益母草中總黃酮的提取與鑒別

益母草中總黃酮的提取與鑒別

益母草是嘴唇科的一種益母草植物，通常為新鮮或干燥的土壤。原名茺蔚,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,別名雞母草、紅花草、坤草、益母艾,屬中藥,其味辛、微苦,性微寒,入心包肝經(jīng)。屬一年或二年生草本,高0.6~1.8m;花冠紅色或淡紅色;小堅(jiān)果褐色,三棱形生于山野荒地、路旁、田埂、河邊,分布于全國各地。益母草全草含生物堿、黃酮、酚類、氨基酸、有機(jī)酸、糖類。藥理研究證明其具有調(diào)經(jīng)止血,保護(hù)心肌缺血再灌注損傷抗血小板聚集,降低血液粘度等作用。在臨床上可用來治療痛經(jīng)、流產(chǎn)后出血、冠心病、心肌缺血、高黏血癥、腎炎水腫、風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛等疾病。益母草具有廣泛的藥理活性。用本方法研究益母草總黃酮的提取及鑒別未見報(bào)道,我們參考文獻(xiàn)對益母草總黃酮的提取及鑒別進(jìn)行了研究。現(xiàn)報(bào)道如下。1設(shè)備和材料1.1真空干燥箱及離心沉淀器UV-755B紫外線分光光度計(jì)(上海分析儀器總廠);DZF——150小型真空恒溫干燥箱(鄭州長城科工貿(mào)易有限公司);80—2離心沉淀器(上海分析器械廠);ZF-I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。1.2材料表面新鮮益母草(采自廣西百色)。95%乙酸AR;甲醇CP;三氯化鋁CP;氨水CP;正丁醇CP,蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國生物制品檢定所)。2方法和結(jié)果2.1工藝路線見圖1。2.2濾渣、乙醇法取干益母草83g,切碎置鋁鍋中,加水煮沸3h。冷卻粗濾后,濾液用高速離心機(jī)分離15min,1500r/min。對濾渣用上述方法進(jìn)行再次浸取2次,合并3次濾液,加熱濃縮(加熱溫度在85℃左右)。濃縮冷卻后加入等體積95%乙醇,放入冰箱內(nèi)2h。用高速離心機(jī)進(jìn)行分離15min,1500r/min。過濾得濾液濾渣,棄去濾渣。對濾液進(jìn)行蒸發(fā)濃縮(加熱溫度在85℃左右)。待乙醇蒸發(fā)完后,將濃液置于真空干燥箱中干燥成疏松固體,粉碎得終產(chǎn)物。2.3定性分析2.3.1抗紫外反應(yīng)取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上,在可見光下呈灰黃色,在紫外光下呈棕色并有熒光斑點(diǎn)。2.3.2氨反應(yīng)取該樣品溶液點(diǎn)在濾紙上,將濾紙?jiān)诎彼戏窖?.5min,立即在紫外光下觀察,呈黃綠色熒光斑點(diǎn)。2.3.3三氯化鋁反應(yīng)取樣品溶液點(diǎn)在濾紙上,滴加1%三氯化鋁乙醇溶液,吹干。在可見光下呈灰黃色,在紫外光下呈黃綠色熒光斑點(diǎn)。2.4黃酮的總含量2.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備2.4.1.乙醇溶液的配制精密稱取蘆丁對照品200mg,置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇溶液并稀釋至刻度,搖勻。精密稱取10ml置于100ml容量瓶中,加入95%乙醇使成100ml,搖勻即得(每1ml含有無水蘆丁0.2mg)。2.4.1.uv-655b-c精密吸取對照品溶液0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0ml分置于50ml容量瓶中,各加95%乙醇12ml,加10%硝酸鈉溶液2.0ml,混勻,放置6min,加10%硝酸鈉2.0ml,放置6min加5%氫氧化鈉試液20ml,最后用95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,以第一瓶為空白溶液,用UV-755B紫外分光光度計(jì),在500nm上測定吸光度。見表1。根據(jù)上表得一回歸方程:A=9.65C-0.0132,r=0.9999(n=6)。2.4.2萃取液的制備精密稱定提取物1.5000g置索氏提取器中,加95%乙醇回流至無色,將提取液置于燒杯中,沸水浴加熱濃縮至干,再用熱水洗滌3次。將洗液濾至分液漏斗中,并加入飽和正丁醇液萃取3次,10ml/次。合并萃取液于小燒杯中,沸水浴蒸干,再加95%乙醇至使之溶解,并移于50ml容量瓶中,再加95%乙醇至刻度,搖勻。精密取10ml于50ml容量瓶中加95%乙醇至刻度搖勻,按標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備操作測定吸光度。A=0.149,據(jù)A=9.65C-0.0132,計(jì)算樣品中總黃酮的含量為0.28%。2.4.3回收實(shí)驗(yàn)精密稱提取物1.2320g,加入蘆丁對照品1.9506g,同前樣品測定方法操作測定吸光度,求出回收率為98.6%。3全物理過程法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明利用本文所提