《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》

《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》（供四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)（技術(shù)研發(fā)方向）使用）教學(xué)大綱重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心病原生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室2021年10月前言基本信息課程名稱：臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)學(xué)分：共56學(xué)時(shí)，3.5學(xué)分適用專業(yè)：四年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（技術(shù)研發(fā)方向）先修課程：臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)二、課程簡介《臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)》是致力于從事臨床微生物檢驗(yàn)技術(shù)和相關(guān)研發(fā)的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系專業(yè)學(xué)生的一門重要的專業(yè)實(shí)驗(yàn)課。近年來，隨著全球公共衛(wèi)生事件的不斷發(fā)生，新的傳染病的流行，微生物學(xué)檢驗(yàn)受到極大重視。同時(shí)，隨著分子生物學(xué)和免疫學(xué)的飛速發(fā)展，使得新的實(shí)驗(yàn)方法不斷涌現(xiàn)，需要從事臨床微生物技術(shù)研發(fā)的人員掌握更多的方法和具有創(chuàng)新性。通過《臨床檢驗(yàn)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)》模塊二的學(xué)習(xí)，要求學(xué)生加深對實(shí)驗(yàn)原理的理解，建立生物安全的理念，無菌觀念；掌握無菌操作基本技術(shù)，掌握常見微生物檢驗(yàn)的基本技術(shù)；了解國家生物安全的相關(guān)政策和微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的進(jìn)展，了解目前微生物檢驗(yàn)中的先進(jìn)儀器設(shè)備和方法。培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力、分析及解決實(shí)際問題的能力和創(chuàng)新的思維，為畢業(yè)后從事微生物學(xué)檢驗(yàn)相關(guān)工作打下良好的基礎(chǔ)。三、課程目標(biāo)1.思想道德與職業(yè)素質(zhì)目標(biāo)通過本課程學(xué)習(xí)，培養(yǎng)學(xué)生尊重科學(xué)、實(shí)事求是、熱愛醫(yī)學(xué)事業(yè)、不懼艱苦、求知?jiǎng)?wù)實(shí)的探索精神和為醫(yī)學(xué)健康服務(wù)的獻(xiàn)身精神和良好的醫(yī)學(xué)職業(yè)素養(yǎng)及高尚的思想品德。2.知識(shí)目標(biāo)通過本課程的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握原臨床微生物的基本特點(diǎn)，熟悉生物安全規(guī)則，熟悉無菌操作技術(shù)，根據(jù)所學(xué)的臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)知識(shí)應(yīng)用于臨床微生物檢查工作。3.技能目標(biāo)通過本課程的學(xué)習(xí)，掌握臨床生物學(xué)實(shí)驗(yàn)特有的基本操作技術(shù)，最終達(dá)到培養(yǎng)學(xué)生理論聯(lián)系實(shí)際、基礎(chǔ)聯(lián)系臨床的思維能力，并具有自主學(xué)習(xí)能力，為后續(xù)的臨床檢驗(yàn)工作打下良好的基礎(chǔ)。四、教學(xué)要求根據(jù)課程教學(xué)大綱及目標(biāo)，確保課程教學(xué)內(nèi)容、教學(xué)過程（環(huán)節(jié)）、知識(shí)與能力目標(biāo)的達(dá)成，同時(shí)，對學(xué)生自主學(xué)習(xí)能力進(jìn)行培養(yǎng)。五、考核方式課程考試方式采用形成性評價(jià)方式，一般為平時(shí)成績30%，期末成績70%。平時(shí)成績包括考勤、平時(shí)作業(yè)、課堂表現(xiàn)、操作考核、實(shí)驗(yàn)報(bào)告等。參與人（排名不分先后）：張光媛，鄧西川，陳婷婷，劉佳執(zhí)筆人（排名不分先后）：張光媛審定人：何永林教材、教輔用書與參考書目一、教材選用教材為樓永良《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》，人民衛(wèi)生出版社，2015.該教材是為本課程量身定制，完全符合本課程需要二、教輔用書及參考數(shù)目1.劉運(yùn)德，樓永良.《臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)》，人民衛(wèi)生出版社，2015.2.陳東科，孫長貴.《實(shí)用臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)與圖譜》,人民衛(wèi)生出版社，2011.3.周庭銀，倪語星，胡繼紅，蘇建榮，徐應(yīng)春等.《臨床微生物標(biāo)準(zhǔn)化操作》（ISO15189認(rèn)可指導(dǎo)書）第三版，上?？萍汲霭嫔?，2015.目錄實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備……7實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌培養(yǎng)的接種方法………7實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌培養(yǎng)物的觀察…………8實(shí)驗(yàn)四真菌的檢驗(yàn)…………………8實(shí)驗(yàn)五細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)……………9實(shí)驗(yàn)六病原性球菌的檢驗(yàn)…………10實(shí)驗(yàn)七分枝桿菌的檢驗(yàn)……………11實(shí)驗(yàn)八腸道桿菌的檢驗(yàn)……………11實(shí)驗(yàn)九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗(yàn)…………………12實(shí)驗(yàn)十尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查………13實(shí)驗(yàn)十一血液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查…………………14實(shí)驗(yàn)十二菌種的保存………………15教學(xué)時(shí)數(shù)分配表（共56學(xué)時(shí)）實(shí)驗(yàn)序號(hào)實(shí)驗(yàn)題目實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)類型實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備3基本方法實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的接種方法3基本方法實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌培養(yǎng)物的觀察2基本方法實(shí)驗(yàn)四真菌的檢驗(yàn)2驗(yàn)證型實(shí)驗(yàn)五細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)6綜合型實(shí)驗(yàn)六病原性球菌的檢驗(yàn)6綜合型實(shí)驗(yàn)七分枝桿菌的檢驗(yàn)2綜合型實(shí)驗(yàn)八腸道桿菌的檢驗(yàn)8綜合型實(shí)驗(yàn)九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗(yàn)8綜合型實(shí)驗(yàn)十尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查8綜合型實(shí)驗(yàn)十一血液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查6綜合型實(shí)驗(yàn)十一菌種的保存2綜合型合計(jì)56實(shí)驗(yàn)一細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制備【實(shí)驗(yàn)類型】基本實(shí)驗(yàn)方法【目的要求】1.掌握細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備所需器材的準(zhǔn)備和滅菌；2.掌握細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基制備的方法和技巧?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．根據(jù)學(xué)生數(shù)量分組，在燒杯內(nèi)融化培養(yǎng)基粉末，并加入適量瓊脂分別制作：肉膏湯培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基（制備兩瓶，一瓶用于下次血平板制備，一瓶用于普通平板制備）。2．傾倒制備肉膏湯管、半固體管、瓊脂斜面管。普通瓊脂培養(yǎng)基傾倒鹽水瓶。3.包裝完畢，將各培養(yǎng)基在高壓蒸汽滅菌器內(nèi)消毒滅菌。備注：每組做一種培養(yǎng)基；每人需肉膏湯培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基各1支（2ml），普通瓊脂斜面1支（3ml），普通瓊脂固體培養(yǎng)基20ml，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)?！緦?shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的接種方法【實(shí)驗(yàn)類型】基本實(shí)驗(yàn)方法【目的要求】掌握細(xì)菌在液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面、普通瓊脂平板上的接種方法?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1．錄像：細(xì)菌的人工培養(yǎng)2.練習(xí)平板分區(qū)劃線接種：空白瓊脂練習(xí)3．制備普通瓊脂平板(小組作)，用自制的液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、瓊脂斜面、普通瓊脂平板分別接種大腸桿菌，枯草桿菌。4.將培養(yǎng)基放于37℃孵箱孵育18-24H。備注：每實(shí)驗(yàn)組接種一種菌。【實(shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌培養(yǎng)物的觀察【實(shí)驗(yàn)類型】基本實(shí)驗(yàn)方法【目的要求】1.掌握細(xì)菌在各種培養(yǎng)基上/中的生長現(xiàn)象，細(xì)菌在瓊脂平板上的菌落的特點(diǎn)；2.掌握革蘭染色方法；3.掌握輔助判定細(xì)菌染色性的方法(拉絲實(shí)驗(yàn))；【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】2學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】平板、斜面、液體、半固體等培養(yǎng)物的觀察，記錄。培養(yǎng)物的革蘭染色鏡檢。拉絲實(shí)驗(yàn)：3%KOH與細(xì)菌混合同時(shí)接種環(huán)拉絲?！緦?shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)四真菌檢驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】經(jīng)典驗(yàn)證型【目的要求】掌握真菌三種菌落形態(tài)；掌握新生隱球菌、白假絲酵母菌的形態(tài)特征；掌握皮膚真菌的形態(tài)特征。【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】錄像：真菌的檢驗(yàn)三種真菌菌落形態(tài)觀察（示教）新型隱球菌墨汁染色圖片形態(tài)觀察（示教）白假絲酵母菌形態(tài)觀察（示教）霉菌涂片觀察：直接壓片法，高倍鏡觀察真菌孢子和菌絲。皮膚真菌的檢察（小組作）?！緦?shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)五細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.掌握細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)K-B法和微孔板稀釋法的操作方法和結(jié)果判斷。2.熟悉細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)的方法和臨床意義；熟悉麥?zhǔn)媳葷峁艿氖褂梅椒?.了解藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制和新方法?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.氏比濁法制備0.5麥?zhǔn)蠞舛鹊慕瘘S色葡萄球菌和大腸埃希菌菌液。2.K-B法測定分別測定青霉素、慶大霉素、新諾明、環(huán)丙沙星四種抗生素對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌的藥物敏感性。3.微孔稀釋法測定慶大霉素對大腸埃希菌的MIC。4.微孔稀釋法測定青霉素對金葡菌的MIC。5.討論藥敏實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制和新方法?！緦?shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)六病原性球菌的檢驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】熟悉病原性球菌的分離鑒定程序及臨床意義；掌握血瓊脂平板的制備方法；掌握3種葡萄球菌、草綠色鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌、淋球菌的形態(tài)特點(diǎn)和鑒定方法；熟悉鑒定細(xì)菌的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】第一次實(shí)驗(yàn)1.錄像：病原性球菌2.制備血瓊脂平板（小組作,每人一個(gè)血平板）3.空白瓊脂練習(xí)分區(qū)劃線。4.金葡、表葡、腐葡、草綠色鏈球菌、化膿性鏈球菌、肺炎鏈球菌血瓊脂平板分區(qū)劃線，培養(yǎng)。肺炎鏈球菌Optochin敏感試驗(yàn)5淋球菌形態(tài)特點(diǎn)觀察（示教片）第二次試驗(yàn)1細(xì)菌菌落觀察，記錄。2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)排列和染色性3.培養(yǎng)物生化試驗(yàn)：觸酶試驗(yàn)(玻片法)，凝固酶實(shí)驗(yàn)（玻片法)，膽汁溶菌試驗(yàn)（平板法）4.葡萄球菌檢驗(yàn)方法討論?！緦?shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)七分枝桿菌的檢驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】掌握結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)與染色性特征；掌握結(jié)核分枝桿菌的菌落特征；掌握肺結(jié)核患者痰標(biāo)本抗酸染色檢查的方法及臨床意義。【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】2學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】1.錄像：結(jié)核病的防治2.肺結(jié)核患者痰標(biāo)本抗酸染色鏡檢3.熱觸酶實(shí)驗(yàn)：濃細(xì)菌懸液置于68℃水浴20分鐘，然后再加H2O2。非結(jié)核分枝桿菌為陽性，有氣泡產(chǎn)生。我增加了一個(gè)熱觸酶實(shí)驗(yàn)，不知可否。我增加了一個(gè)熱觸酶實(shí)驗(yàn)，不知可否。4.結(jié)核分枝桿菌菌落形態(tài)觀察（示教）【實(shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)八腸道桿菌的檢驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】熟悉腸道桿菌的分離鑒定程序及臨床意義；掌握腸道桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)和數(shù)值鑒定方法；掌握鑒定腸道桿菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果分析?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3+2學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】第一次實(shí)驗(yàn)1.錄像：腸道桿菌2.革蘭染色觀察細(xì)菌形態(tài)排列染色性。三節(jié)課，我增加了革蘭染色的內(nèi)容三節(jié)課，我增加了革蘭染色的內(nèi)容3.制備Mac瓊脂平板，SS瓊脂平板。每人倒平板。4.空白瓊脂練習(xí)分區(qū)劃線。4.大腸埃希菌、變形桿菌接種Mac瓊脂平板；乙型副傷寒沙門菌、福氏志賀菌接種SS瓊脂平板第二次實(shí)驗(yàn)1.細(xì)菌培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)；2.培養(yǎng)物涂片革蘭染色顯微鏡觀察細(xì)菌形態(tài)排列和染色性；3.培養(yǎng)物氧化酶試驗(yàn)，KIA、MIU（2人一套），微量生化管接種第三次實(shí)驗(yàn)1.觀察試驗(yàn)結(jié)果，查編碼手冊鑒定；2.沙門菌及志賀菌的血清學(xué)鑒定3.下結(jié)論，練習(xí)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告【實(shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)九非發(fā)酵革蘭陰性菌的檢驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.熟悉非發(fā)酵革蘭陰性菌的分離鑒定程序及臨床意義；2.掌握非發(fā)酵革蘭陰性菌的形態(tài)、生化反應(yīng)特點(diǎn)和數(shù)值鑒定方法；3.掌握鑒定非發(fā)酵革蘭陰性菌生化反應(yīng)試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果分析。【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3+2學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】第一次實(shí)驗(yàn)1.倒普通瓊脂平板，每人一個(gè)。2.銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌增加鮑曼不動(dòng)桿菌接種普通瓊脂平板。增加鮑曼不動(dòng)桿菌第二次實(shí)驗(yàn)1.菌落形態(tài)觀察2培養(yǎng)物涂片革蘭染色鏡檢3培養(yǎng)物氧化酶試驗(yàn)、接種OF培養(yǎng)基，接種微量生化管第三次實(shí)驗(yàn)1觀察試驗(yàn)結(jié)果2查編碼手冊鑒定3出實(shí)驗(yàn)報(bào)告【實(shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)十尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】熟悉尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查的基本程序；掌握尿液標(biāo)本細(xì)菌定量檢查的方法和臨床意義；掌握尿液標(biāo)本細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定的方法和臨床意義?！緦?shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3+2學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】第一次課1.制備普通平板（小組作，實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備培養(yǎng)基，學(xué)生倒平板，每人需一個(gè)平板）2.含金葡、表葡、大腸埃希菌、綠膿桿菌的模擬尿液標(biāo)本直接涂片染色鏡檢。3.尿液標(biāo)本定量接種環(huán)法，定量培養(yǎng)。（接種環(huán)法）4.尿液標(biāo)本傾注平板法三節(jié)課，增加傾注平板法，學(xué)生自己稀釋菌尿液液傾倒。，定量培養(yǎng)。三節(jié)課，增加傾注平板法，學(xué)生自己稀釋菌尿液液傾倒。第二次課1接種環(huán)法和傾注平板法，瓊脂平板上菌落計(jì)數(shù)，比較。2培養(yǎng)物革蘭染色鏡檢3培養(yǎng)物觸媒酶實(shí)驗(yàn)、氧化酶實(shí)驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)4培養(yǎng)物接種KIA、MIU第三次課1培養(yǎng)結(jié)果觀察；2培養(yǎng)物血清學(xué)鑒定3出實(shí)驗(yàn)報(bào)告【實(shí)驗(yàn)分組】2-4人/組實(shí)驗(yàn)十一血液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查【實(shí)驗(yàn)類型】綜合型實(shí)驗(yàn)【目的要求】1.熟悉血液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢查的基本程序；2.掌握血液標(biāo)本細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定的方法和臨床意義。血液標(biāo)本方法和臨床意義；【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】3+3學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】第一次實(shí)驗(yàn)1含金葡菌、肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌、銅綠假單胞菌的模擬已增菌血標(biāo)革蘭染色鏡