中藥指紋圖譜

中藥指紋圖譜

第一章中藥指紋圖譜技術(shù)與中藥質(zhì)量控制

1.1指紋圖譜的起源與發(fā)展

現(xiàn)代指紋鑒定始于19世紀(jì)末20世紀(jì)初的范罪學(xué)和法醫(yī)學(xué)。每個人的指紋在微小的細節(jié)構(gòu)造上各有不同，可以據(jù)以鑒別每個人的特征。指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于植物藥質(zhì)量控制，是從20世紀(jì)70年代，色譜技術(shù)的發(fā)展，人們大量采用薄層色譜（TLC）方法，將植物中化學(xué)成分展載于由各種擔(dān)體鋪成的薄層板上。根據(jù)薄層板上的斑點的位置、斑點大小、斑點顏色、斑點數(shù)目的多少進行定性鑒別，這種薄層鑒別方法具備了指紋圖譜的特征。20世紀(jì)70年代及80年代，出現(xiàn)薄層掃描儀，日本和我國部分學(xué)者用薄層掃描儀得到復(fù)方成藥掃描圖作為色譜指紋圖嘗試應(yīng)用于藥材及成藥分析。20世紀(jì)80年代及90年代，高效液相技術(shù)得到發(fā)展，同時植物藥中化學(xué)成分的分離鑒定、活性成分的不斷闡明，高效液相廣泛應(yīng)用于定性、定量分析。西方普遍采用高效液相色譜法對植物藥中已知及未知組分進行控制，并形成相應(yīng)的規(guī)范。目前高效液相色譜法已成為當(dāng)前研究指紋圖譜的主要手段。

1.2中藥指紋圖譜的定義

中藥指紋圖譜鑒別借用了法醫(yī)學(xué)的指紋鑒定的概念。定義：運用現(xiàn)代分析技術(shù)對中藥化學(xué)信息以圖形（圖像）的方式進行表征并加以描述。由次生代謝產(chǎn)物組成的中藥提取物的色譜指紋圖譜不僅具備個體的絕對的惟一性，更強調(diào)的是物種特征的惟一性與同種植物中的相似性。

現(xiàn)代分析技術(shù)：包括光譜、波譜、色譜、核磁共振、X射線衍射及各種技術(shù)的聯(lián)用。

中藥化學(xué)信息：植物藥（包括來源于植物的中藥材）的提取物（包括中藥的湯藥）與化學(xué)合成藥最根本的區(qū)別是，它（即使是單味藥材）是多種化學(xué)成分的混合體。這種多種化學(xué)成分的綜合體構(gòu)成了“中藥化學(xué)信息”。由于中藥的療效由多種成分協(xié)同作用或“相克作用”，中藥中的化學(xué)信息有一定的模糊性。只有部分化學(xué)信息（包括已知的活性成分、已知的非活性成分、一部分未知成分）可表征于指紋圖譜中。

表征和描述：“表征”是將中藥化學(xué)信息通過色譜圖（液相色譜圖、氣相色譜圖或薄層色譜圖）等方式進行表達；“描述”是對指紋圖譜經(jīng)過計算、分析、比較、評價等過程，以技術(shù)參數(shù)、指紋特征等加以說明。中藥指紋圖譜研究須經(jīng)過制備、分析、比較、評價和校驗等過程

。分析色譜指紋圖譜要求“準(zhǔn)確的辨認”，不是“精密的測量”；比較供試品與對照品的色譜指紋圖譜要求“相似”，而不是“相同”；評價色譜比較的結(jié)果，是根據(jù)色譜指紋圖譜的模糊屬性，著眼于宏觀的規(guī)律性的特征分析，即著重辨認完整色譜的“圖貌”，而不是求索細枝末節(jié)。分析比較的結(jié)果，是對供試品與對照品之間的差異或一致性作出評價。

1.3中藥指紋圖譜與中藥安全、有效、穩(wěn)定和可控的關(guān)系

藥物研究的主要內(nèi)容包括藥物安全性、有效性、穩(wěn)定性和可控性，四者缺一不可。已生產(chǎn)并臨床使用的注射劑等中成藥，由于經(jīng)過了藥效學(xué)測試、臨床評價，安全性與有效性沒有，但是，現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法的不全面性及生產(chǎn)過程中的不穩(wěn)定性導(dǎo)致各批次產(chǎn)品之間質(zhì)量出現(xiàn)差異，在臨床應(yīng)用過程中往往出現(xiàn)非正常的醫(yī)療事故。

指紋圖譜研究的直接目的有兩個方面：

（1）

對中藥質(zhì)量控制的補充和提高?，F(xiàn)有《中國藥典》質(zhì)量控制方法及新藥申報資料7，往往以1個或個以上成分為控制指標(biāo)，在一定程度上反映了原藥材、中間體及成品的質(zhì)量，但任何單一的成分都難以準(zhǔn)確、全面地評價中藥質(zhì)量，不僅不能進行真?zhèn)舞b別和優(yōu)劣判別，在很多情況下，所檢測的指標(biāo)成分（活性成分）還不具有“惟一性”，使用器材比較簡單，操作比較粗糙，有時重現(xiàn)性差?！吨兴幾⑸鋭┲讣y圖譜研究的技術(shù)要求》要求將指紋圖譜檢測指標(biāo)及持續(xù)術(shù)要求作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)單列項目，是對現(xiàn)行中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的有益補充。一個理想的指紋圖譜不僅能達到定性鑒別的目的，色譜圖中大部分藥譜理應(yīng)達到基線分離，對大部分成分應(yīng)可進行定量分析。在沒有對照品的情況下，也可以已知標(biāo)準(zhǔn)品針對其他未知或無標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰進行定量。因此，中藥指紋圖譜是對現(xiàn)行中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)近控制方法的提高。

（2）

控制中間體、成品的一致性，減少批間差異中藥生產(chǎn)的原材料，因土壤、氣候等環(huán)境因素及采收加工的不同，實際使用時不能保證藥材質(zhì)量的穩(wěn)定，經(jīng)加工提取得到的中間體，每個批次在成分含量、成分組成及各成分比例方面都不能保持一致。通過指紋圖譜研究，可以掌握每一個批次的原藥材、中間體中成分變化，進行有指導(dǎo)的合理“勾兌“，保證成品在成分含量、組成比例上一致，減少批間差異。無論是原藥材、中間體還是成品，因組方已固定、生產(chǎn)工藝相對恒定，藥品的安全性不可能直接通過指紋圖譜來保障，但中藥指紋圖譜可直接解決中間體、成品的批間一致性及穩(wěn)定性問題，從而可以間接并最終保障成品的安全性和有效性。一致性安全性指紋圖譜可控性有效性

1.4中藥指紋圖譜建立的意義與原則中藥指紋圖譜建立的是全面反映中藥內(nèi)在化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進而反映中藥的質(zhì)量?，F(xiàn)階段中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確，采用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質(zhì)量。指紋圖譜已為國際社會所認可，有利于中藥及產(chǎn)品進入國際市場。中藥指紋圖譜的建立，應(yīng)以系統(tǒng)的化學(xué)成分和藥理學(xué)研究為依托，應(yīng)體現(xiàn)系統(tǒng)性、特征性、重現(xiàn)性三個基本原則。系統(tǒng)性：“系統(tǒng)性“是指指紋圖譜所反映的化學(xué)成分應(yīng)包括中藥有效部位所含大部分成妥的種類，或指標(biāo)成分的全部。如：中藥人參中所含的有效成分多為皂苷類化合物，則其指紋圖譜應(yīng)盡可能多地反映其中的皂苷成分；銀杏葉中的有效成分是黃酮和銀杏內(nèi)酯類，則其指紋圖譜可采用兩種方法針對這兩類成分，分別分析，以達到系統(tǒng)、全面的目的。特征性：“特征性“是指指紋圖譜中反映的化學(xué)成分信息（具體表現(xiàn)為保留時間或位移值）是具有高度選擇性的，這些信息的綜合結(jié)果，將能特征地區(qū)分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣，成為中藥自身的”化學(xué)條碼“。

如：北五味婦的高效液相色譜和薄層色譜指紋圖譜，不僅包括多種已知的五味子木脂素成分，而且還有很多未知成分，這些成分之間的順序、比值在一定范圍內(nèi)是固定的，并且隨藥材品種的不同而不同。通過這些整體信息，可以很好地區(qū)分北五味子與南五味子以及其它來源的五味子藥材，辨別藥材的真?zhèn)闻c優(yōu)劣。重現(xiàn)性：“重現(xiàn)性“是指所建立的指紋圖譜，在規(guī)定的方法與條件下，不同的操作者和不同的實驗室應(yīng)能作出相同的指紋圖譜，其誤差應(yīng)在允許的范例內(nèi)，這樣才可以保證指紋圖譜的使用具有通用性和實用性，也是作為標(biāo)準(zhǔn)方法所必備的特征之一。實現(xiàn)指紋圖譜的重現(xiàn)性，除在樣品制備方法、分析過程、結(jié)果處理待環(huán)節(jié)規(guī)范操作外，還應(yīng)建立相應(yīng)的評價機制，對指紋圖譜進行客觀評價，并公布標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。實現(xiàn)中藥指紋圖譜的三原則，保證其標(biāo)準(zhǔn)化，做到統(tǒng)一規(guī)范，這樣才可以使中藥指紋圖譜得以推廣應(yīng)用。

1.5國外植物藥指紋圖譜的應(yīng)用美國FDA：允許草藥保健品申報資料可以提供色譜指紋圖；WHO：1996年草藥評價指導(dǎo)原則中規(guī)定，如果草藥的活性成分不明，可以提供色譜指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致。歐共體：在草藥質(zhì)量指南中稱，單靠測定某有效成分考察質(zhì)量的穩(wěn)定性是不夠的，因為草藥及其制劑是以整體為活性物質(zhì)。在歐共體藥品申請注冊表格中植物藥制品的“藥物專家報告“要求通過已知的具有治療作用的活性物質(zhì)對原料、中間體及成品進行標(biāo)準(zhǔn)化控制。第二章中藥指紋圖譜研究方法學(xué)

2.1常用指紋圖譜研究的方法與技術(shù)研究對象的不同，指紋圖譜研究的方法與技術(shù)也不同，并都隨著現(xiàn)代科技技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展。中藥指紋圖譜研究所采用的方法大致分為：色譜法、光譜法及其它。色譜法包括：薄層色譜法（TLC）、液相色譜法（LC）、氣相色譜法（GC）、高效毛細管電泳法（CE）；光譜法包括：紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、近紅外光譜法（NIR）；X射線衍射法、核磁共振法（NMR）等。

（1）

X射線衍射法及核磁共振法這兩種方法能給出藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)信息，部分信息也可能與特定化學(xué)成分直接關(guān)聯(lián)。但該兩種方法所使用的儀器在國內(nèi)尚未普及，不適應(yīng)該方法的應(yīng)用與推廣。在中藥指紋圖譜研究過程中不建議采用X射線衍射法及核磁共振法。

（2）

紫外可見分光光度法和紅外光譜法這兩種方法能夠給出藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的結(jié)構(gòu)信息，但所給出的信息是所有化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)信息的加和，不具備指紋特征，但可作為中藥指紋圖譜研究的輔助方法。

（3）

近紅外光譜法

此方法與紅外光譜法原理相同，但檢測時采用近紅外波長，所給出的信息是所有化學(xué)物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息的加和，通過一系列樣本的檢測（必須預(yù)先知道樣品中相關(guān)成分的含量或樣本的定性歸屬），運用化學(xué)計量學(xué)手段，建立了樣本與信息之間的數(shù)學(xué)模型。運用該模型即可對未知樣本（如：新近購進的原藥材或新生產(chǎn)的成品等）進行辨別分析（給出結(jié)果：合格與否、含量多少等）。優(yōu)點：檢測速度快（通常為1min）、操作簡單、適宜過程控制等。數(shù)據(jù)處理需掌握一定的化學(xué)計量學(xué)知識。近紅外技術(shù)在農(nóng)藥、化工、農(nóng)業(yè)等相關(guān)領(lǐng)域已廣泛應(yīng)用，方法的成熟度較高，在中藥質(zhì)量控制方面有較好的應(yīng)用前景，可大力推廣近紅外技術(shù)在原材料質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

（4）

薄層色譜法薄層色譜法為傳統(tǒng)的定性、定量分析方法，廣泛應(yīng)用于道地藥材的定性鑒定。2000版《中國藥典》，采用薄層色譜法進行定性鑒別，列于【鑒別】項下；采用薄層掃描法進行含量測定，列于【含量測定】項下。優(yōu)點：操作簡單、分析速度快、一次分析樣品數(shù)量多。缺點：重現(xiàn)性、精密度差。可作為中藥指紋圖譜研究的借鑒與補充。

（5）

液相色譜法最常用的指紋圖譜研究方法，其中高效液相色譜法（HPLC）具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點。中藥樣品中含有的成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，方法成熟，中藥指紋圖譜研究應(yīng)優(yōu)先考慮高效液相色譜法。

（6）

氣相色譜法氣相色譜法主要用于分析氣體、揮發(fā)性和半揮發(fā)性液體以及能夠產(chǎn)生足夠蒸氣壓的固體，或者沸點在500℃以下，相對分子質(zhì)量400以下的物質(zhì)。在中藥質(zhì)量控制中主要用于揮發(fā)油、極性較小的成分或衍生化后的可揮發(fā)性成分（如脂肪酸的酯）。特點：靈敏度高、分離度好、分析速度快，定量分析的精密度優(yōu)于1%，但分析范圍只局限于低沸點成分是其主要不足。為中藥指紋圖譜研究的主要方法之一。

（7）

高效毛細管電泳法高效毛細管電泳法是以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅(qū)動力的新型分離分析技術(shù)。適用于中藥中帶電荷的化合物（蛋白質(zhì)、氨基酸、黃酮、生物堿）、有機酸、單糖及一些中性分子的分離分析，可作為中藥指紋圖譜研究的補充。

（8）

其它高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）、氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）、毛細管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用（CE-MS）等。這些方法可在指紋圖譜中的部分色譜峰在無標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)驗證的情況下，起到定性鑒別的作用。最常用的為：TLC、HPLC、GC。

2.2指紋圖譜研究常用的儀器與設(shè)備

2.2.1薄層掃描儀（1）

薄層掃描流程點樣洗脫展開掃描檢測數(shù)據(jù)處理

（2）

薄層掃描儀主要部件典型的薄層掃描儀主要由機械掃描裝置和數(shù)據(jù)處理兩部分組成，新型的薄層掃描儀配有自動點樣器等。

（3）

主要廠家及儀器型號日本島津CS系列；美國SchoeffelSD3000等。

2.2.2高效液相色譜儀22.2.3氣相色譜儀

2.3指紋圖譜研究對高效液相色譜儀的要求

2.3.1柱外效應(yīng)應(yīng)特別注意“柱外效應(yīng)”對分析結(jié)果的影響。由于樣品分子在液體流動相的擴散系數(shù)比在氣體中小4~5個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢1~2個數(shù)量級，因此，樣品注入色譜柱后，在柱子以外任何死空間（如進樣器、柱接連接管和檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留都會顯著引起色譜峰的擴散，而使柱效降低，所以柱外死體積的影響量不能忽略。在制造和使用高效液相色譜儀時，應(yīng)使柱外效應(yīng)減至最小,以獲得理想的分析結(jié)果。

建議：色譜柱及檢測器前死體積應(yīng)最小。2.3.2流動相的脫氣流動相在使用前必須進行脫氣處理，以除去其中溶解的氣體（如O2），防止在洗脫過程中，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。若在低死體積檢測池中存在氣泡，會增加基線噪聲，嚴(yán)重時會造成分析靈敏度下降而無法進行分析。溶解在流動相中的氧氣會造成熒光猝滅，影響熒光檢測器的檢測；可導(dǎo)致樣品中的某些級組分被子氧化或使柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。常用的脫氣方法有離線式脫氣和在線式脫氣。離線式脫氣：吹氦脫氣法、加熱回流法、抽真空脫氣法、超聲波脫氣法等。離線式脫氣會因流動相存放時間的延長以致有空氣重新溶解在流動相中；在線式脫氣技術(shù)是把真空脫氣裝置串接到貯液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器，實現(xiàn)流動相在進入輸液泵前的連續(xù)脫氣。在線式脫氣法的脫氣效果明顯優(yōu)于離線式脫氣法，并適用于多元溶劑體系。建議：選擇在線脫氣。2.3.3梯度洗脫梯度洗脫是流動相中含有兩種或兩種以上的不同極性的溶劑，在洗脫過程中連續(xù)或間斷改變流動相的組成，以調(diào)節(jié)它的極性，使每個流出的組分獲得最理想的分離效果，并使樣品中的所有組分可在最短的分析時間內(nèi)，以適用的分離度獲得圓滿的選擇性分離。分為高壓梯度和低壓梯度兩種方式進行操作。由于高壓梯度裝置中，每種溶劑是分別由泵輸送的，進入混合器后，溶劑的可壓縮性和溶劑混合時的熱力學(xué)體積的變化，可能影響輸入到色譜柱的流動相的組成，因此高壓梯度洗脫過程中為保證流速穩(wěn)定必須使用恒流泵，否則很難獲得重復(fù)性結(jié)果。低壓梯度是在常壓下將多元溶劑輸至混合器中。優(yōu)點是：①僅需要使用一個高壓輸液泵；②減小了溶劑可壓縮性的影響，并能完全消除由于溶劑混合引起的熱力學(xué)體積變化帶來的誤差。建議：選擇低壓梯度。

2.3.4樣品進樣進樣器有以下幾種：

（1）

停流進樣裝置為防止在帶壓操作下引起流動相泄露，此裝置要求進樣前壓降至常壓下再進樣，操作繁瑣，已較少使用。

（2）

六通閥進樣裝置該方法重現(xiàn)性較好，較常用。

（3）

自動進樣器自動進樣器由計算機自動控制定量閥，按預(yù)先編制的注射樣品操作程序工作。取樣、進樣、復(fù)位、樣品管路清洗和樣品盤的轉(zhuǎn)動，全部按預(yù)定程序自動進行，一次可進行幾十個或上百個樣品的分析。自動進樣的樣品量可連續(xù)調(diào)節(jié)，適合大量樣品分析，節(jié)省人力。

（4）

建議：中藥指紋圖譜研究過程中，由于對樣品的進樣量精確度要求不高，因此對進樣器的選擇可結(jié)合研究者的實際情況，建議選擇六通閥手動進樣裝置。2.3.5色譜柱2.3.6柱溫不同柱溫下同一成分在的保留時間往往發(fā)生遷移，有時還影響成分之間的分離效果。由于中藥樣品成分的復(fù)雜性，尤其是中藥指紋圖譜技術(shù)要求色譜峰的相對保留時間、峰面積比值的相對恒定，對柱溫的要求應(yīng)嚴(yán)格控制，以保證分析方法的重現(xiàn)性。建議：選擇柱溫箱。

2.3.7檢測器

（1）

紫外線檢測器應(yīng)用最廣，要求分析樣品必須在紫外線區(qū)有吸收。特點：靈敏度高、線性范圍寬，可做成很小池體積的流通，對流動相的流速和溫度變化不太敏感，易操作，不破壞樣品，波長可以選擇及可用于梯度洗脫。

（2）

示差折光檢測器示差折光檢測器是通用型檢測器，對在可見光或紫外線區(qū)無吸收的樣品一般選用。不破壞樣品，缺點是對溫度變化敏感，不能用低梯度洗脫，靈敏度低，不能用于痕量分析。

（3）

熒光檢測器（4）

電化學(xué)檢測器（5）

二極管陣列檢測器光束通過流通池、分光系統(tǒng)后，使所有波長在二級管陣列檢測器同時檢測器，可得三維的時間-色譜信號-吸收光譜圖。特點：可進行全波長檢測，一次進樣可以檢測到樣品中不同波長下的所有組分；光譜分辨率高，可以檢測色譜峰的純度；靈敏度高，線性范圍寬，基線噪聲小。可得到所有組分的全波長掃描圖，可用于定性分析，通過對三維色譜圖的分析，可以優(yōu)化檢測波長。

（6）

蒸發(fā)激光光散射檢測器通用性檢測器?？梢詸z測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品，可作于無生色團物質(zhì)的檢測，如碳水化合物（多糖）、類脂類（磷脂）、皂苷、不進行衍生化的脂肪酸和氨基酸，以及結(jié)構(gòu)不明又無標(biāo)準(zhǔn)樣品的未知物。根據(jù)具體情況，進行選擇。據(jù)統(tǒng)計，95%的中藥組分在可見光或紫外線區(qū)有吸收，可首選配置可編波長紫外線檢測器（VWD）。

建議：在指紋圖譜研究過程中，由于并不完全了解樣品中所含組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)，尤其是復(fù)方制劑所含組分結(jié)構(gòu)類型不一，最大吸收波長各不相同，很難一次成功地選擇好檢測波長。因此最好選用二極管陣列檢測器。第三章中藥色譜指紋圖譜研究過程中的關(guān)鍵問題

指紋圖譜技術(shù)在植物藥領(lǐng)域已應(yīng)用十余年，研究方法與研究思路相對成熟，已形成共識，普遍采用HPLC、TLC、GC或NIR（近紅外技術(shù)），對植物藥有效組分進行全成分質(zhì)量控制，即指紋圖譜技術(shù)。

3.1方案設(shè)計與思路3.1.1研究對象的確定

植物藥或中藥的成分可分為：蛋白質(zhì)、脂類、糖及衍生物、有機酸、酚類、鞣質(zhì)、醌類、內(nèi)酯、香豆精、黃酮類、皂苷類、生物堿類、甾體類、萜類、揮發(fā)油等。當(dāng)研究某個注射劑品種的指紋圖譜時，首先必須調(diào)研相關(guān)的文獻、新藥申報資料（質(zhì)量部分和工藝部分）及其它研究結(jié)果，盡可能詳盡地了解藥材、中間體及成品中所含水量成分的種類及其理化性質(zhì)，經(jīng)綜合分析后找出成品中的藥效成妥或有效成分，作為成品或中間體指紋圖譜的研究對象，即分析檢測目標(biāo)。如：黃芪含黃酮、皂苷及多糖；黃芪多糖注射液是以黃芪中的多糖為原料，因此對黃芪多糖注射液進行指紋圖譜研究時應(yīng)以多糖作為研究對象；研究其中間體時也應(yīng)以多糖為研究對象；研究原藥材的指紋圖譜時應(yīng)把黃酮、皂苷及多糖作為研究對象。復(fù)方應(yīng)以君藥、臣藥中有效成分作為主要研究對象，佐使藥中的成分可采用其它指紋圖譜方法進行輔助、補充研究。3.1.2研究方法的選擇

主要采用色譜法。各種色譜法是互補的，應(yīng)根據(jù)研究對象的實際需要和可能以及按照不同色譜技術(shù)的特點和優(yōu)勢而定，目的是保證方法的重現(xiàn)性和確能反映產(chǎn)品質(zhì)量的主要化學(xué)成分。一個中藥制劑指紋圖譜應(yīng)可以同時采用兩種或更多種方法進行研究。指紋圖譜研究方法應(yīng)根據(jù)研究對象的物理化學(xué)性質(zhì)來選擇，大多數(shù)方法可采用HPLC法。通常揮發(fā)油類采用GC。一些難以檢測或采用上述方法得不到較理想的分離效果時，可采用TLC或CE。3.1.3研究內(nèi)容根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局下發(fā)的《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》（暫行）的規(guī)定，主要研究內(nèi)容有原藥材、中間體、注射劑的指紋圖譜，涉及樣品名稱、來源、制備、測定方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)等研究項。3.2原藥材、中間體及注射劑樣品選擇與收集中藥是天然產(chǎn)物，中藥的活性成分都是次生的代謝產(chǎn)物，本身有它內(nèi)在的不穩(wěn)定性。我國藥材品種多、產(chǎn)地廣、分散度大，造成了中藥材基源復(fù)雜，形成許多同名異物的品種，這些品種在傳統(tǒng)中醫(yī)臨床中并未加以細分，其中多數(shù)已收入《中華人民共和國藥典》。對于《中國藥典》收載的品種，從中醫(yī)的角度均可入藥，這種多基源藥材增加了色