ma基本培養(yǎng)基的簡化及脫毒種苗的選育

ma基本培養(yǎng)基的簡化及脫毒種苗的選育

1脫毒苗的生產(chǎn)1.1培養(yǎng)基制備對基本培養(yǎng)基的有機成分和養(yǎng)分進行分解（其他成分和劑量保持不變），并將其轉(zhuǎn)化為大量元素，添加甘蔗和洋菜粉。1.2休醉芽各品種的誘導(dǎo)成活率生產(chǎn)脫毒種苗,一般以經(jīng)過新品種選育,通過試驗,生產(chǎn)上通過示范,區(qū)域試驗,完成整個育種程序后又比當?shù)刂髟云贩N增產(chǎn)10%以上并通過種子部門審定命名的品種作為母本材料。脫毒材料確定后就要有目的地開始取材,首先選取植株的腋芽或母薯通過半光熱沙床處理休眠期后的休眠芽。據(jù)張家口市壩上農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所試驗,取材部位是塊莖靠近臍部的休眠芽。植株取中部腋芽其誘導(dǎo)成活率高,產(chǎn)生無毒種苗數(shù)的百分率要高于其它部位。以取植株腋芽作為母體材料準備脫毒為例,在7月上中旬(現(xiàn)蕾至開花期),品種的特征特性充分表現(xiàn)出來,選取無病、無退化,無其它異癥,生長健壯,葉片黑綠,中大,莖葉干凈利索,葉片表面具有光澤,能代表本品種特征的植株中部腋芽。取材后要進行嚴格的“術(shù)前”表面消毒處理,首先用無菌水將材料沖洗20~30min,然后用無菌紗布將材料包好帶回?zé)o菌操作室,將材料從紗布中取出,在75%的酒精內(nèi)迅速浸蘸一下,再將材料放入無菌杯內(nèi),用0.1%的升汞水或5%的漂白粉浸泡3~5min,取出材料再用無菌水沖洗3~4次,將材料放在經(jīng)過消毒的無菌吸濕紙上,吸去腋芽表面多余水分準備剝離生長點。1.3芽周圍組織層剝削制度在超凈工作臺上,左手輕捏經(jīng)過預(yù)消毒的材料,右手緊持解剖針(解剖針可用3號針灸針頭接到在酒精燈熱化的玻璃棒上),在30~40倍的雙筒解剖鏡下,進行剝離操作。先將腋芽周圍組織層的幼葉剝?nèi)?層層細剝,直至裸露出帶1~2個葉原基的光滑生長點,然后用另一根無菌針(刀片亦可)輕輕切下帶1~2個葉原基的生長點(0.2~0.5mm),用接菌針頭將生長點移到150ml三角瓶內(nèi),三角瓶裝有經(jīng)過高溫消毒的MA培養(yǎng)基,每瓶只接1個生長點,給予優(yōu)越的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。剝離生長點時所用工具和手都要用75%的酒精消毒,殘留和多余酒精用酒精燈烘烤。每剝離一次都要用75%酒精棉球擦試鏡臺,剝出的生長點不能在空間裸露時間過長,防止干枯死亡。接種針不能太燙,防止燙死生長點。2幼苗的培育和鑒定2.1生長點及誘導(dǎo)種plusv無菌培養(yǎng)室溫度一般應(yīng)保持在22~25℃,光照條件不少于16~18h/d,自然采光要比室內(nèi)日光燈光照好,光照強度為3000~4000lx,生長點約經(jīng)100~120d時間長成帶有3~5個葉片的小種苗,并在培養(yǎng)層內(nèi)長出少量根系,一般誘導(dǎo)成苗率在30%~40%,因剝離生長點的大小不同,品種各異,因此所誘導(dǎo)的種苗不都是無毒的,因此對種苗必須進行病毒鑒定,明確其是否真正脫去所帶病毒,獲得了真正無病毒種苗,在實踐過程中我們認為,在脫毒過程中主要脫去X、Y、A、M、S和PLRV病毒,因PLRV病毒分子游離于生長點,所以容易脫去脫凈,而脫去PVX病毒確實困難。2.2抗血清鑒定檢驗把成株的種苗先切段繁殖5~10株,在3~4個三角瓶內(nèi)培養(yǎng)成小苗,給予隨機編號,取其中2~3瓶進行抗血清鑒定檢驗,無陽性反應(yīng)再用溫室指示植物如千日紅、洋酸漿、曼陀羅、黃花煙等接種鑒定,觀察其是否發(fā)病,經(jīng)過反復(fù)鑒定,在指示植物上無癥狀,不發(fā)病的單株,證明是真正的無病毒種苗,將發(fā)病的在指示植物上有癥狀的種苗全部淘汰。2.3苗木切段的操作當?shù)玫綗o病毒種苗后,就要加快繁殖,盡快應(yīng)用于生產(chǎn)。具體方法是:把裝有無病毒種苗的三角瓶,用75%酒精棉球自上而下地擦1~2次,進行表面消毒殺菌,在無菌超凈工作臺上把三角瓶中的種苗用消過毒的手術(shù)鑷子輕輕鑷出,剪去下部根須進行切段。切段是個很關(guān)鍵的操作過程,須在每個切段上帶1個小葉,切段斜面盡量要小,使其在培養(yǎng)基上快速愈合,盡快成苗抓根。把切好的苗段放入滅過菌的三角瓶內(nèi)的培養(yǎng)基面上,蓋好瓶塞,每瓶放20~25個切段,此過程要在酒精燈旁操作防止污染。將三角瓶擺上培養(yǎng)架,置于20~23℃,18h光照條件下培養(yǎng),在培養(yǎng)過程中要嚴格控制溫度,加強自然光照,一般在20~22d長出5~6片小葉,按其上述方法根據(jù)所需的種苗進行循環(huán)切繁,在最后一次切繁作業(yè)中,在培養(yǎng)基中加濃度10mg/kg的B9和CCC激素,使其小苗粗壯,葉片肥大,加快生長發(fā)育。3營養(yǎng)缽培養(yǎng)液在切繁至需要的脫毒苗數(shù)量時,要進行網(wǎng)室定植前的假植。在假植之前先要煉苗,將裝有脫毒苗的三角瓶放在溫室地上,給予一定溫度平擺一層,瓶與瓶之間留有一定間距,在自然光照下和18℃左右的溫度下蹲煉壯苗,溫度超過23℃時給予遮光,煉苗時間7~10d,使其幼苗稍微失水,出瓶不易折斷,而且通過煉苗后幼苗葉片黑緣,主莖粗壯墩實,假植后的成活率高。準備假植,在溫室事先裝好紙營養(yǎng)缽,每666.7m2溫室裝20~21萬個營養(yǎng)缽,缽內(nèi)裝有經(jīng)過滅凈蟲卵,充分腐熟過篩的馬糞、沃沙土,適當混加磷酸二胺的營養(yǎng)土,營養(yǎng)缽要在畦內(nèi)擠死擺平,橫豎成行,然后澆足座缽水。從三角瓶內(nèi)鑷出小苗放入盛清水的搪瓷盆內(nèi),充分洗去根部的培養(yǎng)基,將苗放在小盤內(nèi),在營養(yǎng)缽中心用筷子粗的小木棍打一個1.5~2.0cm深的小孔,放入一根小苗,放好小苗用大拇指和食指在缽面擠一下,以防漏風(fēng),邊假植邊畦面細水噴灑,必須保濕、保溫,溫室頂部加蓋遮陰簾,避光直射,待5~7d后幼苗扎根吸收缽內(nèi)養(yǎng)分,開始由緩苗進入正常生長時立即揭去遮陰簾,溫室上覆45目尼龍網(wǎng)紗,紗下覆塑料薄膜。4及時除草、除草重溫室要確定專人管理,特別是溫、濕度的控制和定時防病除草,確保種苗準時出圃,苗壯不徒長,莖葉發(fā)育正常,室內(nèi)溫度最高不得超過43℃,后期濕度不宜太大,防止早疫病的為害,苗高3~4cm時及時除盡雜草,防止雜草遮光和與幼苗爭奪養(yǎng)分,其次要隨時松土提高缽內(nèi)溫度,促進根系下扎和匍匐莖的滋生,定時噴水通風(fēng)降溫必須按操作規(guī)程進行。在發(fā)現(xiàn)營養(yǎng)缽內(nèi)的營養(yǎng)不足,表現(xiàn)苗色發(fā)黃瘦弱纖細要及時噴灑0.3%的磷酸二銨混0.1%磷酸二氫鉀溶液。苗高5cm左右及時在根部培沃沙土一次,增加幼苗的匍匐莖群,經(jīng)過35~40d的精細管理幼苗達到8~10cm的適宜苗齡即可出圃移入45目尼龍網(wǎng)紗覆蓋的網(wǎng)室進行原原種生產(chǎn),在幼苗出圃7~10d前要晝夜通風(fēng)煉苗,使其幼苗出圃后盡快適宜外界環(huán)境條件。5脫毒甘薯原生產(chǎn)工藝5.1網(wǎng)室地段的選擇當脫毒種苗高8~10cm時,適宜的定植時間張家口壩上地區(qū)約在6月8~15日,壩下地區(qū)在5月中旬,開始帶胎土(整體營養(yǎng)缽)移入45目尼龍網(wǎng)紗覆蓋網(wǎng)室內(nèi),進行原原種生產(chǎn)。建立網(wǎng)室的地塊要求不是馬鈴薯地和老菜園地,并且在1.5km2之內(nèi)不種植一般高代馬鈴薯以及十字花科作物,防止蚜蟲和同一病毒感染,而網(wǎng)室地塊要偏砂性和微酸性,土壤疏松,孔隙度大,比重輕,地勢平坦不積水,不堿不灘,土層潤厚肥沃,排水方便。施優(yōu)質(zhì)腐熟農(nóng)家肥6~7.5萬kg/hm2,施入基肥后要深翻25cm以上,土、肥要混合均勻,以防定植后出現(xiàn)點片苗,根據(jù)品種生育日數(shù)的長短,確定定植密度,生育期短的品種如費烏瑞它、鄭薯5號、中薯2號、中薯3號和壩薯9號定植6萬株/hm2,生育期長的品種如冀張薯2號、3號、5號和壩薯8號定植52500株/hm2,盡量加大行距,縮小株距,以利后期立壟分層培土和通風(fēng),定植移栽時大苗稍深,小苗略淺,栽正扶平,缽基舒展,橫豎成行。5.2培肥、農(nóng)藥和農(nóng)藥隨定植隨澆水,第一水必須澆足澆透,不得幼苗栽入室內(nèi)過午澆水,防止高溫?zé)缈久?第二水在第一水澆3~4d后網(wǎng)室地表稍有干皮(虎皮花狀)及時復(fù)第二水,小水淺灌,浸過地皮即可,不可大水猛澆,防止因土壤濕度過大通氣不良影響緩苗,從第2水7~10d開始淺鋤查苗補苗。7月中旬至9月中旬每隔7~8d噴灑樂果、敵敵畏、一遍凈混合代森錳鋅、雷米多爾、疫克、甲霜靈等殺蟲殺菌農(nóng)藥,防止蚜蟲和晚疫病發(fā)生,上述農(nóng)藥要交替使用,不可一藥用到底。全生育期要分層培土兩次,達到垡土立壟,分層結(jié)薯的目的。在進入現(xiàn)蕾至開花期要隨時派專人進入網(wǎng)室拔除異癥株和帶病株,拔除后的植株裝入塑料袋帶出網(wǎng)室外深埋,根據(jù)生長勢追尿素225kg/hm2和葉面噴灑磷酸二氫鉀與塊莖膨大素溶液。5.3成熟