中藥鑒別的歷史發(fā)展

中藥鑒別的歷史發(fā)展

中醫(yī)藥是中國(guó)人民幾千年來(lái)疾病防控過(guò)程中積累的寶貴財(cái)富。從中藥用于人們防病治病開(kāi)始,中藥的真?zhèn)螁?wèn)題便隨之而產(chǎn)生,中藥鑒別的方法、技術(shù)和理論也隨之經(jīng)歷了一個(gè)形成、發(fā)展、不斷完善和不斷提高的過(guò)程。尤其是在當(dāng)前中藥正面臨走向世界和實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的新形勢(shì)下,加強(qiáng)中藥的鑒別研究乃是確保中藥原藥材和制劑質(zhì)量可靠,確保中藥現(xiàn)代化及其它各項(xiàng)研究工作順利進(jìn)行的首要環(huán)節(jié)。下面就我國(guó)中藥鑒別研究的發(fā)展和現(xiàn)代鑒別技術(shù)作簡(jiǎn)單介紹。1相關(guān)學(xué)科不斷發(fā)展的是一個(gè)不斷發(fā)展的過(guò)程,一個(gè)過(guò)程是一個(gè)過(guò)程,一個(gè)過(guò)程一個(gè)過(guò)程,一個(gè)過(guò)程一個(gè)過(guò)程,一個(gè)過(guò)程中藥鑒別研究的發(fā)展是隨著中藥事業(yè)的不斷發(fā)展,隨著相關(guān)學(xué)科的不斷發(fā)展而經(jīng)歷一個(gè)由簡(jiǎn)單到復(fù)雜,由主觀到客觀,由淺顯到深入、全面綜合的過(guò)程。1.1中藥鑒別類(lèi)著作這是中藥的形成和發(fā)展期,自最早的《神農(nóng)本草經(jīng)》至清朝的《植物名實(shí)圖考長(zhǎng)編》,每一部本草均有大量關(guān)于中藥鑒別的記載,其中宋朝蘇頌的《圖經(jīng)本草》,明朝陳嘉謨的《本草蒙筌》、李時(shí)珍的《本草綱目》、李中立的《本草原始》,清朝鄭天巖的《偽藥條辨》等著作更是重視中藥鑒別的佳作。這一階段的鑒別研究特點(diǎn)是以人的經(jīng)驗(yàn)鑒別為主,即以藥材的形狀、大小、顏色、氣、味、表面特征、質(zhì)地、斷面等判別藥材的真?zhèn)?對(duì)部分藥材,還輔以簡(jiǎn)單的理化試驗(yàn),如火燒試驗(yàn)、沉水試驗(yàn)等多種方法,具體敘述如下:1.1.1雞骨多肽產(chǎn)品目錄2利用外觀包括形狀、大小、顏色、質(zhì)地、表面特征、氣味等作為鑒別藥材的依據(jù),這是最常用的鑒別方法。(1)形狀:如鑒別太子參(RadixPseudostellariae),李時(shí)珍謂:“其形似人形者,謂之孩兒參”。鑒別川烏(RadixAconiti),吳普謂:“烏頭,形如鳥(niǎo)之頭也”。(2)大小:蘇頌謂大黃(RadixetRhizomaRhei):“大干乃佳……根如芋,大者如碗,長(zhǎng)一二尺”。蘇恭謂白頭翁(RadixPulsatillae):“實(shí)大者如雞子,白毛寸余”。(3)顏色:鑒別白芍(RadixPaeoniaeAlba)時(shí),馬志謂:“有赤、白兩種,其花亦有赤白二色”。《名醫(yī)別錄》載黃連(RhizomaCoptidis):“其連珠而色黃,故名”。李時(shí)珍謂阿膠(CollaCoriiAsini):“當(dāng)似黃透如琥珀色,或光黑如瑿醫(yī)漆者為真”。(4)質(zhì)地:《神農(nóng)本草經(jīng)》載常山(RadixDichroae):“細(xì)實(shí)黃者,呼為雞骨常山,用之最勝”。(5)氣味:鑒別蓽茇(FructusPiperisLongi),李時(shí)珍謂:“氣味正如胡椒”。對(duì)于魚(yú)腥草(HerbaHouttuyniae),李時(shí)珍又謂:“其葉腥氣,故俗呼為魚(yú)腥草”。1.1.2刮指評(píng)估利用手指甲刮刻藥材以進(jìn)行鑒定,如對(duì)于海螵蛸(OsSeplae)的鑒別,李時(shí)珍謂:“兩頭尖,,……”。1.1.3透甲黃的鑒別利用藥材在指甲上所染的顏色對(duì)藥材進(jìn)行鑒定。如對(duì)于牛黃(CalculusBovis)的鑒別,蘇頌謂:“然人多偽之,試法但揩摩手指甲上,透甲黃者為真”。這是最早的“掛甲試驗(yàn)”記錄。1.1.4照明試驗(yàn)方法1.1.5謂蟲(chóng)、事物紋對(duì)肉豆蔻(SemenMyristicae)的鑒別,李時(shí)珍謂:“外有皺紋,而內(nèi)有斑纈,紋如檳榔紋”《本草匯編》謂蟲(chóng)白蠟(CeraChinensis):“碎之,紋理如白石膏而瑩徹”。蘇頌謂木瓜(FructusChaenomelis):“始實(shí)成則鏃紙花粘于上,夜露日烘,漸變紅,花紋如生”。蘇頌謂大黃(RadixetRhizomaRhei):“以蜀川錦紋者佳”。1.1.6青莎、熊膽的鑒別對(duì)郁金(RadixCurcumae)的鑒別,李時(shí)珍謂:“人以浸水染色,亦微有香氣”。對(duì)于不同質(zhì)的乳香(Olibanum)的鑒別,李時(shí)珍謂:“次為水濕塌,水漬色敗氣變者”;對(duì)于青黛(IndigoNaturalis)的鑒別,李時(shí)珍又謂:“以藍(lán)浸水一宿,入石灰攪至干下,澄去水,則青黑色”?！短票静荨份d熊膽(FelUrsi)的鑒別:“然多偽者,但取一粟許滴水中,一道若線不散者為真”;李時(shí)珍謂:“熊膽佳者通明。每以米粒點(diǎn)水中,運(yùn)轉(zhuǎn)如飛者良。余膽亦轉(zhuǎn),但緩爾”?！睹t(yī)別錄》載寒水石(Calcitum,GypsumRubrum):“折片投水中,與水同色,其水凝動(dòng)”。1.1.7香港特區(qū)liagumaquelilihae利用藥材在水中的沉降性質(zhì)來(lái)進(jìn)行鑒定。沈懷遠(yuǎn)《南越志》載沉香(LignumAquilariaeResinatum)云:“堅(jiān)黑沉水者,即沉香也。半浮半沉與水面平者,為雞骨香。細(xì)枝堅(jiān)實(shí)未爛者,為清桂香”。1.1.8對(duì)大血藤、指牛的鑒別用酒來(lái)浸泡藥材,觀察顏色等來(lái)進(jìn)行鑒定。如對(duì)于大血藤(CaulisSargentodoxae)的鑒別,吳其浚的《植物名實(shí)圖考》載:“酒浸—宿紅艷如血”。1.1.9粗廉之家民硝李時(shí)珍謂芒硝(NatriiSulfas):“生于鹽鹵之地,狀似末鹽……煎煉入盆,凝結(jié)在下粗樸者為樸硝,在上有芒者為芒硝,有牙者為馬牙硝”?！睹t(yī)別錄》載寒水石(Calcitum,CypsumRubrum):“研末,煮湯入瓶,倒懸井底,即成凌冰”。1.1.1信石、石膏、gypsumfibrom《海藥本草》載降香(LignidalbergiaeOdoriferae):“其香似蘇方木,燒之初不甚香,得諸香和之則特美”。對(duì)蜂蜜(Mel)的鑒別,李時(shí)珍謂:“凡試蜜以燒紅火箸插入,提出起氣是真,起煙是偽”。對(duì)于信石(ArsenicumSublimatum)的鑒別,蘇頌謂:“將生砒就置火上,以器覆之,令煙上飛,著器凝結(jié),累然下垂如乳尖者入藥為勝”。對(duì)于石膏(GypsumFibrosum)的鑒別,李時(shí)珍謂:“石膏有軟硬二種。軟石膏……松軟易碎,燒之即白爛如粉”。吳普謂硫磺(Sulfur):“燒令有紫焰”。《神農(nóng)本草經(jīng)》載硝石(NatriiSulfas):“以火燒之,紫青煙起”。陶弘景謂琥珀(Succiinum):“燒之亦作松氣”?！短票静荨分^蘇合香(Styrax):“燒之灰白者好”。1.1.11.焊接試驗(yàn)《本草匯編》載蟲(chóng)白蠟(CeraChinensis):“以水煮熔,慮置冷水中,則凝聚成塊亦”。1.1.12-識(shí)別標(biāo)記1.1.13.聲音識(shí)別對(duì)于浮海石(Pumex)的鑒別,《本草衍義》謂:“以指撩之,錚錚有聲,此石花(浮海石)也”。1.1.14.摩擦和靜脈識(shí)別1.1.1便枝的傳統(tǒng)“去青色”觀對(duì)于秦皮(CortexFraxini)的鑒別,蘇恭謂:“取皮漬水便碧色,書(shū)紙看之皆青色者,是真”。此為歷史上最早觀察熒光現(xiàn)象應(yīng)用于鑒別藥材的記載。而歐美直到十九世紀(jì)中葉以后才開(kāi)始注意熒光現(xiàn)象的應(yīng)用,比我國(guó)遲了1200年。1.1.16使用粘合劑絲識(shí)別1.1.17次打擊1.21化學(xué)鑒別法的初創(chuàng)期1838年法國(guó)學(xué)者Schleiden闡明了細(xì)胞是植物體構(gòu)造的基本單位以后,顯微鏡就被用來(lái)研究生藥的內(nèi)部構(gòu)造,根據(jù)顯微構(gòu)造的不同來(lái)鑒別各種生藥。1857年Schleiden發(fā)表了“GrundnissderPharmakognosiedesPflanzenreiches”(《植物性生藥學(xué)基礎(chǔ)》)一書(shū),其中描述了許多植物性生藥的顯微構(gòu)造,其后Berg于1865年,Vogl于1887年先后發(fā)表了生藥解剖圖譜,于是利用顯微鏡來(lái)鑒定中藥的方法得到了進(jìn)一步的發(fā)展而成為生藥鑒定的重要手段之一年趙遹黃徐伯軻等編著了我國(guó)第一部介紹近代中藥學(xué)的著作現(xiàn)代本草學(xué)—生藥學(xué)》上冊(cè),1937年葉三多編著《生藥學(xué)》下冊(cè),這兩本書(shū)首次將顯微鑒別技術(shù)介紹到我國(guó),并很快在國(guó)內(nèi)推廣和不斷完善成為中藥鑒別的重要手段。18世紀(jì)中葉瑞典博物學(xué)家林奈(CarlLinnaeus)在他的三部著作《自然系統(tǒng)》、《植物志屬》和《植物種志》中記述了大量的植物的種和屬的特征,創(chuàng)立了一個(gè)完整的植物分類(lèi)系統(tǒng)和植物的科學(xué)命名法(即林奈雙名法)。此后植物自然分類(lèi)系統(tǒng)不斷完善,1859年達(dá)爾文(CharlesRobertDarwin)《物種起源》的發(fā)表,更加推動(dòng)了植物親緣關(guān)系的研究和建立更完善的植物自然分類(lèi)系統(tǒng)。目前較有影響的植物自然分類(lèi)系統(tǒng)有Engler系統(tǒng)和Hutchinson系統(tǒng)。本世紀(jì)30年代趙遹黃等學(xué)者利用現(xiàn)代植物分類(lèi)學(xué)的知識(shí),對(duì)本草進(jìn)行研究整理,為我國(guó)中藥學(xué)基原鑒定打下了良好的基礎(chǔ)。此后裴鑒的《中國(guó)藥用植物志》第一冊(cè)(1939年),王聲道的《藥用植物圖考》,沈嘉微的《中國(guó)藥物形態(tài)學(xué)》,顧學(xué)裘的《生藥學(xué)》,李承祜的《藥用植物學(xué)》等均是應(yīng)用現(xiàn)代植物解剖學(xué)植物分類(lèi)學(xué),中藥學(xué)的知識(shí)對(duì)本草進(jìn)行整理研究的佳作。1803年法國(guó)Derosne等在天然藥物中發(fā)現(xiàn)了生物堿成分,1806年德國(guó)學(xué)者Sertǜner從阿片中提出了嗎啡純堿,此后開(kāi)始了生藥有效成分的研究。利用生藥中所含的化學(xué)成分的某些理化性質(zhì)進(jìn)行鑒別也是在這個(gè)時(shí)期發(fā)展起來(lái)的。1933年丁福保先生著《中藥淺說(shuō)》,首次引進(jìn)化學(xué)鑒別法,從而促進(jìn)了化學(xué)鑒別法在中藥鑒別中的應(yīng)用。由于中藥中的有效成分是其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ),因此通過(guò)有效成分的鑒別將直接和藥效相關(guān),化學(xué)鑒別法不但能辨明中藥材的真?zhèn)?還能區(qū)分優(yōu)劣,故化學(xué)鑒別法很快在中藥鑒別中占有一席之地。這個(gè)時(shí)期,由于物理學(xué)、生物學(xué)等相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,使比重、旋光度、折光率、熒光分析和色層分析等方法相繼引入中藥鑒別中,奠定了中藥理化鑒別的基礎(chǔ)。至本世紀(jì)50年代,中藥鑒別研究中較為全面的“四大鑒別法”已確立起來(lái),并為1953年的藥典所采用,為確保中藥質(zhì)量起到了十分重要的作用。下面詳細(xì)介紹基原鑒別、性狀鑒別、顯微鑒別和理化鑒別方法的內(nèi)容和應(yīng)用。1.2.1基本起源標(biāo)記即中藥的原植(動(dòng))物鑒定,是應(yīng)用生物分類(lèi)學(xué)的知識(shí)和方法,鑒定每一種中藥的生物學(xué)來(lái)源,確定其正確的學(xué)名,這是中藥鑒定工作的基礎(chǔ)。1.2.2中藥、飲片鑒別法性狀鑒別就是運(yùn)用看、摸、聞、嘗及水試、火試等直觀的方法,對(duì)中藥的性狀,包括形狀、大小、色澤、表面、質(zhì)地、斷面、氣味等特征進(jìn)行觀察作為鑒別的依據(jù),它是我國(guó)中醫(yī)藥工作者長(zhǎng)期積累的豐富經(jīng)驗(yàn)的總結(jié),具有簡(jiǎn)單、快速、直觀的優(yōu)點(diǎn)。性狀鑒別主要是觀察完整的中藥及飲片。水試法是利用中藥在水中發(fā)生浮沉溶解、顏色變化、透明度、味甜辣、膨脹度、旋轉(zhuǎn)性、粘性、酸堿變化等現(xiàn)象進(jìn)行鑒別;火試法是利用中藥受火燃燒后發(fā)生的顏色、煙霧、響聲、膨脹、熔融聚散等現(xiàn)象進(jìn)行鑒別,如紅花浸入水中,水變金黃花不褪色,蘇木投熱水中,水顯鮮艷的桃紅色。1.2.3顯微觀察方法顯微鑒別是利用顯微鏡來(lái)觀察藥材的組織構(gòu)造,細(xì)胞形狀以及內(nèi)含物的特征,用以鑒定藥材真?zhèn)巍⒓兌壬踔疗焚|(zhì)。通常應(yīng)用于單憑性狀不易識(shí)別的藥材、破碎藥材、粉末藥材以及丸、散、膏、丹等中藥成方制劑。顯微觀察主要包括橫切片或縱切片觀察、表面片觀察、粉末觀察、解離組織觀察、顯微測(cè)定、偏振光顯微鏡觀察等幾個(gè)方面。中藥丸、散、膏、丹等成方制劑,大多直接用各種中藥粉末配制而成,因此可應(yīng)用粉末鑒定的方法進(jìn)行鑒定;用藥材浸膏制備的濃縮丸劑、片劑、顆粒劑、沖劑等,因浸膏中殘留有藥材的細(xì)胞、組織碎片及其它微細(xì)特征,顯微鑒定對(duì)此也有一定的應(yīng)用價(jià)值。鑒定時(shí),根據(jù)處方和顯微觀察,選取足以說(shuō)明在成藥中是該藥所專(zhuān)有的特征,作為鑒別依據(jù)。1.2.4化學(xué)成分鑒定是利用中藥所含化學(xué)成分的某些物理性質(zhì)或化學(xué)反應(yīng)對(duì)中藥進(jìn)行定性和定量分析,一般應(yīng)用于含不同化學(xué)成分的性狀相似而又無(wú)明顯顯微鑒別特征的藥材。樹(shù)脂類(lèi)中藥,雖來(lái)源于植物,但由于多取其分泌物或經(jīng)加工提取的產(chǎn)物,故有關(guān)植物的組織特征多已不存在,所以顯微鑒別和原植物鑒別不適用,而理化方法則是鑒別這類(lèi)藥材的理想方法。1.32中藥鑒別是一種豐富的、可擴(kuò)張性的中藥鑒別方法,主要體現(xiàn)在20世紀(jì)20世紀(jì)20世紀(jì)20年代中期、20世紀(jì)20世紀(jì)40年代中期的中國(guó)規(guī)劃設(shè)計(jì)、20世紀(jì)20世紀(jì)2020世紀(jì)的中國(guó)鑒定”中,有利于中藥走向世界在堪稱(chēng)知識(shí)爆炸的年代,由于物理、化學(xué)、生物學(xué)和計(jì)算機(jī)的加速發(fā)展使儀器分析的手段不斷更新,紫外、紅外、氣相、高效液相、核磁共振、掃描電子顯微鏡、計(jì)算機(jī)圖像分析、各種電泳、同功酶分析法、分子生物學(xué)技術(shù)、X射線衍射技術(shù)、差熱分析技術(shù)、聚類(lèi)分析法等均被吸收到中藥鑒別的方法中,大大豐富了中藥鑒別的內(nèi)容,形成了以“四大鑒別法”為基礎(chǔ)、以理化分析為重點(diǎn)、逐步適應(yīng)中藥現(xiàn)代化并有利于中藥走向世界的一套更為科學(xué)、完善、先進(jìn)的中藥鑒別體系。2現(xiàn)代評(píng)估方法的介紹2.1中藥鑒別色譜法是在20世紀(jì)初產(chǎn)生,于60年代開(kāi)始用于中藥分析,經(jīng)逐步完善最后列入1977年版中國(guó)藥典,且在以后各版藥典的中藥和成方制劑中的應(yīng)用比例迅速上升,成為中藥鑒別最主要的方法之一。色譜法根據(jù)離方法分為:紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法。2.1.1薄層層析分離法此法具有快速、經(jīng)濟(jì)、可靠、操作簡(jiǎn)單、適用范圍廣、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn),為國(guó)內(nèi)外學(xué)者最快接受和廣為應(yīng)用是理所當(dāng)然的。在中藥新藥研制中,幾乎所有的新藥都必須提供薄層層析譜,并需附有標(biāo)準(zhǔn)品或陰陽(yáng)藥材對(duì)照的彩色照片。在實(shí)際的薄層層析鑒別中,有時(shí)因中藥的成分性質(zhì)相近而難以分開(kāi)時(shí),還可采用高效薄層層析法(HPTLC)。該方法是采用更細(xì)更勻的吸附劑,因而提高了分離效果,使斑點(diǎn)小而圓,重現(xiàn)性增強(qiáng)。同時(shí)點(diǎn)樣量也可減少到0.1μl以下,使原點(diǎn)直徑控制在1mm內(nèi),展開(kāi)時(shí)間縮短,展距縮小(3～7cm/10～15min),達(dá)到微量、快速和高效的目的。為使薄層層析的結(jié)果更為直觀,可將經(jīng)溶劑展開(kāi)的薄層板置薄層掃描儀上作可見(jiàn)光-紫外光測(cè)定或熒光測(cè)定。這種用固定波長(zhǎng)對(duì)薄層展開(kāi)的各斑點(diǎn)作薄層掃描,以鑒別藥材的方法稱(chēng)為薄層掃描法(TLCS)。本法所得圖譜比目測(cè)的層折圖譜更為客觀準(zhǔn)確,因而具有更好的鑒別意義。如李信炯用此法進(jìn)行數(shù)種黃連(RhizomaCoptidis)的生物堿的薄層掃描時(shí)發(fā)現(xiàn)云連中不含有表小檗堿和非洲防己堿,可資鑒別。2.1.2在南、北藥中的應(yīng)用HPLC法由于具有分離效能高,分析速度快等優(yōu)點(diǎn),近期已廣為普及用于中藥的定量分析,在中藥的定性鑒別中亦能發(fā)揮很好的作用,如童玉懿等用此法對(duì)我國(guó)主要產(chǎn)區(qū)的南北五味子中的木質(zhì)素作了定性分析,結(jié)果表明,南、北五味子的高效液相圖譜有明顯的區(qū)別。用此法進(jìn)行中藥鑒別時(shí),為不使層析柱被中藥粗提液中大量的雜質(zhì)成分污染而損壞,必須在進(jìn)樣前對(duì)提取液進(jìn)行去除雜質(zhì)、保留待測(cè)的一類(lèi)成分的預(yù)處理,這一操作必須化費(fèi)較多的分析時(shí)間,這一缺點(diǎn)是導(dǎo)致此法較少用于定性分析的主要原因。2.1.3gc/ms定性鑒定氣相色譜法以氣體為流動(dòng)相,具有高效、高選擇性、高靈敏度、用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn),對(duì)于一些具有揮發(fā)性成分的中藥的鑒別,GC能發(fā)揮獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。如將氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS),將經(jīng)氣相分離的成分直接輸入質(zhì)譜儀進(jìn)行定性鑒定,這樣不但可知道不同中藥中揮發(fā)性成分的差別,尚可知道兩者相同或相差的成分名稱(chēng)。如歸氏等通過(guò)GC/MS分析,得砂仁(FructusAmomi)偽品華山姜所含樟腦、乙酸龍腦酯僅為正品的1/10,山姜不含此2種成分,含1,8--桉油素高達(dá)48%,以此可將三者相區(qū)別。GC和GC/MS用于中藥鑒定時(shí),特別要考慮到含揮發(fā)性成分中藥取樣的影響因素,以便使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更為穩(wěn)定可靠。2.2光譜法選擇某一波段波長(zhǎng),以此通過(guò)中藥的粉末或提取液,測(cè)定中藥對(duì)這一波段波長(zhǎng)的吸收并記錄其吸收光譜,此為光譜鑒別中藥的原理。2.2.1紫外光譜法該法是依據(jù)中藥中一些含有不飽和結(jié)構(gòu)的成分對(duì)紫外光(通常是200～350nm)有吸收而用于鑒別。由于不同中藥所含成分的不飽和程度有差異,因而導(dǎo)致其紫外吸收曲線的形態(tài)、峰位、峰強(qiáng)度亦有差異而以此達(dá)到鑒別的目的。高文博用此法對(duì)天麻(RhizomaGastrodiae)、大黃(RadixetRhizomaRhei)及其偽品進(jìn)行鑒別獲得了滿(mǎn)意的結(jié)果。由于許多中藥均有不飽和成分,且紫外光譜鑒別法具有操作簡(jiǎn)單、快速、重現(xiàn)性好、用量少等優(yōu)點(diǎn),故目前應(yīng)用十分廣泛。多溶劑紫外光譜法:在使用紫外光譜鑒別中藥時(shí)發(fā)現(xiàn),一些親緣關(guān)系較近的藥材,由于成分相差不大,用通常的紫外光譜法難以達(dá)到鑒別的目的,則可采用多溶劑紫外光譜法,即分別檢測(cè)數(shù)種不同極性溶劑提取液的紫外吸收,通過(guò)綜合比較其圖譜的差異,亦可獲得較好的鑒別效果。張振秋等采用水、乙醇、氯仿、石油醚等四種溶劑鑒別蟬蛻(Pe-riostracumCicadae)等蟲(chóng)類(lèi)藥材,郭澄用多溶劑紫外光譜法鑒別七種菟絲子(SemenCuscutae),結(jié)果均較理想。2.2.2導(dǎo)數(shù)光譜法比色法對(duì)于通常的紫外光譜法較難區(qū)別的檢品,可采用對(duì)其吸收光譜(原函數(shù))的一階、二階、三階等導(dǎo)函數(shù)的圖像(即導(dǎo)數(shù)光譜圖)進(jìn)行比較,本法可消除樣品中的一些無(wú)關(guān)吸收,排除原圖譜中的某些干擾,從而達(dá)到較好的鑒別效果。導(dǎo)數(shù)光譜法具有簡(jiǎn)易、快速和準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn),它不但適用于紫外光譜,也可應(yīng)用于可見(jiàn)光的吸收光譜。李同芬應(yīng)用此法對(duì)銀柴胡(RadixStellariae)及其混淆品進(jìn)行鑒別,結(jié)果理想。2.2.3紅外圖譜測(cè)定法紅外光譜屬于分子吸收光譜。中藥的紅外光譜圖反映的是被測(cè)中藥所含組分在紅外光區(qū)域內(nèi)(通常使用4000cm-1～666cm-1),總體官能團(tuán)吸收的疊加。實(shí)驗(yàn)采取對(duì)藥材檢品粉末或提取物直接壓片測(cè)定其紅外光譜,比較其差異而達(dá)到鑒別的目的。本法在中藥鑒別中具有制樣簡(jiǎn)單,實(shí)驗(yàn)快速和圖譜具有“指紋性”等優(yōu)點(diǎn),故應(yīng)用較廣。田進(jìn)國(guó)等用此法對(duì)部分植物藥和礦物藥材進(jìn)行了反復(fù)的比較研究,獲得了重復(fù)性好,且可適用于鑒別的圖譜。2.2.4熒光掃描圖檢測(cè)中藥所含的某些成分在紫外光照射下,吸收一定波長(zhǎng)的光能后,又發(fā)射出比吸收光的波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光,即熒光。用熒光分析儀記錄在特定波長(zhǎng)照射下各中藥相同溶劑的提取液發(fā)射的熒光光譜,并比較其區(qū)別,也可達(dá)到中藥鑒別的目的。孫文基用此法鑒別中藥沙苑子(SemenAstragallComplanati)及其偽品獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。另外熒光法和薄層法相結(jié)合,即將中藥提取液先經(jīng)薄層展開(kāi),再將薄層板置于365nm或254nm波長(zhǎng)熒光燈下觀察,比較其斑點(diǎn)熒光的顏色和展開(kāi)距離,或?qū)⒈影逯糜诒訏呙鑳x內(nèi)用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)進(jìn)行掃描,可以得到各中藥的熒光掃描圖用于鑒別。這類(lèi)方法對(duì)于一些含有能發(fā)射熒光成分的藥材尤為適用。2.2.5核磁共振譜的建立核磁共振譜類(lèi)似于紅外和紫外光譜,是另一種形式的吸收光譜。在無(wú)線電波(波長(zhǎng)10cm～100m)照射下,中藥成分的溶液中某些特定元素(通常選用H)的原子可以吸收電磁輻射,以吸收頻率為橫座標(biāo)、峰強(qiáng)度為縱座標(biāo)作圖,即得該物質(zhì)的核磁共振譜。考慮到中藥中的組分太復(fù)雜,通常選用某一溶劑的特征提取物進(jìn)行分析,獲得該中藥的HNMR指紋圖。秦海林等研究了人參(RadixGinseng)、天麻、黃連及其易混藥材的核磁共振指紋圖譜,表明本譜具有高度特征性和重現(xiàn)性,可以達(dá)到藥材鑒別的目的。2.2.6中藥中化學(xué)成分的提取質(zhì)譜是指物質(zhì)的質(zhì)量譜,它和上述光譜的原理有本質(zhì)區(qū)別,鑒于習(xí)慣的原因,本文仍放入光譜法中敘述。將中藥提取液置質(zhì)譜儀中進(jìn)行電子轟擊電離,可獲得提取液中化學(xué)成分的EI-MS圖,不同中藥提取液所含成分不同,所得質(zhì)譜圖所顯示的分子離子基峰及進(jìn)一步的裂解碎片峰亦不一致,可資鑒別。梁惠玲等對(duì)中藥天麻及其偽品進(jìn)行了EI-MS分析,獲得了滿(mǎn)意的鑒別效果。本法具有準(zhǔn)確、靈敏和指紋特征性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),然本儀器尚不普及,實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)提取液中主要成分的含量要求較高,實(shí)驗(yàn)費(fèi)用亦較大,能否作為常用的檢測(cè)方法尚待繼續(xù)探索。2.3衍射法的優(yōu)越性X射線衍射法是研究物質(zhì)的物相和晶體結(jié)構(gòu)的主要方法。當(dāng)對(duì)某一物質(zhì)進(jìn)行衍射分析時(shí),該物質(zhì)被X射線照射而產(chǎn)生不同程度的衍射現(xiàn)象,物質(zhì)的組成、晶型、分子內(nèi)成鍵方式、分子的構(gòu)型、構(gòu)象等將決定物質(zhì)產(chǎn)生特有的衍射光譜,如果該物質(zhì)是一混合物,則所得衍射圖是各組分衍射效應(yīng)的疊加。只要混合物的組成是恒定的,這衍射圖就可作為這混合物的特征圖譜。由于衍射法獲得的圖譜信息量大,指紋性強(qiáng),穩(wěn)定可靠且可以記錄,因此我們便可以此作為該物質(zhì)定性鑒別的可靠依據(jù)。如張漢明用此法對(duì)天麻及其偽品,何首烏(RadixPolygoniMultifloria)及其易混品,巴戟天(RadixMorindaeOfficinalis)及其易混品以及部分中成藥進(jìn)行了分析,獲得較好的鑒別效果。該法的優(yōu)點(diǎn)是樣品用量小,測(cè)試后樣品不會(huì)被破壞,操作簡(jiǎn)單,判別指標(biāo)多(衍射圖、D值和相對(duì)強(qiáng)度等),結(jié)果穩(wěn)定、客觀,圖譜指紋性強(qiáng),還可直接檢出物質(zhì)名稱(chēng),故此法對(duì)于結(jié)晶度較強(qiáng)的礦物類(lèi)藥和部分動(dòng)植物類(lèi)藥的鑒別分析特別適宜。然而,本實(shí)驗(yàn)所需的衍射分析儀器尚不普及,某些植物藥中的淀粉、纖維和樹(shù)脂等成分結(jié)晶度低而干擾較大,有時(shí)影響結(jié)果判斷。在進(jìn)行衍射分析時(shí),由于每一中藥含有許多成分,每一成分通常均有許多衍射峰,各衍射峰又因其晶面間距相同而產(chǎn)生相互疊加最后獲得的衍射圖會(huì)因各組分衍射效應(yīng)的疊加而使衍射圖顯得較為復(fù)雜從而給藥材鑒別帶來(lái)一定的困難。為此,呂揚(yáng)等在將衍射信息進(jìn)行傅里葉變換的基礎(chǔ)上,找出圖形的拓?fù)湟?guī)律,從而可獲得每一中藥的較為簡(jiǎn)單且又能反映藥材整體結(jié)構(gòu)特征的圖譜。2.4熱譜分析法許多物質(zhì)在加熱或冷卻過(guò)程中,往往會(huì)發(fā)生溶解、凝固、分解、化合、吸附、脫吸附、晶型轉(zhuǎn)變等物理或化學(xué)變化,這時(shí)就會(huì)產(chǎn)生吸熱和放熱現(xiàn)象,研究測(cè)定這種變化的技術(shù)即為熱分析技術(shù)。按分析內(nèi)容可分為:熱重量法(熱量法TG)、差示熱量分析法(差熱分析法DTA)和差示掃描量熱法(差動(dòng)法DSC)。在中藥的鑒別分析中,差熱分析法最為常用。差熱分析法是研究樣品及參比物在相同環(huán)境下等速加溫時(shí),兩者的溫度與時(shí)間或與加熱溫度的變化關(guān)系的方法。分析的結(jié)果用熱譜圖表示,比較兩者熱圖譜的差異,以達(dá)鑒別中藥的目的。該法樣品用量少,只需數(shù)毫克或數(shù)十毫克,故對(duì)貴重藥材尤為適宜。且操作簡(jiǎn)便,圖譜直觀、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好、適用范圍廣(植物藥、動(dòng)物藥、礦物藥均可),對(duì)于礦物藥的鑒別結(jié)果尤為滿(mǎn)意。熱分析法已解決了較難鑒別的珍珠粉(Margarita)、珍珠層粉和其偽品的鑒別和摻偽問(wèn)題,值得推廣應(yīng)用。2.5中藥生物技術(shù)鑒定的應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)是目前生命科學(xué)中最重要最先進(jìn)的技術(shù),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,近幾年來(lái),該法亦已被引入中藥鑒別研究。眾所周知的生物的性狀是依靠DNA遺傳給后代的,不同種的生物,甚至同種不同居群的植物,其DNA序列均不相同,這為用DNA分析技術(shù)鑒定中藥提供了可能。依靠目前的生物技術(shù),已能從生物中提取微量的DNA,并采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)測(cè)定DNA序列的差異,進(jìn)行生物鑒別。在中藥鑒別中更為適用是采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA法(randomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)而達(dá)到對(duì)動(dòng)植物藥材鑒別的目的。ShawP.C用AP-PCR和RAPD技術(shù)成功鑒別了人參等3種中藥;張榮用RAPD技術(shù)成功鑒定了木藍(lán)屬8種中藥。應(yīng)用生物技術(shù)鑒定中藥的研究工作發(fā)展很快,已顯示出該法具有靈敏度高,特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。然而本方法仍受到實(shí)驗(yàn)儀器不夠普及,操作尚未規(guī)范化,結(jié)果易受外界條件和主觀判斷的影響等問(wèn)題,相信經(jīng)過(guò)不斷的摸索和完善,可成為動(dòng)、植物類(lèi)中藥的較好鑒別方法之一。2.6小球物理鑒定用光學(xué)顯微鏡鑒別中藥的組織和粉末已是十分成熟的技術(shù)。然而由于光學(xué)顯微鏡的分辨率最高只能達(dá)到0.27μm,對(duì)于諸如細(xì)小的果實(shí)、種子、孢子和花粉類(lèi)藥材的表面所具有的細(xì)微特征卻難以鑒別,掃描電子顯微鏡的分辨率較光學(xué)顯微鏡高數(shù)萬(wàn)倍,且觀察時(shí)立體感強(qiáng),樣品制作較簡(jiǎn)單,在細(xì)小藥材以及葉類(lèi)藥材的鑒別上起了較大的作用。宓鶴鳴用SEM對(duì)16種紫珠葉(FoliumCallicarpaePedunculatae)表面特征進(jìn)行分析,達(dá)到了較好的鑒別效果。2.7對(duì)花粉粒的顯微圖像分析,可將花粉圖像分析是近20年來(lái)興起的一門(mén)新技術(shù),它可將不同層次二維圖像用計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理,獲取此圖像的三維定量數(shù)據(jù)。在中藥鑒定方面,它可將果實(shí)、種子、花粉或組織切片中的某一特征的形態(tài)用計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理,比較其形態(tài)差異,從而達(dá)到鑒別的目的。秦路平等用此法對(duì)蛇床子屬果實(shí)和22種花類(lèi)中藥的花粉進(jìn)行了計(jì)算機(jī)圖像分析測(cè)定,精確測(cè)定花粉粒的直徑、周長(zhǎng)、截面積、體積、形狀因子和不規(guī)則參數(shù)等形態(tài)學(xué)參數(shù),為花粉類(lèi)藥材的鑒別提供了精確的鑒別資料。肖小河等對(duì)麥冬(RadixOphiopogonis)和山麥冬(RadixLiriopes)進(jìn)行連續(xù)切片,獲得各個(gè)截面及各種特征組織的顯微圖像信息,經(jīng)采用計(jì)算機(jī)圖像處理和圖像生成技術(shù),實(shí)現(xiàn)了2種麥冬的三圍重建圖。該圖不但能反映2種麥冬的區(qū)別,而且圖像形像直觀,富有生動(dòng)性和立體感,還能在計(jì)算機(jī)或大屏幕上顯示,對(duì)教學(xué)尤為適宜。在計(jì)算機(jī)迅速發(fā)展的時(shí)代,這一方法具有一定的特點(diǎn)和推廣的價(jià)值。2.8聚丙烯酰胺凝膠電泳法帶有電荷的粒子在電場(chǎng)中隨緩沖液定向泳動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。依據(jù)中藥中的一些帶電荷的成分如有機(jī)酸、蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、生物堿和酶等在一定強(qiáng)度的電場(chǎng)中,在相同的時(shí)間內(nèi),因各中藥所含成分的電荷性質(zhì)(正電和負(fù)電)、電荷量和分子量等不同,造成各成分的泳動(dòng)方向(向正極或負(fù)極)、速度和距離等也不同,結(jié)合譜帶條數(shù)和染色結(jié)果的不同從而達(dá)到鑒別中藥的目的按電泳操作中支持物的不同可分為紙電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維薄膜電泳等。其中聚丙烯酰胺法在中藥鑒別中較為常用,該法所需實(shí)驗(yàn)設(shè)備簡(jiǎn)單,專(zhuān)屬性強(qiáng),靈敏較高。電泳法對(duì)含多肽和蛋白質(zhì)類(lèi)成分有差異的中藥鑒別有較突出的優(yōu)勢(shì),然而本法結(jié)果較易受實(shí)驗(yàn)條件的影響,故必須嚴(yán)格把握實(shí)驗(yàn)條件的一致性。80年代由Jorgenson等首創(chuàng)的毛細(xì)管電泳(CE)對(duì)常規(guī)的電泳分析技術(shù)作了重大改進(jìn)。本法以高壓電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,以毛細(xì)管為分離通道,依據(jù)樣品中各組分之間的淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的一類(lèi)液相分離技術(shù)。該儀器由高壓直流電源、進(jìn)樣裝置、毛細(xì)管和檢測(cè)器組成,在樣品分析中具有靈敏度高、柱效高、分析速度快、進(jìn)樣量少等優(yōu)點(diǎn)。自問(wèn)世十幾年以來(lái),該法發(fā)展極快,已經(jīng)有毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)、膠囊電動(dòng)毛細(xì)管電泳(MECC)和等速毛細(xì)管電泳(CITP)等多種分離模式,可對(duì)動(dòng)(植)物類(lèi)藥中多類(lèi)成分進(jìn)行分析。此法在中藥的定性和定量分析中已廣為應(yīng)用,也是中藥鑒別的一種值得推廣的方法。張朝暉等用高效毛細(xì)管電泳(HPCE)法對(duì)12種海馬(Hippocampus)、海龍(Syngnathus)類(lèi)藥材進(jìn)行鑒別,胡平等用HPCE法鑒別了中藥菟絲子(SemenCuscutae)13個(gè)樣品,結(jié)果與掃描電鏡法和顯微鑒別法的結(jié)果相一致。2.9統(tǒng)計(jì)分析方法中藥是由多類(lèi)成分組成的復(fù)合體,每一類(lèi)成分又常由數(shù)十種結(jié)構(gòu)近似的成分組成,同屬不同種的成分又極其類(lèi)似,往往使用單一的儀器測(cè)定,很難找出他們的明顯區(qū)別點(diǎn)。隨著近代統(tǒng)計(jì)學(xué)學(xué)科的飛速發(fā)展,一些統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法亦被引入中藥分析,將中藥經(jīng)觀察和測(cè)定的大量數(shù)據(jù),按一定的理論進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,從而求其差異。尤其是計(jì)算機(jī)學(xué)科的發(fā)展,可將復(fù)雜的統(tǒng)計(jì)學(xué)的計(jì)算簡(jiǎn)單化,從而方便地達(dá)到分類(lèi)鑒別的目的。聚類(lèi)分析法(CA)在多門(mén)學(xué)科中應(yīng)用較廣,它可對(duì)一些觀察對(duì)象(樣品)依據(jù)某種特征加以歸類(lèi)分析,將性質(zhì)相近的歸入同一類(lèi),將性質(zhì)差別比較大的分在不同的類(lèi),從而達(dá)到鑒別的目的。蘇薇薇等將10個(gè)不同產(chǎn)地的黃芩(RadixScutellariae)樣品進(jìn)行薄層色譜分析,然后將薄層色譜反映出的化學(xué)成分定性差異按數(shù)量化特征矩陣排列,并進(jìn)行聚類(lèi)分析。本法不但能鑒別正品和非正品黃芩,還能了解非正品與正品黃芩的差異程度。主成分分析(PCA)法是將中藥提取液的UV、TLC或HPLC的定量數(shù)據(jù),選用Shannon等信息理論進(jìn)行特征選取,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)變換尋求主成分,并分析各樣本的差異。曾明等用此法對(duì)葛屬9種2變種共20個(gè)不同產(chǎn)地的樣品進(jìn)行研究,為葛屬植物的分類(lèi)和他們藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)。2.10電鉻ea2.10.用示波圖形結(jié)合兩種方法對(duì)于小球物的檢測(cè),其符合以下5個(gè)月和10中藥提取液中所含的化學(xué)成分,有的是電活性物質(zhì),利用示波極譜滴定儀可測(cè)得其dE/dt-E曲線,根據(jù)被測(cè)物在dE/dt-E曲線上出現(xiàn)切口或消失,圖形的位移或擴(kuò)散的示波極譜法,用于藥物分析已顯示出其裝置簡(jiǎn)單、操作方便、準(zhǔn)確直觀和省時(shí)快速等優(yōu)點(diǎn)。劉英華等獲得6種貝母(青貝母、浙貝母、東貝母、一輪貝母、土貝母,光慈菇)的示波圖形。青貝母、光慈菇、土貝母、一輪貝母完全可從圖形上分辨開(kāi)。浙貝母、東貝母圖形相似,可借顏色反應(yīng)進(jìn)一步驗(yàn)證。提取所用的溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果也有較大影響:貝母的水、酸、乙醇提取,其酸浸液靈敏度高,而且酸浸液穩(wěn)定,不易變質(zhì)。經(jīng)16個(gè)月避光儲(chǔ)存再測(cè),其切口圖形位置均無(wú)改變。鐘世昌等用示波極譜法鑒別草豆蔻(SemenAlpiniaeKatsumadai)及其混淆品種云南草蔻和南寧草蔻。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:在pH4.5的NH4OH-HOAC緩沖溶液中利用草豆蔻揮發(fā)油成分中的電活性物質(zhì)在dE/dt-E曲線上產(chǎn)生切口和示波圖形的不同進(jìn)行鑒別。同時(shí)證明,就草豆蔻而論,如不出切口,它也就無(wú)藥用價(jià)值了。2.10.兩性電解質(zhì)分子動(dòng)物、植物性來(lái)源的中藥常含各種類(lèi)型的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)分子中雖然大多數(shù)氨基和羧基以肽鍵相連,但仍有一定數(shù)量自由的氨基和羧基以及酚、巰、胍和咪唑基等酸堿基團(tuán)的存在。由于蛋白質(zhì)和氨基酸都是兩性電解質(zhì)分子,當(dāng)其水溶液達(dá)某一pH值時(shí),蛋白質(zhì)分子所帶的正負(fù)電荷正好相等,在電場(chǎng)中即不向陰極也不向陽(yáng)極移動(dòng),此時(shí)溶液的pH值為該蛋白質(zhì)分子的等電點(diǎn)(PI)。徐康森等用改進(jìn)的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)法檢測(cè)純驢皮膠、豬皮膠、黃牛皮膠、水牛皮膠、雜皮膠、明膠、輔料、商品阿膠及偽膠的等電點(diǎn),計(jì)41批。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,其方法簡(jiǎn)便實(shí)用,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠,誤差甚微,相對(duì)偏差小于1.0%。經(jīng)對(duì)純驢皮膠與其它各種膠測(cè)得的等電點(diǎn)進(jìn)行顯著分析,證明其等電點(diǎn)均值的差別(P<0.01)有非常顯著的意義。本實(shí)驗(yàn)為含蛋白質(zhì)類(lèi)藥材的真?zhèn)舞b別及內(nèi)在質(zhì)量的研究提供了一個(gè)切實(shí)可行的質(zhì)控指標(biāo)。2.11依據(jù)元素含量和測(cè)定掃描線的方法進(jìn)行分析X射線熒光光譜法是經(jīng)X射線熒光光譜儀定性?huà)呙?對(duì)樣品進(jìn)行無(wú)損傷性分析。方法是將樣品放入X射線熒光光譜儀中,作定性?huà)呙璩Ｒ?guī)測(cè)試,從定性?huà)呙鑸D上可觀察到含有元素的種類(lèi),然后根據(jù)元素含量和定性?huà)呙鑸D所示各種元素分析線的強(qiáng)度,作定性、定量分析。孫家美等用本法對(duì)穿山甲(SquamaManitis)鱗片進(jìn)行分析,表明穿山甲鮮片中,含有較多的有機(jī)和無(wú)機(jī)的含S化合物。日本學(xué)者用本法對(duì)龍骨(Fossil