載藥脂肪乳的制備與質(zhì)量評(píng)價(jià)

載藥脂肪乳的制備與質(zhì)量評(píng)價(jià)作者丨李曉峰（CDE）內(nèi)容來(lái)源丨華西藥學(xué)雜志2019.09載藥脂肪乳是近年來(lái)發(fā)展較快的一種新型藥物制劑，主要應(yīng)用于靜脈注射。載藥脂肪乳注射液的研發(fā)是基于營(yíng)養(yǎng)型靜脈注射乳的廣泛應(yīng)用。自靜脈注射脂肪乳于1962年在瑞典成功開(kāi)發(fā)以來(lái)，應(yīng)用于臨床已半個(gè)世紀(jì)，其不含有活性治療性藥物，僅作為安全的能量補(bǔ)給劑［1］。隨著乳劑制備技術(shù)的進(jìn)步和臨床治療的需要，脂肪乳作為一種重要的藥物載體，以其優(yōu)良的性能得到國(guó)內(nèi)外藥物研發(fā)人員的高度重視，應(yīng)用在抗微生物、抗腫瘤及治療心腦血管病等藥物中的應(yīng)用前景廣闊［2］。許多藥物的水溶性較差，難以實(shí)現(xiàn)注射，或必須與有機(jī)溶劑混合才能制成注射劑。而有機(jī)溶劑本身可能具有一定的毒性并且會(huì)干擾藥物的作用，將無(wú)毒脂肪乳劑作為溶劑與某些藥物組合不僅能夠降低發(fā)病率，還能達(dá)到緩控釋的目的［1］。目前，多種載藥脂肪乳劑已先后上市并投入臨床使用，且臨床效果良好（表1）。例如，有研究人員對(duì)無(wú)痛人工流產(chǎn)中丙泊酚中長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液的臨床效果展開(kāi)分析，發(fā)現(xiàn)丙泊酚中長(zhǎng)鏈脂肪乳注射液與對(duì)照組的丙泊酚注射液麻醉劑相比可顯著降低注射疼痛以及下腹疼痛發(fā)生率，達(dá)到良好鎮(zhèn)痛效果［3］。目前，國(guó)外上市的制劑產(chǎn)品包括丁酸氯維地平（Cleviprex）、丙泊酚注射液（Diprivan）國(guó)內(nèi)如廣東嘉博、北京托畢西、西安力邦等一些企業(yè)均已有仿制品上市銷售。然而，載藥脂肪乳劑的產(chǎn)品工藝、設(shè)備要求較高，較多企業(yè)難以生產(chǎn)出與國(guó)外企業(yè)如費(fèi)森尤斯卡比等質(zhì)量一致的產(chǎn)品，其表面多出現(xiàn)漂油、尾部大粒子檢測(cè)不合格等問(wèn)題。為了使研究者對(duì)脂肪乳有較深的了解，現(xiàn)結(jié)合自己經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)檢索總結(jié)分析了其技術(shù)要點(diǎn)。?I脂肪乳注肘甌上市的書(shū);兄labk*1Entcrnuhio*niinjwlioninthemnrrntmarikd商晶乞藥砌笛再生產(chǎn)廠家QievjpNK.4扭堆地平TJw劃祠biihrirG.irii|xxhy急.1t高liltsDIaz^ieiuL-l柱地N洋ArtavinXisidh"煤堪、栩蕭刪電持續(xù)性雅斛DipriTin*Llmcitdal—l.i|KinK]^iiaumVl^kuhuffn全麻誘導(dǎo)制rjiTii-ihAMH-iP?地坐罪松岳酬槪常MilmihidaT<irui!w*Pti-ariiiii俺風(fēng)濕吳廿炎亂比幡疔即Cr**n(Zrt曲術(shù)顯總竊掘的慎病Link*前列jfe斌MLLsibldlijTanabePhiiritj出札腦血普供緒掃、抑制血輪形吐Vitiihpkl*匸求，維目L：.索KF「e■:門i"?Knli-i厲外科祁刊 -￡；■藥硏1制備材料脂肪乳主要由油相、乳化劑、等滲劑和注射用水等通過(guò)乳化作用形成水包油型乳劑。其處方中各組分的性質(zhì)及所占比例很大程度上影響了產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性，因此，對(duì)其進(jìn)行分析研究具有重要意義。1.1油相油相的選擇對(duì)脂肪乳的質(zhì)量有較大影響。作為藥物的載體，油相應(yīng)具有穩(wěn)定的理化性質(zhì)，且所載藥物在油相中需要有較好的溶解度。氟氯為難溶性藥物，為制備其脂肪乳，考察了其在中鏈甘油三酯（MCT）、大豆油、玉米油、棉籽油中的溶解度，結(jié)果顯示：氟氯在MCT中溶解性最好，為后續(xù)處方篩選中油相的選擇提供了參考［4］。油相對(duì)脂肪乳的粒徑大小和穩(wěn)定性可能有影響，研究者選擇MCT、菜籽油、玉米油和亞麻籽油等4種不同的油相，研究姜黃素脂肪乳的粒度和穩(wěn)定性隨油相種類變化的情況。結(jié)果顯示：姜黃素在中鏈甘油三酯中的溶解度幾乎是菜籽油的3倍，是在亞麻籽油和玉米油中的兩倍。而且采用MCT制備的姜黃素脂肪乳穩(wěn)定性較好［5］。油脂初步氧化產(chǎn)物為過(guò)氧化物，其后又進(jìn)一步分解為醛、酮、酸類。其含量可通過(guò)甲氧基苯胺值來(lái)表示，這也是脂肪乳注射液質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一［6］。甲氧基苯胺值過(guò)高可能損害人肝功能。不同的油相制備的脂肪乳在相同條件下其過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值有較大的差距。以大豆油為例，對(duì)國(guó)產(chǎn)不同廠家進(jìn)行篩選，在進(jìn)廠檢驗(yàn)時(shí)各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)明顯差異，但在制備成乳劑后，甲氧基苯胺值這項(xiàng)指標(biāo)則差距較大，有的廠家較小，約為0.05，而有的廠家則較大，超過(guò)了限度要求的2.2。有實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)加熱溫度和加熱時(shí)間與甲氧基苯胺值呈正相關(guān)，且相同加熱溫度及加熱時(shí)間下大豆油中甲氧基苯胺值的增長(zhǎng)速率保持一致，故控制油相中甲氧基苯胺初始值有利于提高產(chǎn)品質(zhì)量［7］。因此，需要仔細(xì)研究篩選油相，常用的油相包括大豆油、紅花油、魚(yú)油、橄欖油和中鏈甘油三酯等。乳化劑乳化劑作為載藥脂肪乳注射液重要成分之一，需要滿足安全性、無(wú)毒性、無(wú)熱源、無(wú)刺激性、無(wú)溶血和過(guò)敏反應(yīng)且生物相容等條件。通常首選天然來(lái)源的表面活性劑，并且盡可能使用較少的量。一般情況下，乳化劑分散溶解于油相中，也有將乳化劑加入水相的報(bào)道。脂肪乳注射液常用的乳化劑有天然乳化劑蛋黃卵磷脂、大豆磷脂和合成非離子乳化劑泊洛沙姆188。其中，應(yīng)用最廣泛的為動(dòng)物來(lái)源的蛋黃卵磷脂，安全無(wú)毒,已被FDA批準(zhǔn)供靜脈注射用。蛋黃卵磷脂的主要成分為磷脂酰膽堿（PC），磷脂酰乙醇胺（PE）和磷脂酰肌醇（PI）等。當(dāng)卵磷脂作為乳化劑時(shí)，PC和PE對(duì)理化性能均有貢獻(xiàn)，且相互間存在協(xié)同作用，卵磷脂的乳化能力不僅取決于PC，還取決于PE的含量和二者之間的比例，其比例的差異和其他組分的差異是不同廠家卵磷脂質(zhì)量差異的根本原因［8~9］。比較了不同廠家卵磷脂標(biāo)準(zhǔn)，匯總見(jiàn)表2［10?15］。結(jié)果顯示：廣州漢方與德國(guó)Lipod標(biāo)準(zhǔn)相同，日本與韓國(guó)的標(biāo)準(zhǔn)相同，而瑞士fresenius-kabi的磷脂酰膽堿及磷脂酰乙醇胺范圍均較其他寬。有文獻(xiàn)通過(guò)評(píng)估熱壓滅菌后脂肪乳劑的穩(wěn)定性來(lái)優(yōu)化乳化劑，以粒度分布為參考標(biāo)準(zhǔn)［16］。結(jié)果表明：以蛋黃卵磷脂E80為乳化劑的乳液，較純化磷脂酰膽堿EPCS或大豆磷脂E200乳化的乳液具有更好的物理穩(wěn)定性。表工不同廠貳或標(biāo)冶中卵磷脂瞬糖酰膽堿IFG圧瑙脂除范團(tuán)的比輕Tuihle2Compsiirtecinof mu肚呼ftFPCandPEwdnptMlhv升miw恤汕障sndKiandandsPC/%FE./%科：+FEZ饒廣州覆育72-855-15中國(guó)N.-X.j.it+f：：稈回Upod72-K55-l(JFH70-￡1I2_O-18.0t|jPlCk>otiaii.C^tpi>tu1ioii70.0-85.012-0-18.Q■ €蜀硏I.1f^4iiu^-luilbiAJJIU.C-20.02.1兩步乳化法高剪切法和高壓均質(zhì)法，其一般也稱為兩步乳化法［19］，指的是在一定溫度及氮?dú)饬鞯谋Ｗo(hù)下將藥物和乳化劑輔料均勻溶解或分散于油相中（水溶性藥物則分散在水相中），然后在適宜溫度下（約70?80°C）將兩相混合，經(jīng)過(guò)高速剪切制得初乳，待迅速冷卻至20C以下后經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)或微射流機(jī)進(jìn)行二次乳化得到終乳，最后經(jīng)過(guò)調(diào)節(jié)pH,濾過(guò)灌封，高壓滅菌即得。在整個(gè)制備過(guò)程中，需要考慮如下幾個(gè)影響因素。油相的熱穩(wěn)定性一般情況下，主藥、乳化劑多分散或溶解于油相中。由于溶解主藥需要一定的溫度和時(shí)間，而部分油相（如大豆油）以及乳化劑（如卵磷脂）中含有較多的亞油酸、亞麻酸、酰胺等含有雙鍵的成分，對(duì)熱敏感，且易氧化，因此，在篩選適宜的油相制備溫度時(shí)，需要綜合考慮各成分對(duì)熱穩(wěn)定性及主藥在油相中的溶解速率因素。值得注意的是，整個(gè)制備過(guò)程需要在氮?dú)獗Ｗo(hù)下進(jìn)行，否則極有可能出現(xiàn)過(guò)氧化值超標(biāo)、乳化劑因氧化導(dǎo)致乳化能力下降造成乳劑不穩(wěn)定等現(xiàn)象。水相的pH考慮到水相的pH可能影響最終產(chǎn)品pH、有關(guān)物質(zhì)（對(duì)堿性敏感的藥物）指標(biāo)，且水相與油相混合制備初乳時(shí)，不同pH會(huì)影響卵磷脂中各磷脂的電離情況，而油酸在堿性條件下也可能會(huì)皂化產(chǎn)生油酸鈉，對(duì)乳化有進(jìn)一步的輔助效果，因此，需對(duì)水相的pH進(jìn)行研究。研究中，可將性狀、乳粒、pH、有關(guān)物質(zhì)等作為評(píng)價(jià)乳劑穩(wěn)定性指標(biāo)。初乳的制備初乳質(zhì)量為脂肪乳產(chǎn)品的關(guān)鍵影響因素，有研究報(bào)道溫度與時(shí)間、高壓均質(zhì)壓力、滅菌條件等因素均會(huì)對(duì)初乳的質(zhì)量產(chǎn)生較大影響，應(yīng)對(duì)其參數(shù)進(jìn)行考察［20適宜的剪切轉(zhuǎn)速和剪切時(shí)間，以獲得性狀良好的初乳。考慮到生產(chǎn)中剪切機(jī)剪切效果會(huì)與小試剪切機(jī)有一定的差別，因而具體剪切參數(shù)會(huì)有較大差異，且已知脂肪乳粒徑大小及分布會(huì)影響乳劑的穩(wěn)定性，初乳的粒徑大小及分布可能會(huì)影響其均質(zhì)前穩(wěn)定性和均質(zhì)時(shí)的效果，因此，需要對(duì)初乳的粒徑進(jìn)行篩選和監(jiān)控，即以粒徑為監(jiān)測(cè)指標(biāo)，篩選出適宜生產(chǎn)放大的剪切參數(shù)。油水兩相溫度差會(huì)影響兩相混合時(shí)的密度差，從而影響兩相分布和乳化效果，因而乳化溫度對(duì)乳劑穩(wěn)定性也有重要影響。綜合以上幾點(diǎn)，初乳制備的過(guò)程中需要考察制備溫度、剪切參數(shù)、pH、粒徑范圍等重要指標(biāo)，尋找合適的條件以保證初乳質(zhì)量，進(jìn)而保證最終產(chǎn)品的質(zhì)量。均質(zhì)參數(shù)均質(zhì)過(guò)程是整個(gè)工藝中決定最終乳劑質(zhì)量的關(guān)鍵步驟。由于脂肪乳屬于亞微乳，是熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，所以，會(huì)表現(xiàn)出各種不穩(wěn)定的現(xiàn)象如聚集、絮凝、合并、轉(zhuǎn)相等。乳劑穩(wěn)定性與乳滴大小密切相關(guān)，乳滴越小乳劑就越穩(wěn)定，乳劑中乳滴大小是不均勻的，小乳滴通常填充于大乳滴之間，使乳滴的聚集性增加，容易引起乳滴的合并，降低穩(wěn)定性。因此，乳滴大小（粒徑）和乳滴均一性（多分散系數(shù)）是控制乳劑穩(wěn)定性的重要指標(biāo)。為了保證乳劑的穩(wěn)定性，制備乳劑時(shí)應(yīng)盡可能地保持乳滴的均一性，及適當(dāng)較小的粒徑和良好的粒徑分布。而均質(zhì)過(guò)程是影響乳滴粒度大小的重要步驟，只有適宜的均質(zhì)參數(shù)才能保證產(chǎn)品的良好穩(wěn)定性。高壓均質(zhì)過(guò)程中影響樣品粒徑及穩(wěn)定性的主要因素包括：均質(zhì)壓力和均質(zhì)次數(shù)，因此，需要對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)考察。在制備地塞米松棕櫚酸酯脂肪乳注射液的過(guò)程發(fā)現(xiàn)：乳劑的粒徑隨著均質(zhì)次數(shù)和壓力的增加逐漸減小，通過(guò)調(diào)整均質(zhì)次數(shù)及壓力最終得到合適的制備參數(shù)［21］。2.1.5滅菌條件滅菌是對(duì)脂肪乳制劑的質(zhì)量的終端保證，根據(jù)按國(guó)家對(duì)注射劑無(wú)菌工藝保證與驗(yàn)證的要求，滅菌要求FO大于等于8,最好大于12,故應(yīng)針對(duì)產(chǎn)品考察不同滅菌條件（如121°CX12min、121°CX8min、115°CX30min等）。由于脂肪乳為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，最好選用旋轉(zhuǎn)式滅菌鍋進(jìn)行滅菌。2.2干乳制備法為了解決脂肪乳注射液在貯存、放置或運(yùn)輸過(guò)程中的物理不穩(wěn)定性，如分層、破裂問(wèn)題，早在20世紀(jì)60年代就研究報(bào)道了干乳劑的制備方法，主要有冷凍干燥法、噴霧干燥法、減壓蒸餾法、吸干法等。最早使用的方法為噴霧干燥法，該方法適用于化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的藥物的大工業(yè)化生產(chǎn)［22］。隨后發(fā)展起來(lái)的冷凍干燥法常應(yīng)用于注射劑型的制備。干乳的制備往往需要加入保護(hù)劑，而保護(hù)劑的用量與種類對(duì)生成的干乳劑質(zhì)量有較大的影響。常用的保護(hù)劑可分為結(jié)晶型和非結(jié)晶型。結(jié)晶型保護(hù)劑有甘露醇、蔗糖、乳糖等［23］。由于結(jié)晶型保護(hù)劑在失水的情況下迅速結(jié)晶，乳劑的分散相會(huì)按照保護(hù)劑的形狀而排列。非結(jié)晶型保護(hù)劑有海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯膠等，由于該種保護(hù)劑失水后不能保持自己的結(jié)構(gòu)，獲得的干乳為起泡的黏稠性物質(zhì)，所以，一般不宜單獨(dú)作為凍干乳的保護(hù)劑使用［24］。因此，在凍干時(shí)需要多方面考慮，選擇合適的保護(hù)劑。2.3乳化增溶技術(shù)（SolEmuls）SolEmuls技術(shù)為一種在不使用任何溶劑的情況下將藥物定位于乳劑界面區(qū)域的新方法［25］。通過(guò)將藥物粉末與乳液混合，并進(jìn)行高壓均質(zhì)化過(guò)程，在均質(zhì)化間隙中利用高流速實(shí)現(xiàn)“超音速”攪拌，加速藥物晶體和分子快速溶解到卵磷脂層中，達(dá)到提高難溶性藥物溶解度的目的，基本過(guò)程見(jiàn)圖1。SolEmuls是難溶性藥物制備脂肪乳的一般方法，制備方法主要包括兩種。方法一是將藥物加入預(yù)先形成的乳液中，例如腸胃外乳劑Lipofundin或Intralipid。然后將混合物均化直至藥物晶體溶解。方法二是先通過(guò)將油分散在表面活性劑溶液中來(lái)制備初乳液然后將藥物加入到該初乳液的水相中，隨后進(jìn)行均質(zhì)化過(guò)程［26］。兩種方法的結(jié)果是相同的，即藥物位于界面卵磷脂層中的超細(xì)乳液。藥物可以以超細(xì)粉末的形式（如噴射研磨的微粉化藥物）加入，或者可以作為藥物納米晶體（如高壓均質(zhì)產(chǎn)生的水性納米混懸液）加入，其中，后者的方式可加速藥物溶解并分配到界面層的過(guò)程。

drugmoleculeliomogcnirtalion山ii妙I(lǐng)wiUihi"hybriddispffh'gjriit'sij|iiii(rnelassitdlwav圖1藥物通過(guò)有機(jī)溶劑的常規(guī)方法（右）和通過(guò)在高壓均質(zhì)條件下加快藥物晶體溶解的SolEmuls技術(shù)（左）在使用乳化增溶技術(shù)時(shí)也需要考慮到均質(zhì)參數(shù)、滅菌工藝對(duì)產(chǎn)品的影響［27］。高壓均質(zhì)過(guò)程會(huì)影響到乳劑的粒徑，一般情況下，乳滴粒徑越小乳劑越穩(wěn)定。而粒徑主要取決于均質(zhì)機(jī)的功率和均質(zhì)次數(shù)。文獻(xiàn)研究了均質(zhì)循環(huán)次數(shù)對(duì)粒徑的影響，如圖2所示，結(jié)果顯示：6個(gè)均質(zhì)化循環(huán)后，即可獲得較理想的顆粒尺寸和粒徑分布的脂肪乳［28］。采用均質(zhì)化循環(huán)可改善脂肪乳粒徑的同質(zhì)性，以避免注射引起毛細(xì)血管的阻塞。Pi^urc2EtTiN：!^Pi^urc2EtTiN：!^和「cydesnflii^hpn^HurchomogciLizutlion.onpuirticlesizc(A)jndliliJiLriliiitiorii(li>joftJicEFnulsinH圖2扇壓均戰(zhàn)楠玨友做對(duì)爭(zhēng)準(zhǔn)匿1.1丨和粒度廿布IHJ的影響3質(zhì)量控制載藥脂肪乳不同于普通注射劑，其處方中各成分并非簡(jiǎn)單地接觸、混合，而是在一定機(jī)械力的作用下形成一定大小的乳粒，且其組分較多，故生產(chǎn)中對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制時(shí)，控制指標(biāo)和關(guān)鍵步驟相對(duì)較多，例如水相的pH,油相的性狀、主藥含量等（表3）。關(guān)于脂肪乳的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在2015年版《中國(guó)藥典》第一增補(bǔ)本中有收錄丙泊酚乳狀注射液以及脂肪乳注射液C14-24的具體標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)游離脂肪酸、過(guò)氧化值、甲氧基苯胺值、溶血磷脂酰膽堿和溶血磷脂酰乙醇胺、甘油、磷等均規(guī)定了限度要求［29］。而對(duì)于最終產(chǎn)品