飲料中總酸含量的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

飲料中總酸含量的檢測(cè)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?） 掌握果汁飲料中總酸度的測(cè)定方法。（2） 掌握酸堿滴定法測(cè)定總酸度的原理及操作要點(diǎn)。二、 原理總酸度是食品中所有酸性物質(zhì)的總量，包括已離解的酸和未離解的酸，常采用酸堿滴定法進(jìn)行測(cè)定，即用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行滴定，以酚酞為指示劑來(lái)判斷終點(diǎn)，并以樣品中主要代表酸的百分含量表示。食品中的酒石酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、草酸、乙酸等有機(jī)弱酸，可以用強(qiáng)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定，被中和生成鹽類，用酚酞作指示劑，當(dāng)?shù)味ㄖ两K點(diǎn)（pH=8.2,溶液呈淺紅色，30s不退色）時(shí)，根據(jù)所消耗的標(biāo)準(zhǔn)堿溶液濃度和體積，可計(jì)算出樣品中總酸含量。三、 儀器與試劑：50ml堿式滴定管、250ml錐形瓶、燒杯、水浴鍋、100ml量筒、玻璃棒、電爐。（1） 0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取氫氧化鈉4g，用無(wú)水二氧化碳的水稀釋至1000mL，搖勻。（2） 酚酞乙醇溶液（1%）；稱取酚酞1g溶解于100mL95%乙醇中。NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)定：精密稱取0.6g（準(zhǔn)確至0.0001g）在105?110oC干燥至恒重的基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀，加50mL新煮沸過(guò)的冷蒸餾水，攪拌使其溶解，加二滴酚酞指示劑，用配制的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈微紅色且30s不退色。同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)。用下式計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的濃度。mX1000c= （結(jié)果接近于0.1）（V1—V2）X204.2式中：c——標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液的濃度，mol/L； m——基準(zhǔn)鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，g；V1——標(biāo)定時(shí)所耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V2——空白試驗(yàn)中所耗NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；204.2——鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量，g/mol。四、 實(shí)驗(yàn)步驟1、 樣品的制備含CO2的飲料、酒類：取200g樣品于500mL燒杯中，置于電爐上，邊攪拌邊加熱至微沸騰，保持2min，稱量，用煮沸過(guò)的水補(bǔ)充至煮沸前的質(zhì)量，置于密閉玻璃容器內(nèi)，備用。12②不含CO2的飲料混勻樣品：直接取樣，必要時(shí)加適量的水稀釋（若樣品渾濁，則須過(guò)濾）。③固體樣品：稱取5?10g樣品于研缽中，加少量無(wú)CO2。蒸餾水，研磨成糊狀，用無(wú)CO2蒸餾水移入250mL容量瓶中，充分搖勻，過(guò)濾。2、 試樣的制備（液體試樣）總酸含量小于或等于4g/kg的液體試樣直接測(cè)定;大于4g/kg的液體試樣取10?50g精確至0.001g,置于100ml燒杯中。用80°C熱蒸餾水將燒杯中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到250mL容量瓶中（總體積約150ml）。置于沸水浴中煮沸30min（搖動(dòng)2?3次，使固體中的有機(jī)酸全部溶解于溶液中），取出，冷卻至室溫（約20C）,用快速濾紙過(guò)濾。收集濾液備測(cè)。3、 總酸度的測(cè)定準(zhǔn)確吸取上述已制備好的濾液10mL于250mL錐形瓶中，加30mL水，加3?4滴酚酞指示劑，用0.lmo1/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至微紅色，30s不褪色。記錄消耗0.1mol/LNaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（mL）。同一被測(cè)樣品須測(cè)定兩次。同時(shí)作空白試驗(yàn)（用水代替試液）操作。五、 結(jié)果計(jì)算總酸以每公斤（或每斤）樣品中酸的克數(shù)表示，按式（1）計(jì)算：c（V1-V2）XKXFX= X1000（水溶C100:22-25g/Lm式中：X--每升樣品中酸的克數(shù)，g/L;c--氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度,mol/L;V1--滴定試液時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,mL;V2--空白試驗(yàn)時(shí)消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,mL;F--試液的稀釋倍數(shù)； m--試樣的取樣量,g或mL; K--酸的換算系數(shù)。各種酸的換算系數(shù)分別為:蘋(píng)果酸0.067;乙酸0.060;酒石酸0.075;檸檬酸0.070;乳酸0.090;鹽酸0.036;磷酸0.049。計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后第二位。如兩次測(cè)定結(jié)果差在允許范圍內(nèi)（同一樣品的兩次測(cè)定值之差，不得超過(guò)兩次測(cè)定平均值的2%），則取兩次測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值報(bào)告結(jié)果。六、 注意事項(xiàng)若濾液有顏色（如帶色果汁等），使終點(diǎn)顏色變化不明顯，會(huì)影響滴定終點(diǎn)的判斷。測(cè)定前，可加入約同體積的無(wú)C02蒸餾水稀釋，或用活性炭進(jìn)行脫色處理，用原樣液對(duì)照，以及用外指示劑法等方法來(lái)減少干擾。脫色處理方法：取25mL樣液，置于100mL容量瓶中，加水至刻度混合均勻。取出約50?60mL，加入活性炭1?2g脫色，放水浴上加熱至50?60°C微溫過(guò)濾，即可脫色。對(duì)于顏色過(guò)深或渾濁的樣液，則改用電位滴定法進(jìn)行測(cè)定。該實(shí)驗(yàn)中的水全部為無(wú)CO2蒸餾水，方法是在使用前將蒸餾水煮沸15min迅速冷卻備用。樣品中的CO2對(duì)滴定也有影響，在實(shí)驗(yàn)前也要去除。浸漬、稀釋用水量應(yīng)據(jù)樣品中總酸量而定，一般要求滴定時(shí)消耗0.1mol/LNaOH不得少于5mL，最好在10~15mL。食品中含有多種有機(jī)酸，柑橘類果實(shí)及其制品和飲料以檸檬酸表示；葡萄及其制品以酒石酸表示；蘋(píng)果、核果類果實(shí)及其制品和蔬菜以蘋(píng)果酸表示；乳品、肉類、水產(chǎn)品及其制品以乳酸表示；酒類、調(diào)味品以乙酸表示。食品中有機(jī)酸均為弱酸，用強(qiáng)堿（NaOH）滴定時(shí)，其滴定終點(diǎn)偏堿，一般在pH8.2左右，所以可選用酚酞作為指示劑。七、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果總酸度的測(cè)定滴定時(shí)取樣液體積V滴定樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液體積V1空白試驗(yàn)消耗標(biāo)準(zhǔn)NaOH溶液體積V2第一次10.008.300.02第二次10.008.520.02第三次10.008.420.02平均值10.008.410.02還原糖含量的測(cè)定（直接滴定法）一、 實(shí)驗(yàn)原理還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，如乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖樣品經(jīng)除去蛋白質(zhì)后，在加熱條件下，以次甲基藍(lán)作為指示劑，用樣液直接滴定標(biāo)定過(guò)的堿性酒石酸銅溶液，達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，稍過(guò)量的還原糖把藍(lán)色的次甲基藍(lán)指示劑還原為無(wú)色，而顯出氧化亞銅的鮮紅色。根據(jù)樣品液消耗體積，計(jì)算出樣品中還原糖的含量。但實(shí)際上此反應(yīng)為非定量反應(yīng)，即不能根據(jù)反應(yīng)式直接計(jì)算出還原糖含量。因此在測(cè)定過(guò)程中要嚴(yán)格遵守所規(guī)定的操作條件，如熱源強(qiáng)度電爐功率）、錐形瓶規(guī)格、加熱時(shí)間、滴定速度等。二、 試劑及玻皿燒杯、容量瓶、移液管、量筒、250mL錐形瓶、電爐、恒溫水浴鍋、干燥箱、堿式滴定裝置、玻璃珠、濾紙、漏斗、分析天平。（1） 費(fèi)林甲液：稱取15g硫酸銅（CuS04?5H20），及0.05g次甲基藍(lán)，溶于水中并稀釋至1L。（2） 費(fèi)林乙液：稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉，溶于水中，再加入4g亞鐵氰化鉀，完全溶解后，用水稀釋至1000ml，貯存于橡膠塞玻璃瓶?jī)?nèi)。（3） 乙酸鋅溶液：稱取21.9g乙酸鋅，^口3ml冰乙酸，加水溶解并稀釋至100ml。（4） 亞鐵氰化鉀溶液。稱取10.6g亞鐵氰化鉀，用水溶解并稀釋至100ml。（5） 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液:精密稱取1.000g經(jīng)過(guò)80°C干燥至恒量的葡萄糖，加水溶解后加入5ml鹽酸（防止微生物生長(zhǎng)），并以水稀釋至1L。此溶液相當(dāng)于1mg/ml葡萄糖。三、 操作方法樣品處理：（1） 乳類、乳制品及含蛋白質(zhì)的食品：稱取約0.5?2g固體樣品（吸取2?10ml液體樣品），置于100ml容量瓶中，加50ml水，搖勻。邊搖邊慢慢加入5ml乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氫化鉀溶液，加水至刻度，混勻。靜置30min，用干燥濾紙過(guò)濾，棄去15?20mL初濾液，濾液備用。（注意：乙酸鋅可去除蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹(shù)脂等，使它們形成沉淀，經(jīng)過(guò)濾除去。如果鈣離子過(guò)多時(shí)，易與葡萄糖、果糖生成絡(luò)合物，使滴定速度緩慢；從而結(jié)果偏低，可向樣品中加入草酸粉，與鈣結(jié)合，形成沉淀并過(guò)濾。）（2） 酒精性飲料：吸取50ml樣品，置于蒸發(fā)皿中，用1mol/L氫氧化鈉溶液中和至中性，在水浴上蒸發(fā)至原體積1/4后，移入100ml容量瓶中。加25ml水，混勻。以下按（1）自〃加5ml乙酸鋅溶液〃起依法操作。（3） 含多量淀粉的食品：稱取2?5g樣品，置于100ml容量瓶中，加50ml水，在45C水浴中加熱1h，中間不時(shí)攪拌（此步驟是使還原糖溶于水中，切忌溫度過(guò)高，因?yàn)榈矸墼诟邷貤l件下可糊化、水解，影響檢測(cè)結(jié)果）。取出，冷后加水至刻度，混勻，靜置。吸取50ml上清液于另一100ml容量瓶中，以下按（1）自估口］乙酸鋅溶液〃起依法操作。（4） 汽水等含有二氧化碳的飲料：吸取50ml樣品置于蒸發(fā)皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100ml容量瓶中，并用水洗滌蒸發(fā)皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻后，備用。（注意：樣品中稀釋的還原糖最終濃度應(yīng)接近于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度。）標(biāo)定費(fèi)林氏液溶液：吸取5.0ml費(fèi)林氏甲液及5.0ml乙液，置于150ml錐形瓶中（注意：甲液與乙液混合可生成氧化亞銅沉淀，應(yīng)將甲液加入乙液，使開(kāi)始生成的氧化亞銅沉淀重溶），加水10ml，加入玻璃珠2粒，從滴定管滴加約9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以每?jī)擅?滴的速度繼續(xù)滴加葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，直至溶液蘭色剛好褪去并出現(xiàn)淡黃色為終點(diǎn)，記錄消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液總體積，平行操作三份，取其平均值，計(jì)算每10ml（甲、乙液各5ml）堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量（mg）。（注意：還原的次甲基藍(lán)易被空氣中的氧氧化，恢復(fù)成原來(lái)的藍(lán)色，所以滴定過(guò)程中必須保持溶液成沸騰狀態(tài)，并且避免滴定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。）F=CXV（10-13之間）式中：F——10mL堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于葡萄糖的質(zhì)量,mg；C——葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/mL；V——標(biāo)定時(shí)消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的總體積，mL。樣品溶液預(yù)測(cè):吸取5.0ml費(fèi)林氏甲液及5.0ml乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml,加入玻璃珠2粒，控制在2min內(nèi)加熱至沸，趁沸以先快后慢的速度，從滴定管中滴加樣品溶液，并保持溶液沸騰狀態(tài)，待溶液顏色變淺時(shí)，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液藍(lán)色褪去，出現(xiàn)亮黃色為終點(diǎn)，記錄消耗樣液的總體積。（注意：如果滴定液的顏色變淺后復(fù)又變深，說(shuō)明滴定過(guò)量，需重新滴定。）樣品溶液精確測(cè)定：吸取5.0ml費(fèi)林氏甲液及5.0ml乙液，置于150ml錐形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，在2min內(nèi)加熱至沸，快速?gòu)牡味ü苤械渭颖阮A(yù)測(cè)體積少1ml的樣品溶液，然后趁沸繼續(xù)以每?jī)擅?滴的速度滴定直至終點(diǎn)。記錄消耗樣液的總體積，同法平行操作兩至三份，得出平均消耗體積。五、 計(jì)算X=（CXv1Xv）X100/（mXv2）X1000 （奶粉：19-23之間）式中：X--樣品中還原糖的含量（以葡萄糖計(jì)），%； C--葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mg/ml；V--樣品定容體積，ml； m--樣品質(zhì)量，g；v1--滴定10ml費(fèi)林氏溶液（甲、乙液各5ml）消耗葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；v2--測(cè)定時(shí)平均消耗樣品溶液的體積，ml；六、 注意事項(xiàng)堿性酒石酸銅的氧化能力較強(qiáng)，醛糖和酮糖都可被氧化，所以測(cè)得的是總還原糖量。本法是根據(jù)一定量的堿性酒石酸銅溶液（Cu2+量一定）消耗的樣液量來(lái)計(jì)算樣液中還原糖含量，反應(yīng)體系中Cu2+的含量是定量的基礎(chǔ)，因此在樣品處理時(shí)，不能用銅鹽作為澄清劑，以免樣液中引入Cu2+，得到錯(cuò)誤的結(jié)果。次甲基藍(lán)也是一種氧化劑，但在測(cè)定條件下氧化能力比Cu2+弱，故還原糖先與Cu2+反應(yīng)，Cu2+完全反應(yīng)后，稍過(guò)量的還原糖才與次甲基藍(lán)指示劑反應(yīng)，使之由藍(lán)色變?yōu)闊o(wú)色，指示到達(dá)終點(diǎn)。為消除氧化亞銅沉淀對(duì)滴定終點(diǎn)觀察的干擾，在堿性酒石酸銅乙液中加入少量亞鐵氰化鉀，使之與Cu2O生成可溶性的無(wú)色絡(luò)合物，而不再析出紅色沉淀。堿性酒石酸銅甲液和乙液應(yīng)分別貯存，用時(shí)才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡(luò)合物長(zhǎng)期在堿性條件下會(huì)慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。滴定必須在沸騰條件下進(jìn)行，其原因一是可以加快還原糖與Cu2+的反應(yīng)速度；二是次甲基藍(lán)變色反應(yīng)是可逆的，無(wú)色的還原型次甲基藍(lán)與空氣中氧接觸時(shí)又會(huì)被氧化為藍(lán)色的氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中氧所氧化。保持反應(yīng)液沸騰可防止空氣進(jìn)入，避免次甲基藍(lán)和氧化亞銅被氧化而增加耗糖量。滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來(lái)滴定，以防止空氣進(jìn)入反應(yīng)溶液中。樣品溶液預(yù)測(cè)的目的；一是通過(guò)預(yù)測(cè)可了解樣品溶液濃度是否合適（1mg/mL左右），樣液的濃度應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖液的濃度相近，使預(yù)測(cè)時(shí)消耗樣液量在10mL左右；二是通過(guò)預(yù)測(cè)可知道樣液大概消耗量，以便在正式測(cè)定時(shí)，預(yù)先加入比實(shí)際用量少1mL左右的樣液，只留下1mL左右樣液在續(xù)滴定時(shí)加入，保證在1min內(nèi)完成滴定工作，提高準(zhǔn)確度。影響測(cè)定結(jié)果的主要操作因素是反應(yīng)液堿度、熱源強(qiáng)度、煮沸時(shí)間和滴定速度。反應(yīng)液的堿度直接影響二價(jià)銅與還原糖反應(yīng)的速度、反應(yīng)進(jìn)行的程度及測(cè)定結(jié)果。因此，必須嚴(yán)格控制反應(yīng)液的體積，標(biāo)定和測(cè)定時(shí)消耗的體積應(yīng)接近，使反應(yīng)體系堿度一致。熱源一般采用800w電爐，熱源強(qiáng)度應(yīng)控制在使反應(yīng)液在2min內(nèi)沸騰，且應(yīng)保持一致。沸騰時(shí)間和滴定速度對(duì)結(jié)果影響也較大，一般沸騰時(shí)間短，消耗糖液多；滴定速度過(guò)快，消耗糖量多。因此，測(cè)定時(shí)應(yīng)嚴(yán)格控制上述實(shí)驗(yàn)條件，應(yīng)力求一致。平行試驗(yàn)樣液消耗量相差不應(yīng)超過(guò)0.1mL。10.本方法測(cè)定的是一類具有還原性質(zhì)的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖等，只是結(jié)果用葡萄糖或其他轉(zhuǎn)化糖的方式表示，所以不能誤解為還原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知樣品中只含有某一種糖，如乳制品中的乳糖，則可以認(rèn)為還原糖=某糖。11.分別用葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液分別滴定等量已標(biāo)定的費(fèi)林氏液，所消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積有所不同。證明即便同是還原糖，在物化性質(zhì)上仍有所差別，所以還原糖的結(jié)果只是反映樣品整體情況，并不完全等于各還原糖含量之和。如果已知樣品只含有某種還原糖，則應(yīng)以該還原糖做標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果為該還原糖的含量。如果樣品中還原糖的成分未知，或?yàn)槎喾N還原糖的混合物，則以某種還原糖做標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)果以該還原糖計(jì)，但不代表該糖的真實(shí)含量?；鹜饶c中亞硝酸鹽的測(cè)定(鹽酸萘乙二胺分光光度法)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康拿鞔_亞硝酸鹽在食品中的作用以及限量標(biāo)準(zhǔn)。掌握鹽酸荼乙二胺法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的原理、操作步驟、注意事項(xiàng)二、 實(shí)驗(yàn)原理火腿腸在加工過(guò)程中會(huì)加入一定量的亞硝酸鹽進(jìn)行防腐。樣品經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)，除去脂肪后，在弱酸條件下硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸重氮化后，再與N-1-荼基乙二胺(鹽酸荼乙二胺)偶合形成紫紅色的染料，在538nm處有最大吸收波長(zhǎng)，通過(guò)測(cè)定其吸光度并與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較定量。三、 儀器722分光光度計(jì)若干(提前20min打開(kāi)預(yù)熱)、組織絞碎機(jī)，菜刀，砧板、燒杯、電爐、容量瓶、恒溫水浴鍋、25mL具塞比色管、滴管，漏斗，濾紙，吸小球，玻璃棒，溫度計(jì)，標(biāo)記筆，標(biāo)簽紙。四、 試劑亞鐵氤化鉀溶液：稱取106.0g亞鐵氤化鉀［K4Fe6(CN)?3H2O］，用水溶解后，稀釋至1000mL。乙酸鋅溶液：稱取22.0g乙酸鋅［Zn(CH3C00)2?2H20］，加3mL冰乙酸溶于水，并稀釋至100mL。飽和硼砂溶液：稱取5.0g硼酸鈉(Na2B07?10H20)，溶于100mL熱水中，冷卻后備用。對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/L):稱取0.4g對(duì)氨基苯磺酸，溶于100mL20%的鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。鹽酸荼乙二胺溶液(2g/L)：稱取0.2克鹽酸荼乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。有致癌作用。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(200gg/L):精密稱取0.1000g于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀釋至刻度。此溶液每ml相當(dāng)于200Pg亞硝酸鈉。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(5pg/mL):臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于5微克亞硝酸鈉。五、 實(shí)驗(yàn)步驟樣品的處理：取樣：取適量的火腿腸，放入攪碎機(jī)內(nèi)攪碎。準(zhǔn)確稱取5.0克經(jīng)絞碎、混勻的樣品，置于50毫升燒杯中。沉淀蛋白質(zhì)：加12.5mL硼砂飽和溶液，攪拌均勻，以70°C左右的水約300mL將樣品洗入500mL容量瓶中，置沸水浴中加熱15min，取出后冷卻至室溫。一面轉(zhuǎn)動(dòng)一面加入5毫升亞鐵氤化鉀溶液，搖勻，再加入5mL乙酸鋅溶液，以沉淀蛋白質(zhì)。加水定容，放置0.5h，