微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)-(正式)

法國微生物學(xué)家、化學(xué)家，近代微生物學(xué)的奠基人。

在他的一生中，曾對同分異構(gòu)現(xiàn)象、發(fā)酵、細(xì)菌培養(yǎng)和疫苗等研究取得重大成就，從而奠定了工業(yè)微生物學(xué)和醫(yī)學(xué)微生物學(xué)的基礎(chǔ)，并開創(chuàng)了微生物生理學(xué)，被后人譽(yù)為“微生物學(xué)之父”。巴斯德巴斯德在微生物學(xué)上的貢獻(xiàn)有機(jī)物發(fā)酵和腐敗由微生物引起解決葡萄酒和啤酒變酸問題——?jiǎng)?chuàng)立巴氏消毒法主張傳染病是由微生物引起的，并可通過接觸、唾液及糞便傳播1885年，巴斯德第一次治好了被瘋狗咬傷的9歲男孩——奠定了免疫學(xué)基礎(chǔ)著名的巴斯德研究院微生物方法學(xué)和醫(yī)學(xué)微生物學(xué)奠基人

——科赫德國細(xì)菌學(xué)、現(xiàn)代微生物學(xué)奠基人之一。因發(fā)現(xiàn)結(jié)核菌和結(jié)核菌素而獲1905年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。到目前為止，幾十項(xiàng)Nobel生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，化學(xué)獎(jiǎng)都與微生物學(xué)有關(guān)微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物.無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？思考：微生物“吃”什么？一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：⑴碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源微生物生長不可缺少的微量有機(jī)物（如：維生素、氨基酸、堿基等

。）生長因子：a、牛肉膏主要提供碳源、氮源、磷酸鹽和維生素;b、蛋白胨主要提供碳源、氮源和維生素。2.特殊營養(yǎng)：3.pH、氧氣的需求：4.種類：液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基據(jù)物理性質(zhì)分常用于工業(yè)生產(chǎn)用于微生物的分離、鑒定、計(jì)數(shù)加瓊脂半固體培養(yǎng)基加瓊脂用于觀察運(yùn)動(dòng)、鑒定液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長半固體培養(yǎng)基：(是否運(yùn)動(dòng))

無動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基據(jù)化學(xué)成分分選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基據(jù)用途分常用于工業(yè)生產(chǎn)常用于分類、鑒定培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基:例如：

a、加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌

b、加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌

c、不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌

d、不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物在培養(yǎng)基中加入或減少某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基:例如：

在培養(yǎng)基中加入伊紅和美藍(lán)，可以用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌：如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物就與伊紅和美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤。根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成,用以鑒別不同種類的微生物。練習(xí)下列有關(guān)培養(yǎng)基的敘述正確的是（）A.培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)B.培養(yǎng)基只有兩類：固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基C.固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基D.微生物在固體培養(yǎng)基上生長時(shí)，可以形成肉眼可見的單個(gè)細(xì)菌A要從多種細(xì)菌中分離某種細(xì)菌，培養(yǎng)基要用（）A.固體培養(yǎng)基B.液體培養(yǎng)基C.加入青霉素的培養(yǎng)基D.加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基A練習(xí)下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.培養(yǎng)乳酸菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素B.培養(yǎng)霉菌時(shí)需將培養(yǎng)基中的pH調(diào)至堿性C.培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將pH調(diào)至中性或微堿性D.培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)則需要提供無氧的條件B練習(xí)5.配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑（細(xì)菌偏堿，真菌偏酸）（CO2碳源）生產(chǎn)科研耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時(shí)接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考2.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺(tái)單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：培養(yǎng)基用量依配方計(jì)算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個(gè)細(xì)胞,形成單個(gè)菌落。倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個(gè)平板1個(gè)不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對照）平板劃線的操作方法問題討論為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時(shí)，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。6支試管，分別加入