DB1402T9-2023 黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術規(guī)程

ICS65.020.20CCSB31

1402大 同 市 地 方 標 準黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術規(guī)程2023-8-21發(fā)布 2023-11-21實施大同市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB1402/T9DB1402/T9—2023PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前言 II范圍 1規(guī)范性引用文件 1術語和定義 1試驗材料 1材料 1試劑 1儀器設備 2操作流程 2外植體的處理 2培養(yǎng)基配置 2滅菌 2接種 2轉接 2生根培養(yǎng) 2生產檔案 2前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由大同市農業(yè)農村局提出、組織實施和監(jiān)督檢查。本文件由大同市農業(yè)標準化技術委員會（DTS/TC01）歸口。本文件起草單位：山西農業(yè)大學高寒區(qū)作物研究所。本文件主要起草人：李小玉、邢寶龍、沈日敏、盧瑤、岳新麗、王慧、馬濤、孟璐、張知、王力、馮婧。DB1402/T9DB1402/T9—2023PAGEPAGE1黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)技術規(guī)程范圍本文件規(guī)定了黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)的術語和定義、試驗材料、操作流程及生產檔案。本文件適用于黃花菜幼葉組培再生系統(tǒng)生產。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。LY/T1882-2010林木組織培養(yǎng)育苗技術規(guī)程NY/T1606-2008馬鈴薯種薯生產技術操作規(guī)程NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術規(guī)程術語和定義LY/T1882-2010、NY/T2306-2013等界定的以及下列術語和定義適用于本文件。為便于使用，以下重復列出了LY/T1882-2010、NY/T2306-2013中的某些術語和定義。黃花菜黃花菜（HemerocalliscitrinaBar.）學名萱草，又名金針菜，屬阿?；戚娌輰偎薷荼局参?。植物組織培養(yǎng)在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質體，在人工培養(yǎng)基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過程和技術。[來源：LY/T1882-2010，3.2]幼葉培養(yǎng)以植物葉片為外植體，通過植物組織培養(yǎng)的方式獲得完整植株的一種生物技術。[來源：NY/T2306-2013，3.4]試驗材料應以黃花菜幼葉為外植體。試劑MS、1/2MS（不含瓊脂和糖）2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、（IAA）（IBA）6-（63%（5g/L）、氫氧化鈉（NaOH）。儀器設備萬分之一分析電子天平、立式壓力蒸汽滅菌鍋、移液槍、精度0.1g的天平、超凈工作臺。操作流程外植體的處理外植體剝離將剛發(fā)芽的黃花菜幼苗剪去老根，根冠表皮切除，剝離葉片直至露出黃綠色嫩葉，用洗潔精清洗，紗布包裹在流水下沖洗12h。經上述處理后，將幼葉放進超凈工作臺，待用。幼葉的消毒75%的酒精對幼葉處理30s0.1%的升汞溶液對幼葉滅菌8min，無菌水浸洗51min～2min；消毒后用濾紙將幼葉表面的水分吸干，然后放到培養(yǎng)基上進行誘導愈傷培養(yǎng)。培養(yǎng)基配置以MS（誘導培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)）作基本培養(yǎng)基附加不同激素組合：a)誘導幼葉愈傷組織最適培養(yǎng)基：MS+2,4-D（2.0mg/L）+6-BA（0.1mg/L）；b)幼葉愈傷組織分化培養(yǎng)基：MS+6-BA（2.0mg/L）+IBA（0.5mg/L）；c)生根培養(yǎng)基：MS+NAA（0.5mg/L）。滅菌將分裝好的培養(yǎng)基放入滅菌鍋內消毒。消毒過程應按滅菌鍋的使用技術規(guī)程操作，滅菌氣壓采用0.1MPa，溫度采用121℃，消毒時間20min。接種在超凈工作臺中完成接種，接種于誘導幼葉愈傷組織中，葉片需背面朝上放置。每瓶接種4個幼葉7d～1022～262000lx～2500lx。轉接誘導培養(yǎng)25d～30d后，轉接到幼葉愈傷組織分化培養(yǎng)基中進行培