(fā)中的抗流感藥物流感病毒的NA與HA相互作用感染靶細(xì)胞

Neu5Ac(2,3)-Gal與Neu5Ac(2,6)-Gal分子就是流感病毒的受體。人流感病毒主要識(shí)別(2,6)-Gal唾液酸，禽流感病毒與馬流感病毒主要識(shí)別(2,3)-Gal唾液酸。流感病毒的HA與細(xì)胞表面含(2,3)-Gal或/和(2,6)-Gal唾液酸的糖蛋白相結(jié)合。人呼吸道上皮細(xì)胞的唾液酸主要是(2,6)-Gal型，但也有(2,3)-Gal型，所以禽流感病毒也能感染人，盡管感染效率不高。NA的作用是破壞HA的受體。它酶切呼吸道黏膜上諸如mucin等潛在抑制性分子的唾液酸，從而使之滅活，促進(jìn)病毒在呼吸道傳播;酶切病毒感染細(xì)胞表面的唾液酸，促進(jìn)子代病毒釋出，以助于病毒傳播。HA的受體結(jié)合作用和NA的受體破壞作用相互相成，維持平衡，于病毒復(fù)制和傳播十分重要。呼吸道上皮細(xì)胞唾液酸流感病毒HANA以往有報(bào)道，體外實(shí)驗(yàn)中唾液酸酶能有效阻止流感病毒感染細(xì)胞。因此學(xué)者欲研制一種融合蛋白，由唾液酸酶與能錨定于人呼吸道上皮細(xì)胞的蛋白組成。DAS181的分子模式

報(bào)道已從微生物和真核細(xì)胞分離出>15種底物特異性和酶動(dòng)力學(xué)各異的唾液酸酶。從中選擇A.viscosus唾液酸酶的催化功能域。其理由為：底物特異性廣；催化活性最大；人免疫系統(tǒng)對(duì)其耐受，因?yàn)槿苏？谇缓臀改c道細(xì)菌也產(chǎn)生此唾液酸酶。

DAS181抗流感病毒作用的研究（細(xì)胞、小鼠與雪貂模型）DAS181的創(chuàng)新點(diǎn)靶點(diǎn)在宿主細(xì)胞上，能避免產(chǎn)生病毒耐藥廣譜抗流感病毒藥物（A,B型流感、流感病毒耐藥株、副流感病毒）能酶切SA

2,3Gal和SA

2,6Gal，也能酶切SA

2,8Gal。因此，對(duì)現(xiàn)有流感毒株、未來(lái)毒株、及重組變異毒株均有效吸入給藥，生物利用度高藥物作用持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)：至少2天（MDCK),至少7天（HAE)，用于預(yù)防和治療均可案例三：與IgA腎病發(fā)病機(jī)制相關(guān)聚糖（glycan)核酸、蛋白質(zhì)、聚糖和脂是所有細(xì)胞的4種基本大分子核酸鏈基本上由4種核苷酸組成肽鏈基本上由23種氨基酸組成糖鏈?zhǔn)謴?fù)雜脂質(zhì)按生物學(xué)功能可分為三類(lèi)：儲(chǔ)存脂質(zhì)（包括甘油三脂和蠟）結(jié)構(gòu)脂質(zhì)（構(gòu)成生物膜脂雙層的磷脂）活性脂質(zhì)（類(lèi)固醇和萜）案例四：幾個(gè)病案分析及其它XXX等（301醫(yī)院）：不明原因發(fā)熱的病因分布及臨床特征2000年1月至2009年1月在301醫(yī)院內(nèi)科住院且符合不明原因發(fā)熱的患者816例，病因分布，臨床特征，老年患者與非老年患者之間的比較。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：結(jié)石性急性膽管炎的治療1998.1-2008.12急診的急性膽管炎患者426例，隨著介入技術(shù)（急性行經(jīng)皮經(jīng)肝膽道穿刺引流術(shù)）和內(nèi)鏡技術(shù)（急性行經(jīng)內(nèi)鏡逆行胰膽管造影）的進(jìn)展，急性膽管炎患者由急診手術(shù)經(jīng)保守治療或介入治療轉(zhuǎn)為擇期手術(shù)，可以大大減少手術(shù)并發(fā)癥發(fā)生率，降低手術(shù)死亡率。XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤的CT診斷及鑒別診斷對(duì)14例病理確診的胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤患者的CT資料作CT診斷及鑒別診斷(無(wú)功能性胰島細(xì)胞瘤、胰腺囊腺瘤、胰腺癌、胰腺假性囊腫）分析XXX等（北京協(xié)和醫(yī)院）：細(xì)針穿刺技術(shù)在乳腺癌手術(shù)治療中的應(yīng)用價(jià)值2004.1-2009.1北京協(xié)和醫(yī)院初診考慮乳腺癌可能性大的530例女性患者作細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)（FNAC）檢查。FNAC檢查陽(yáng)性325例，直接行乳腺癌根治術(shù)，術(shù)后組織病理學(xué)檢查均為乳腺癌。FNAC檢查陰性205例，開(kāi)放活檢術(shù)，術(shù)后組織病理學(xué)檢查137例乳腺癌，68例非乳腺癌。表明FNAC有助于對(duì)懷疑乳腺癌者選擇適當(dāng)?shù)男g(shù)式。以中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)2011年第1期上的幾篇論文為例病案分析加檢驗(yàn)科檢測(cè)指標(biāo)也能發(fā)SCI文章2009確定“點(diǎn)”，要有新意要有正常對(duì)照和其它對(duì)照（如陽(yáng)性對(duì)照）分析的指標(biāo)不能單一，分析要有層次正確的統(tǒng)計(jì)處理最好能結(jié)合一點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)病案分析中需注意的幾點(diǎn)藥劑科的人員一般做藥代動(dòng)力學(xué)和生物效性等的試驗(yàn)較多對(duì)藥劑師科研工作的建議與臨床大夫密切合作參與新藥研制有效制劑的開(kāi)發(fā)（如協(xié)和醫(yī)院的健腦合劑等）做一點(diǎn)藥物作用機(jī)理的研究科研工作中尚需注意的幾點(diǎn)每一步都要走得踏實(shí)，要核實(shí)試劑和儀器是否OK（以本人做PCR檢測(cè)及研制PSA試劑盒失敗為例說(shuō)明）表位可分成兩類(lèi)：線性表位（linear，指肽鏈上由一段序列相連續(xù)的氨基酸殘基所形成的抗原表位）和構(gòu)象表位（conformation，指多肽或多糖鏈上由空間位置相鄰，而序列上不相連續(xù)的氨基酸殘基或多糖殘基所形成的抗原表位）嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作，做好實(shí)驗(yàn)記錄（包括病案記錄）隨時(shí)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，適時(shí)對(duì)研究目的和技術(shù)路