實(shí)驗(yàn)3+簡(jiǎn)單染色法

實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡(jiǎn)單染色法。初步認(rèn)識(shí)細(xì)菌的形態(tài)特征。熟悉無(wú)菌操作技術(shù)，學(xué)習(xí)顯微鏡（油鏡）的使用方法。簡(jiǎn)單染色：利用單一染料對(duì)菌體進(jìn)行染色。染料是一類苯環(huán)上帶有發(fā)色基團(tuán)和助色基團(tuán)的有機(jī)化合物。前者賦予染料顏色特征，后者使染料能形成鹽。簡(jiǎn)單染色常用的微生物細(xì)胞染料都是鹽，分酸性染料和堿性染料兩大類：美蘭、甲基紫、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠和蕃紅等都屬于堿性染料；伊紅、剛果紅、藻紅、苦味酸和酸性復(fù)紅等屬于酸性染料。常用染料細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，pH值大約在2~5之間，所以在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶正電荷。因此，帶負(fù)電荷的細(xì)菌常和帶正電荷的堿性染料進(jìn)行結(jié)合。所以，在細(xì)菌學(xué)上常用堿性染料進(jìn)行染色。細(xì)胞處于酸性條件下（如細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸），所帶正電荷增加，可采用酸性染料染色。微生物染色原理材料菌種金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌蠟樣芽孢桿菌染色劑結(jié)晶紫番紅

儀器或其他用具：顯微鏡酒精燈載玻片接種環(huán)香柏油二甲苯擦鏡紙生理鹽水等。涂片干燥固定染色水洗鏡檢簡(jiǎn)單染色方法干燥作業(yè)實(shí)驗(yàn)報(bào)告（結(jié)果部分：繪圖說(shuō)明金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的形態(tài)特征，注明觀察時(shí)使用的物鏡及放大倍數(shù)，排列方式等，）下一個(gè)實(shí)驗(yàn)：革蘭氏染色法1、涂片取一塊干凈的載玻片，平放，在載玻片中央滴一小滴生理鹽水；用接種環(huán)無(wú)菌操作從瓊脂斜面上挑取適量菌苔；將挑取的菌苔沾入生理鹽水中混勻并涂成薄膜。注意：載玻片要潔凈無(wú)油跡；滴生理鹽水和取菌不宜過(guò)多；涂片要涂抹均勻，不宜過(guò)厚。2、干燥將涂好菌膜的載玻片平放在室溫下自然干燥。也可用電吹風(fēng)低溫吹干。3、固定將已干燥的涂有菌膜的載玻片，涂面朝上，在酒精燈火焰上通過(guò)2~3次。原理：加熱使細(xì)菌細(xì)胞的蛋白質(zhì)凝固，從而固定細(xì)菌細(xì)胞形態(tài)，并使之牢固附著在載玻片上。注意：熱固定溫度不宜過(guò)高，否則會(huì)改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)。4、染色將熱固定的細(xì)菌涂片平放在載玻片架上，滴加染液于涂片上（染液剛好覆蓋涂片薄膜為宜）。染色時(shí)間：呂氏堿性美藍(lán)染色1~2min；石炭酸復(fù)紅染色約1min草酸銨結(jié)晶紫染色約1min。5、水洗將細(xì)菌涂片上染液倒入廢液缸中；手持細(xì)菌染色涂片，置于廢液缸上方，用洗瓶中自來(lái)水沖洗涂片，直至流下的水無(wú)色為止。注意：水洗時(shí)，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下。水流不宜過(guò)急，過(guò)大，以免涂片薄膜脫落。6、干燥自然干燥：平放于室溫，自然干燥；吹干：用電吹風(fēng)冷風(fēng)或低溫?zé)犸L(fēng)吹干；吸干：平放在一張吸水紙上，上面覆蓋一張吸水紙，將細(xì)菌涂片兩面水分吸干。7、鏡檢涂片干后鏡檢。防止水的折射，以便于觀察。顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)（P41）1.物鏡轉(zhuǎn)換器2.物鏡3.標(biāo)本夾4.載物臺(tái)5.聚光器6.彩虹光圈7.光源8.鏡座9.電源開(kāi)關(guān)10.光源滑動(dòng)變阻器11.粗調(diào)螺旋（粗調(diào)節(jié)器）12.微調(diào)螺旋（細(xì)調(diào)節(jié)器）13.鏡臂14.鏡筒15.目鏡16.玻片夾推進(jìn)器顯微鏡使用操作步驟1、觀察前的準(zhǔn)備2、顯微鏡觀察3、顯微鏡使用完畢后的處理1、觀察前的準(zhǔn)備仔細(xì)閱讀顯微鏡使用說(shuō)明書(shū)取鏡（一手握鏡臂，一手托底座）顯微鏡的放置（平放，距邊緣約10cm）熟悉顯微鏡，檢查顯微鏡調(diào)節(jié)光源（光線均勻，亮