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文檔簡介

ITCIntroduce

(IsothermalTitrationCalorimetry)IsothermalTitrationCalorimetry等溫滴定量熱ITC:測(cè)定分子相互作用的方法在一次實(shí)驗(yàn)中,ITC可以測(cè)定:結(jié)合的親和力常數(shù)(K);結(jié)合反應(yīng)中的焓變和熵變(ΔH、ΔS);結(jié)合位點(diǎn)數(shù)(n)實(shí)驗(yàn)也可以測(cè)定有多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的樣品

等溫滴定量熱儀(ITC)

神奇的微量熱控制—功率補(bǔ)償IsothermalTitrationCalorimetry

實(shí)驗(yàn)流程1)樣品池中加入待測(cè)大分子;2)參照池中加入緩沖液;3)將待測(cè)配體吸入注射器中;4)注射器置于樣品池中;5)調(diào)整溫度、攪拌速度和每次注射體積。

典型的ITC數(shù)據(jù)上半部分表示每次注射采集的數(shù)據(jù);下半部分表示每次注射的釋放的熱量;(上圖中每個(gè)峰的面積積分)對(duì)滴定抗原與樣品池中抗體的摩爾比作圖

ITC理論基礎(chǔ)?G=-RTlnKB?G=?H–T?S

令人郁悶的公式說明了什么?

1.相同的KD有著相同的?G;

2.相同的?G卻有著不同的?H與?S組合。

引發(fā)焓變和熵變的主要因素Enthalpy(-?H)焓變

Hydrogenbonds

氫鍵

Ionicinteractions

離子作用

特異性結(jié)合Entropy(+?S)熵變

Hydrophobicinteractions

疏水作用

Conformationalfreedom

構(gòu)象自由度非特異性結(jié)合

ITC技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域分子相互作用:溶液中的幾乎所有天然狀態(tài)分子:包括蛋白質(zhì)、核酸、多肽、藥物分子、脂類、金屬離子、小分子等等;工藝過程的開

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