第2節(jié)第2課時(shí)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

第2課時(shí)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)學(xué)有目標(biāo)——課標(biāo)要求必明記在平時(shí)——核心語(yǔ)句必背1．闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理和用途。2．概述測(cè)定微生物數(shù)量的方法。3．進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。1．選擇培養(yǎng)基是指允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。2．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，因此可用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基分離出能分解尿素的細(xì)菌。3．當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。[主干知識(shí)梳理]一、選擇培養(yǎng)基1．水生棲熱菌的篩選：水生棲熱菌能在

℃的高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下

。2．選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，允許

的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止

微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。70～80不能生存特定種類(lèi)其他種類(lèi)二、微生物的選擇培養(yǎng)1．分解尿素的細(xì)菌的分離分解尿素的細(xì)菌能合成

酶，該酶能催化尿素分解產(chǎn)生

，以此作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。要將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)，培養(yǎng)基的配方設(shè)計(jì)思路是培養(yǎng)基中除含有細(xì)菌必需的

、水、無(wú)機(jī)鹽外，只含有

一種氮源。2．稀釋涂布平板法分離分解尿素的細(xì)菌土壤中細(xì)菌的數(shù)量龐大，要想得到能分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物，必須要對(duì)土樣進(jìn)行

，然后再將菌液

到制備好的

上，操作過(guò)程如下：脲NH3碳源尿素充分稀釋涂布選擇培養(yǎng)基三、微生物的數(shù)量測(cè)定1．稀釋涂布平板法(1)原理：當(dāng)樣品的

足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的

。通過(guò)

，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目

，這是因?yàn)開(kāi)_________________________________________________________。2．顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(1)方法：利用特定的

或

，在顯微鏡下觀察、計(jì)數(shù)。(2)注意問(wèn)題：統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是

和

的總和。稀釋度一個(gè)活菌統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)30～300少當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落細(xì)菌計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)板活菌數(shù)死菌數(shù)[邊角知識(shí)發(fā)掘]結(jié)合教材第17頁(yè)圖1-7及相關(guān)知識(shí)回答下列問(wèn)題：(1)涂布平板的所有操作為什么都應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行？提示：在酒精燈火焰附近存在無(wú)菌區(qū)，在火焰旁操作可以保證無(wú)菌，防止雜菌污染。(2)如圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，某同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成了一片，最可能的原因是什么？應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？提示：最可能的原因是菌液濃度過(guò)高或劃線時(shí)在劃下一區(qū)域前未將接種環(huán)灼燒滅菌；采取的措施是增大稀釋倍數(shù)或每次劃新區(qū)域前先將接種環(huán)灼燒滅菌。[教材問(wèn)題提示]一、思考·討論(教材第16頁(yè))1．設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基，用尿素作為唯一氮源，可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來(lái)。2．這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營(yíng)養(yǎng)成分基本相同。二、探究·實(shí)踐(教材第19頁(yè))1．如果沒(méi)有接種的培養(yǎng)基上沒(méi)有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基沒(méi)有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說(shuō)明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。2．如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30～300的平板，說(shuō)明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。3．如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。2．在用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是什么？提示：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。3．如何從大豆田土壤中分離出固氮微生物？根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，如何篩選出耐酸菌？提示：從大豆田土壤取土樣，利用缺乏氮源的培養(yǎng)基可分離出固氮微生物。可將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，再接種培養(yǎng)，進(jìn)而篩選出耐酸菌。[師說(shuō)重難]一、選擇培養(yǎng)基1．選擇培養(yǎng)的目的：從眾多的微生物中分離所需要的微生物。2．選擇培養(yǎng)微生物的四種方法及其實(shí)例選擇培養(yǎng)原理具體處理分離菌種利用營(yíng)養(yǎng)缺陷選擇培養(yǎng)基進(jìn)行的選擇培養(yǎng)不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物無(wú)氮培養(yǎng)基分離自生固氮微生物利用微生物(目的菌)對(duì)某種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的特殊需求，使該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)成為某類(lèi)微生物的唯一供給者石油作為唯一碳源的培養(yǎng)基分離出能消除石油污染的微生物尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離分解尿素的微生物在完全培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)，利用加入的化學(xué)物質(zhì)抑制部分微生物生長(zhǎng)或利于部分微生物生長(zhǎng)加入青霉素等抗生素分離出酵母菌和霉菌等真菌，同時(shí)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)加入高濃度的食鹽分離金黃色葡萄球菌利用培養(yǎng)條件進(jìn)行的選擇培養(yǎng)在高溫環(huán)境中培養(yǎng)分離耐高溫的微生物將培養(yǎng)基pH調(diào)至較低水平分離耐酸的微生物在無(wú)氧環(huán)境中培養(yǎng)分離厭氧微生物和兼性厭氧微生物續(xù)表二、稀釋涂布平板法1．主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板。2．系列稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示三、平板劃線法與稀釋涂布平板法操作注意事項(xiàng)1．平板劃線法(1)接種環(huán)的灼燒①第一次劃線前：殺死接種環(huán)上的微生物，避免污染培養(yǎng)物。②每次劃線前：殺死殘留菌種，保證每次劃線的菌種來(lái)自上次劃線末端。③劃線結(jié)束后：殺死殘留菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后再進(jìn)行操作，以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時(shí)最后一區(qū)域的劃線不要與第一區(qū)域的劃線相連。(4)劃線時(shí)用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大劃破培養(yǎng)基。2．稀釋涂布平板法(1)稀釋操作時(shí)：每支試管及其中的9mL水、移液管等均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1～2cm處。(2)涂布平板時(shí)①涂布器浸在體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中，取出時(shí)，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。②不要將過(guò)熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管管頭不接觸任何物體。3．兩種純化細(xì)菌方法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)平板劃線法可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較小，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延[在應(yīng)用中悟][典例1]

(2021·山東高考)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周?chē)尸F(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周?chē)蛔兩?，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是 (

)A．甲菌屬于解脂菌B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D．該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力[解析]根據(jù)題干信息“甲菌菌落周?chē)尸F(xiàn)深藍(lán)色”，說(shuō)明甲菌可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；乙菌菌落周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌也可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯(cuò)誤；可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C正確；該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以是菌落周?chē)钏{(lán)色圈的大小，D正確。[答案]

B[典例2]從自然菌樣中篩選較理想生產(chǎn)菌種的一般步驟：采集菌樣→富集培養(yǎng)→純種分離→性能測(cè)定。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從適合的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從________(填“高鹽”或“低鹽”)環(huán)境中采集，培養(yǎng)厭氧菌的菌樣應(yīng)從________(填“有氧”或“無(wú)氧”)環(huán)境中采集。(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適應(yīng)于該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)的特定的環(huán)境條件，使待分離微生物在群落中的數(shù)量大大增加，從而達(dá)到從自然界中分離到所需的特定微生物目的的培養(yǎng)方法。對(duì)嗜鹽菌富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)是________培養(yǎng)基；對(duì)含耐高溫淀粉酶的微生物富集培養(yǎng)應(yīng)選擇______________________的培養(yǎng)基，并在________條件下培養(yǎng)。(3)實(shí)驗(yàn)室最常用的滅菌方法是高溫處理。高溫滅菌的原理是高溫使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等物質(zhì)發(fā)生________。____________滅菌法是微生物研究和教學(xué)中應(yīng)用最廣、效果最好的濕熱滅菌法。(4)純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法分別是_______________、______________。[解析]

(1)在長(zhǎng)期自然選擇的作用下，生物與其生活環(huán)境相適應(yīng)，培養(yǎng)嗜鹽菌的菌樣應(yīng)從高鹽環(huán)境中采集，培養(yǎng)厭氧菌的菌樣應(yīng)從無(wú)氧環(huán)境中采集。(2)對(duì)嗜鹽菌富集培養(yǎng)的培養(yǎng)基應(yīng)是加鹽培養(yǎng)基，對(duì)含耐高溫淀粉酶的微生物富集培養(yǎng)應(yīng)選擇以淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基且在高溫條件下培養(yǎng)。(3)高溫能使蛋白質(zhì)和核酸發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的變性，高壓蒸汽滅菌法是應(yīng)用最廣、效果最好的濕熱滅菌法。(4)純化微生物的兩種接種方法分別是稀釋涂布平板法和平板劃線法。[答案]

(1)高鹽無(wú)氧(2)加鹽以淀粉為唯一碳源高溫(3)變性高壓蒸汽(4)稀釋涂布平板法平板劃線法[在訓(xùn)練中評(píng)]1．下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是 (

)A．可采用干熱滅菌法對(duì)微生物培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌B．測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常用菌落計(jì)數(shù)法C．分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度D．分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一的氮源解析：培養(yǎng)基滅菌通常使用高壓蒸汽滅菌法，而干熱滅菌法通常適用于玻璃器皿、金屬用具等耐高溫且不適合其他滅菌方法的物品，A錯(cuò)誤；單個(gè)微生物在固體培養(yǎng)基上可以形成單菌落，所以測(cè)定土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)目，常采用菌落計(jì)數(shù)法，B正確；土壤中不同的微生物的數(shù)目不同，所以需要采用不同的稀釋度，C正確；分離能分解尿素的細(xì)菌，用的選擇培養(yǎng)基里尿素是唯一的氮源，這樣才能分離出分解尿素的細(xì)菌，D正確。答案：A

2．稀釋涂布平板法是微生物培養(yǎng)的一種常用的接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

(

)A．操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋B．不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落C．需將不同稀釋濃度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面D．操作過(guò)程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理解析：稀釋涂布平板法的操作中需要將菌液進(jìn)行一系列的濃度梯度稀釋?zhuān)?dāng)稀釋度足夠高時(shí)，可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，若稀釋度不夠高，細(xì)胞聚集在一起，得不到單個(gè)的菌落，A正確，B錯(cuò)誤；需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面，C正確；操作過(guò)程中對(duì)培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理，以防雜菌污染，D正確。答案：B

3．稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法對(duì)微生物計(jì)數(shù)產(chǎn)生的實(shí)驗(yàn)誤差如何？試分析原因。提示：稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)的值比實(shí)際值小，原因是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落；顯微計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)的結(jié)果比實(shí)際值大，原因是顯微鏡下無(wú)法區(qū)分細(xì)胞的死活，計(jì)數(shù)時(shí)包括了死細(xì)胞。[師說(shuō)重難]

一、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離實(shí)驗(yàn)1．整體思路篩選土壤中分解尿素的微生物的基本過(guò)程：先將土壤樣品稀釋液接種在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，再挑取選擇培養(yǎng)基上形成的單菌落接種到加入酚紅指示劑的鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng)，鑒別該菌株是否能產(chǎn)生脲酶。理論上，以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基能夠篩選出分解尿素的微生物；但實(shí)際上固氮微生物、以尿素分解產(chǎn)物(氨)為氮源的微生物也可以在該培養(yǎng)基上生存；因此選擇培養(yǎng)基上的菌落不一定是分解尿素的微生物，挑取單菌落后仍需進(jìn)一步鑒別。2．結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論有無(wú)雜菌污染的判斷用于對(duì)照的空白培養(yǎng)基中無(wú)菌落生長(zhǎng)培養(yǎng)基制備過(guò)程中未被雜菌污染接種過(guò)的培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高，菌種的菌落形態(tài)多樣接種操作等過(guò)程中被雜菌污染選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作某稀釋度下得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30～300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近。若結(jié)果相差太遠(yuǎn)，則需要從各項(xiàng)操作過(guò)程中去分析、尋找可能的原因二、微生物計(jì)數(shù)的方法微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，但是一般使用計(jì)數(shù)法，計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法。二者的比較如下表所示：項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，再計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上的菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的是活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝每小格平均菌體數(shù)×400×10000×稀釋倍數(shù)每毫升原液含菌數(shù)＝培養(yǎng)基上平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)÷涂布液體積續(xù)表[在應(yīng)用中悟][典例1]用稀釋涂布平板法測(cè)定某一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是

(

)A．涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是212、240和250，取平均值234[解析]

在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要至少涂布3個(gè)平板作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，A、B錯(cuò)誤。C項(xiàng)雖然涂布了3個(gè)平板，但其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與其他的相差太遠(yuǎn)，說(shuō)明在操作過(guò)程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，此時(shí)，不能簡(jiǎn)單地用3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值來(lái)求平均值，C錯(cuò)誤，D正確。[答案]

D[典例2]下圖為土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中樣品稀釋示意圖。據(jù)圖分析，下列敘述正確的是 (

)A．3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為103倍B．4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)恰好為5號(hào)試管的10倍C．5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為1.7×109個(gè)D．該實(shí)驗(yàn)方法統(tǒng)計(jì)得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目要多[解析]分析題圖可知，3號(hào)試管的稀釋倍數(shù)為104倍，A錯(cuò)誤；4號(hào)試管中稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)得到的菌落平均數(shù)不一定恰好為5號(hào)試管的10倍，B錯(cuò)誤；5號(hào)試管的結(jié)果表明每克土壤中的菌株數(shù)為(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109(個(gè))，C正確；在固體培養(yǎng)基上可能存在兩個(gè)或多個(gè)菌體形成一個(gè)菌落的情況，因此用稀釋涂布平板法得到的結(jié)果往往會(huì)比實(shí)際活菌數(shù)目少，D錯(cuò)誤。[答案]

C[名師點(diǎn)睛]用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)微生物的方法(1)稀釋涂布平板操作要求：按照平行重復(fù)原則，同一稀釋度下的菌液應(yīng)涂布3個(gè)或3個(gè)以上的平板。(2)計(jì)數(shù)的時(shí)機(jī)：當(dāng)各平板上菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)選擇可用于計(jì)數(shù)的平板：選擇菌落數(shù)在30～300的平板(相同稀釋度的平板均符合該特點(diǎn))進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后取平均值。(4)每克樣品中的菌株數(shù)＝某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)÷涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積×稀釋倍數(shù)。[在訓(xùn)練中評(píng)]1．某種物質(zhì)X(一種含有C、H、O、N的有機(jī)物)難以降解，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解X。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解X的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無(wú)機(jī)鹽、水和X，乙的組分為無(wú)機(jī)鹽、水、X和Y。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是

(

)解析：分析題干信息可知，物質(zhì)X為含有C、H、O、N的有機(jī)物，甲、乙培養(yǎng)基除含無(wú)機(jī)鹽，水外均含有機(jī)物X，故其屬于選擇培養(yǎng)基，乙培養(yǎng)基組分中除了X外，還加入了Y物質(zhì)瓊脂，從而獲得固體培養(yǎng)基，A正確；若要篩選高效降解X的細(xì)菌菌株，需要甲、乙培養(yǎng)基中的X是唯一提供碳源的有機(jī)物，B正確；步驟⑤中自變量是挑取的不同菌落，各培養(yǎng)瓶中X溶液的濃度應(yīng)該是一致的，C錯(cuò)誤；步驟⑤的篩選過(guò)程中，若培養(yǎng)基中的X濃度過(guò)高，則會(huì)導(dǎo)致菌體失水進(jìn)而影響菌體的正常生長(zhǎng)，因此某菌株對(duì)X的降解量可能下降，D正確。答案：C

2．某興趣小組在校園土壤中取樣，進(jìn)行“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)。小明從稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中篩選出約120個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是 (

)A．小明出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是和其他同學(xué)取樣的土壤不同B．要驗(yàn)證培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)C．當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，可能由于菌落重疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小D．在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可初步鑒定尿素分解菌解析：小明篩選出的菌落數(shù)明顯比其他同學(xué)多，出現(xiàn)這種結(jié)果的可能原因是他和其他同學(xué)取樣的土壤不同，也有可能是培養(yǎng)基混入其他氮源或培養(yǎng)基被污染，A正確；要驗(yàn)證培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)，即進(jìn)行空白對(duì)照，觀察培養(yǎng)基中有無(wú)菌落出現(xiàn)，B正確；當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌可能會(huì)連在一起，培養(yǎng)基上看到的只是一個(gè)菌落，可能會(huì)出現(xiàn)菌落重疊而導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小，C正確；在尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若培養(yǎng)基變紅色，可初步鑒定尿素分解菌，D錯(cuò)誤。答案：D

科學(xué)思維——比較平板劃線法和稀釋涂布平板法比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法純化原理通過(guò)連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尦潭鹊木悍謩e涂布到固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)，以形成單細(xì)胞菌落(標(biāo)準(zhǔn)菌落)接種工具接種環(huán)涂布器單細(xì)胞菌落的獲得單細(xì)胞菌落從最后劃線的區(qū)域挑取只有合適的稀釋度，才能得到單細(xì)胞菌落用途分離純化菌種，獲得單細(xì)胞菌落分離純化菌種，獲得單細(xì)胞菌落；②用于計(jì)數(shù)操作難易程度操作較簡(jiǎn)便，細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，細(xì)菌逐步分散開(kāi)操作比較復(fù)雜，需將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋和涂布培養(yǎng)，需涂布多個(gè)平板接種效果圖共同點(diǎn)①都能分離純化菌種；②都是在固體培養(yǎng)基上進(jìn)行的；③都需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行接種續(xù)表[素養(yǎng)評(píng)價(jià)]1．關(guān)于稀釋涂布平板法和平板劃線法的操作過(guò)程，下列敘述錯(cuò)誤的是 (

)A．稀釋涂布平板法中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能蘸取菌液B．為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每個(gè)稀釋度的菌液一般涂布3個(gè)平板C．采用平板劃線法的培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D．平板劃線法中連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端解析：稀釋涂布平板法中涂布前要將涂布器灼燒，其目的是殺死其他雜菌，冷卻后才能蘸取菌液，是為了避免涂布器溫度太高，殺死菌種，A正確；為保證結(jié)果準(zhǔn)確，降低偶然誤差，每個(gè)稀釋度的菌液一般涂布3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，B正確；采用平板劃線法的培養(yǎng)皿中所得的菌落可能會(huì)因?yàn)椴僮鬟^(guò)程中雜菌污染或菌液不純而不符合要求，C錯(cuò)誤；平板劃線法中的連續(xù)劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，是因?yàn)閯澗€后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次劃線從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落，D正確。答案：C

2．下列關(guān)于倒平板、平板劃線法和稀釋涂布平板法的敘述，正確的是 (

)A．倒平板時(shí)將培養(yǎng)皿打開(kāi)，培養(yǎng)皿皿蓋倒放在桌子上B．平板劃線法除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的劃線可以不用滅菌C．應(yīng)用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)的估計(jì)值比實(shí)際值偏大D．與平板劃線法相比，稀釋涂布平板法形成單菌落的效果更好解析：倒平板時(shí)不能把培養(yǎng)皿皿蓋完全打開(kāi)并放到桌面上，這樣會(huì)污染培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，A錯(cuò)誤；除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的每一次劃線前也要將接種環(huán)進(jìn)行灼燒滅菌，目的是將上次劃線結(jié)束后殘留的細(xì)菌殺死，確保以后的劃線接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，使細(xì)菌盡快分散成單個(gè)，B錯(cuò)誤；應(yīng)用稀釋涂布平板法對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)的估計(jì)值比實(shí)際值偏小，因?yàn)榭赡軙?huì)有兩個(gè)或多個(gè)微生物連在一起長(zhǎng)成一個(gè)菌落，C錯(cuò)誤；與平板劃線法相比，稀釋涂布平板法分離得到單菌落的效果更好，D正確。答案：D

3．為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)通常培養(yǎng)基采用________________法滅菌；在制備固體培養(yǎng)基的倒平板操作時(shí)，待平板冷卻至________左右時(shí)，應(yīng)將平板倒過(guò)來(lái)放置，這樣做的目的是_________________。(2)該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是_____________________________；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液