基因工程【共68張PPT】

1基因工程第1頁(yè)/共68頁(yè)參考書:1.《基因工程》孫明高等教育出版社2.《基因工程原理》吳乃虎科學(xué)出版社3.《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》J.Sambtook,EFFrish,TManiatis.金冬雁等譯，科學(xué)出版社4.英國(guó)PrinciplesofGeneManipulation5.《基因操作原理》中文版瞿禮嘉、顧紅雅譯高等教育出版社第2頁(yè)/共68頁(yè)原理：通過基因重組,讓目的基因在受體細(xì)胞中高效穩(wěn)定表達(dá)。操作水平：DNA分子水平結(jié)果：定向地改造生物的遺傳性狀，獲得所需要的品種。利用DNA體外重組或PCR擴(kuò)增技術(shù)從某種生物基因組中分離感興趣的基因，或是用人工合成的方法獲取基因，然后經(jīng)過一系列切割，加工修飾，經(jīng)連接反應(yīng)形成重組DNA分子，再將其轉(zhuǎn)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞（轉(zhuǎn)化），以期獲得基因表達(dá)的過程。什么是基因工程?第3頁(yè)/共68頁(yè)基因工程(geneengineering)常和以下名稱混用遺傳工程(geneticengineering);基因克隆(genecloning);分子克隆(molecularcloning);基因操作(genemanipulation);重組DNA技術(shù)(recombinationDNAtechnique)克隆(clone):作名詞時(shí)指含有某目的DNA片段的重組DNA分子或含有該重組分子的無性繁殖系。作動(dòng)詞時(shí)是指基因的分離與重組過程。第4頁(yè)/共68頁(yè)

血液供血者受血者注射器

目的基因供體受體載體

基因工程（打比方）第5頁(yè)/共68頁(yè)將供體或在細(xì)胞外產(chǎn)生的核酸（物質(zhì)）分子插入到病毒(virus)、質(zhì)粒(plasmid)或其它載體系統(tǒng)(vectersystem)中從而形成一種新的可連續(xù)繁殖的有機(jī)體再整合到那些本來不含該類物質(zhì)的宿主(host)—受體中第6頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的誕生與發(fā)展20世紀(jì)70年代，PaulBerg及其同事第一個(gè)創(chuàng)造重組DNA分子PaulBerg第7頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的誕生與發(fā)展1973年,HerberBoyer教授和StanleyCohen教授在人類上第一次進(jìn)行了有目的的基因重組嘗試，并據(jù)此提出了“基因克隆”的策略。HerbertW.Boyer,Ph.D.第8頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的誕生與發(fā)展1975，發(fā)現(xiàn)分子克隆工具酶利用限制性內(nèi)切酶（Restriction

endonuclease）切割產(chǎn)生特殊DNA片段的能力使得純化那些DNA片段成為可能第9頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的誕生與發(fā)展1978年，重組胰島素第10頁(yè)/共68頁(yè)1979年，人類生長(zhǎng)激素基因工程的誕生與發(fā)展第11頁(yè)/共68頁(yè)Firsttransgenicanimal,thegoldencarp,isclonedbyChinesescientists

in

1981.Canada‘sfirstbiotechnologycompany,Allelix,isformed

in

1995.TodayBiotechnologyhasmadeagreatimpactinagriculture,medicine,foodandmanyother

products.基因工程的誕生與發(fā)展第12頁(yè)/共68頁(yè)什么是基因?編碼蛋白質(zhì)或RNA等具有特定功能產(chǎn)物的遺傳信息的基本單位，是染色體或基因組的一段DNA序列。包括編碼序列(外顯子)、編碼區(qū)前后對(duì)于基因表達(dá)具有調(diào)控功能的序列和單個(gè)編碼序列間的間隔序列(內(nèi)含子)。第13頁(yè)/共68頁(yè)20世紀(jì)70年代，PaulBerg及其同事第一個(gè)創(chuàng)造重組DNA分子當(dāng)你想要檢測(cè)突變，來啊，做PCR吧！BamHⅠ識(shí)別：GGATCC插入到病毒(virus)、質(zhì)粒(plasmid)或＝6個(gè)（大多數(shù)）：如：EcoRⅠ5’-GAATTC-3’提取質(zhì)粒并用限制酶切割脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化：磷質(zhì)雙層包裹DNA卡那霉素抗性基因（cat或cmr）目的基因與運(yùn)載體結(jié)合--形成重組DNA遺傳工程(geneticengineering);將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并擴(kuò)增同尾酶（isocaudamer）再整合到那些本來不含該類物質(zhì)的宿主(host)—受體中AATTC從前你要擴(kuò)增DNA，

總有培養(yǎng)大批細(xì)胞的重任要你背。DNA

exon1intron1exon2intron2exon3intron3exon4

轉(zhuǎn)錄

Pro-mRNAexon1intron1exon2intron2exon3intron3exon4mRNA剪接翻譯蛋白質(zhì)

真核生物中蛋白質(zhì)合成過程中外顯子和內(nèi)含子的關(guān)系

第14頁(yè)/共68頁(yè)生物進(jìn)化的分子基礎(chǔ)—基因用進(jìn)廢退，獲得性遺傳達(dá)爾文進(jìn)化論拉馬克進(jìn)化論過度繁殖，生存斗爭(zhēng)遺傳和變異，適者生存

第15頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的優(yōu)點(diǎn)打破了常規(guī)育種難以突破的物種之間的界限，可以使原核生物與真核生物之間、動(dòng)物與植物之間、人與其他生物之間的遺傳信息相互重組和轉(zhuǎn)移。為什么能把一種生物的基因“嫁接”到另一種生物上？這種嫁接時(shí)如何實(shí)現(xiàn)的？第16頁(yè)/共68頁(yè)基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)基因是可切割的基因是可轉(zhuǎn)移的多肽與基因之間有對(duì)應(yīng)關(guān)系遺傳密碼通用基因可以復(fù)制遺傳基因工程研究的理論依據(jù)3‘起始密碼子5‘腺嘌呤（A）胸腺嘧啶（T）胞嘧啶（C）鳥嘌呤（G）第17頁(yè)/共68頁(yè)（1）獲得目的基因；

（2）與克隆載體連接，形成新的重組DNA分子；

（3）用重組DNA分子轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞，并能在受體細(xì)胞中復(fù)制和遺傳；

（4）對(duì)轉(zhuǎn)化子篩選和鑒定；

（5）對(duì)獲得外源基因的細(xì)胞或生物體通過培養(yǎng)，獲得所需的遺傳性狀或表達(dá)出所需要的產(chǎn)物。重組DNA操作一般步驟生物材料mRNADNARNAcDNA文庫(kù)基因組文庫(kù)人工合成目的基因克隆載體受體細(xì)胞重組DNA克隆子轉(zhuǎn)基因生物第18頁(yè)/共68頁(yè)基因工程操作的工具限制性核酸內(nèi)切酶將目的基因片斷從受體細(xì)胞內(nèi)提取，需要基因的剪刀—限制性核酸內(nèi)切酶。將目的基因與質(zhì)粒DNA連接，需要基因的針線—DNA連接酶。將目的基因運(yùn)入大腸桿菌，需要基因的運(yùn)輸工具—運(yùn)載體。第19頁(yè)/共68頁(yè)第20頁(yè)/共68頁(yè)

限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）定義是一類能識(shí)別雙鏈DNA中特殊的核苷酸序列，并使每條鏈的一個(gè)磷酸二酯鍵斷開的內(nèi)脫氧核糖核酸酶。類型Ⅰ型限制酶Ⅱ型限制酶III型限制酶不同限制酶能專一地識(shí)別不同的特異核苷酸序列第21頁(yè)/共68頁(yè)限制性內(nèi)切酶的命名第22頁(yè)/共68頁(yè)Ⅱ型限制酶的特性

識(shí)別序列<6個(gè)：如：AsuⅠ5’-GGNCC-3’（5個(gè)）

MboⅠ5’-GATC-3’（4個(gè)）>6個(gè)：如：NotⅠ5’-GCGGCCGC-3’（8個(gè)）＝6個(gè)（大多數(shù)）：如：EcoRⅠ5’-GAATTC-3’有的限制酶識(shí)別序列包含在另一種限制酶內(nèi)。

如：Sau3A識(shí)別：GATC

BamHⅠ識(shí)別：GGATCC有的限制酶識(shí)別多種核苷酸序列。

如：HindⅡ識(shí)別4種核苷酸序列：5’-CTPyPuAC-3’

（Py→嘧啶堿基C或T；Pu→嘌呤堿基A或G）第23頁(yè)/共68頁(yè)GGATCCCCTAGG5’3’5’3’限制酶：BamHⅠ結(jié)構(gòu)相同，方向相反的重復(fù)序列，正讀與反讀都相同。旋轉(zhuǎn)對(duì)稱或左右互補(bǔ)對(duì)稱結(jié)構(gòu)。為便于書寫，識(shí)別序列可以以5’→3’走向的單鏈DNA表示。Ⅱ型限制酶的特性

II型限制酶的識(shí)別序列一般都具有回文結(jié)構(gòu)

(palindrome)GTNACCANTG5’3’5’3’第24頁(yè)/共68頁(yè)(a)5’－P單鏈延伸的粘性末端(b)3’－OH單鏈延伸的粘性末端①粘性末端（粘端）－GAATTC－－CTTAAG－GAATTCCTTAAG如：EcoRⅠ5’3’5’3’5’3’5’3’－CTGCAG－－GACGTC－CTGCAGGACGTC如：PstⅠ5’3’5’3’5’3’5’3’各種限制酶的切割類型是各式各樣的，切割后形成各種粘性末端或平整末端；Ⅱ型限制酶的切割類型

第25頁(yè)/共68頁(yè)②平頭末端（平端）－CCCGGG－－GGGCCC－CCCGGGGGGCCC如：SmalⅠ5’3’5’3’5’3’5’3’各種限制酶的切割類型是各式各樣的，切割后形成各種粘性末端或平整末端；Ⅱ型限制酶的切割類型

第26頁(yè)/共68頁(yè)GAATTCCTTAAGGAATTCCTTAAGG

CTTAA

AATTC

GG

CTTAA

AATTC

G被同一種限制酶切斷的幾個(gè)DNA是否具有相同的黏性末端？用同種限制酶切割第27頁(yè)/共68頁(yè)同尾酶（isocaudamer）

有些限制性內(nèi)切酶雖然來源各異，識(shí)別的靶子序列也各不相同，但切割DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，這一類限制酶特稱為同尾酶。這兩個(gè)相同的粘性末端稱為配伍未端。BamHⅠBglⅡGGATCCCCTAGGAGATCTTCTAGAGCCTAGGATCCG++ATCTAG

GATCTA同尾酶和同裂酶第28頁(yè)/共68頁(yè)同裂酶（isoschizomer）

有一些來源不同的限制酶識(shí)別的是同樣的核苷酸靶序列，這類酶特稱為同裂酶。同裂酶的切點(diǎn)位置可相同或不同。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BamHⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCCG+BstⅠ（a）切點(diǎn)位置相同第29頁(yè)/共68頁(yè)CCCGGGGGGCCCCGGGCCCCGGGC+XmaⅠCCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCC+SmaⅠ（b）切點(diǎn)位置不相同同裂酶（isoschizomer）

有一些來源不同的限制酶識(shí)別的是同樣的核苷酸靶序列，這類酶特稱為同裂酶。同裂酶的切點(diǎn)位置可相同或不同。第30頁(yè)/共68頁(yè)單酶切法雙酶切法部分酶切DNA分子片段化天然DNA或化學(xué)合成的DNA常需酶切成可連接重組的DNA片段，即DNA分子的片段化。Hind

IIISalI第31頁(yè)/共68頁(yè)1、具有互補(bǔ)粘性末端片段的連接2、具平末端DNA片段之間的連接3、DNA片段末端修飾后進(jìn)行連接4、DNA片段加桿后連接

DNA片段連接第32頁(yè)/共68頁(yè)DNA連接酶

E.coliDNA連接酶只能催化互補(bǔ)粘性末端之間的連接DNA連接酶（DNAligase）能催化雙鏈DNA片段緊靠在一起的3‘-OH末端與5’-P末端之間形成磷酸二酯鍵，使末端連接。

T4DNA連接酶催化互補(bǔ)粘性末端和平末端之間的連接，但平末端之間連接的效率比較低。第33頁(yè)/共68頁(yè)具有互補(bǔ)粘性末端片段的連接

E.coliDNA連接酶第34頁(yè)/共68頁(yè)具有互補(bǔ)粘性末端和平末端片段的連接EcoRIEcoRI

T4DNA連接酶第35頁(yè)/共68頁(yè)將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并擴(kuò)增目的基因可以隨著受體細(xì)胞進(jìn)行快速的繁殖，在很短的時(shí)間內(nèi)獲得大量的基因。DNA片段末端修飾后進(jìn)行連接《基因工程》孫明高等教育出版社（2）與克隆載體連接，形成新的重組DNA分子；降溫至37-60℃與模版復(fù)性結(jié)合Pu→嘌呤堿基A或G）將目的基因片斷從受體細(xì)胞內(nèi)提取，(a)5’－P單鏈延伸的粘性末端這時(shí)有個(gè)家伙叫KaryMullis博士的，

他鉆出來說體外合成也OK！將供體或在細(xì)胞外產(chǎn)生的有的限制酶識(shí)別序列包含在另一種限制酶內(nèi)。轉(zhuǎn)基因植物:抗病、抗蟲、抗旱、改變花色、表達(dá)藥用蛋白A轉(zhuǎn)基因動(dòng)物:生長(zhǎng)、肉質(zhì)、抗病、生物反應(yīng)器末端轉(zhuǎn)移酶+核酸外切酶+DNA片段末端修飾后進(jìn)行連接核酸外切酶（exonuclease）：在核酸水解酶中，是具有從分子鏈的末端順次水解磷酸二酯鍵而生成單核苷酸作用的酶的修飾作用第36頁(yè)/共68頁(yè)CTAGAAGC共同的限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)DNA連接酶DNA片段末端加桿后連接外切酶修飾酶切第37頁(yè)/共68頁(yè)要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去。能將外源基因送入細(xì)胞的工具就是運(yùn)載體1、條件：②含有限制性內(nèi)切酶的位點(diǎn)①能自我復(fù)制③含有篩選標(biāo)記，一般為抗性基因或報(bào)告基因④能啟動(dòng)外源目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯⑤能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定地保存2、種類質(zhì)粒、噬菌體、病毒、不同DNA片段組合載體

運(yùn)載體-基因克隆載體第38頁(yè)/共68頁(yè)質(zhì)粒是能自主復(fù)制的雙鏈環(huán)狀DNA分子質(zhì)粒克隆載體第39頁(yè)/共68頁(yè)大腸桿菌質(zhì)粒載體可以克隆10kb以下的片段第40頁(yè)/共68頁(yè)細(xì)菌人工染色體克隆載體一般在10kb以下，能承載40kb左右的外源片段。第41頁(yè)/共68頁(yè)其他種類的載體包括：PCR克隆載體、噬菌體克隆載體、細(xì)菌克隆載體、病毒克隆載體、穿梭克隆載體、細(xì)菌人工染色體、細(xì)菌表達(dá)載體、真核表達(dá)載體、昆蟲細(xì)胞載體、酵母表達(dá)載體、體外表達(dá)載體、熒光蛋白載體、雙雜交載體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)載體、siRNA表達(dá)載體、熱休克載體、報(bào)告基因載體、亞細(xì)胞定位載體、轉(zhuǎn)座子構(gòu)建載體、噬菌體展示載體載體種類第42頁(yè)/共68頁(yè)基因操作的基本步驟獲取目的基因形成重組DNA分子將重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞4.篩選含有目的基因的受體細(xì)胞5.目的基因的表達(dá)第43頁(yè)/共68頁(yè)將需要的基因從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來取出DNA用限制酶切斷DNA

目前被較廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。提取目的基因的方法1、直接分離基因第44頁(yè)/共68頁(yè)細(xì)胞內(nèi)總DNA的提取分離程序第45頁(yè)/共68頁(yè)雙鏈DNA加熱至90-95℃變性解旋成為單鏈DNA，成為互補(bǔ)鏈聚合反應(yīng)的模版降溫至37-60℃與模版復(fù)性結(jié)合升溫至70-75℃，DNA聚合酶催化引物按5‘-3’延伸，合成模版DNA鏈的互補(bǔ)鏈N個(gè)循環(huán)，達(dá)到2n的拷貝數(shù)

2、利用PCR擴(kuò)增目的基因PCR原理第46頁(yè)/共68頁(yè)

2、利用PCR擴(kuò)增目的基因引物1目的基因已知序列已知序列引物2PCR擴(kuò)增含有目的基因的DNA片段1、必須知道待擴(kuò)增目的基因DNA片段的核苷酸序列2、待擴(kuò)增片段兩端長(zhǎng)約20bp的序列已知，3、允許擴(kuò)增的DNA片段長(zhǎng)度一般在1kb以內(nèi)4、擴(kuò)增未知序列或長(zhǎng)達(dá)幾千bp的大基因，需要特殊類型的PCR策略5、RT-PCR、免疫PCR、巢式PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR、原位PCR技術(shù)等30幾種第47頁(yè)/共68頁(yè)P(yáng)CR之歌

從前你要擴(kuò)增DNA，

總有培養(yǎng)大批細(xì)胞的重任要你背。

這時(shí)有個(gè)家伙叫KaryMullis博士的，

他鉆出來說體外合成也OK！只消把你的模板混上緩沖液，

再加些引物——

核苷和聚合酶。變性，退火，和延伸。

加熱~涼涼~加熱~好神奇??！當(dāng)你想要檢測(cè)突變，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想要基因重組，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想要偵破大案，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想知道孩子他爹到底是哪個(gè)混蛋，來啊，做PCR吧！?。io-rad

推出的

ScientistsforbetterPCR第48頁(yè)/共68頁(yè)

3、人工基因合成法直接合成法：已知某基因的序列的前提下,可以用化學(xué)方法合成或用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲取目的因.(如胰島素基因)逆轉(zhuǎn)錄法:以信使RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下將脫氧核苷酸合成合成DNA(基因)。根據(jù)蛋白質(zhì)的氨基酸順序推算出信使RNA核苷酸順序，再據(jù)此推算出基因DNA的脫氧核苷酸順序。用游離脫氧核苷酸直接合成相應(yīng)的基因。DNA合成儀PCR擴(kuò)增儀第49頁(yè)/共68頁(yè)5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’******************磷酸化磷酸化磷酸化退火連接退火連接退火連接粘性末端粘性末端合成的全基因DNA目的基因化學(xué)合成全片段酶促法連接示意圖第50頁(yè)/共68頁(yè)目的基因與運(yùn)載體結(jié)合--形成重組DNA提取質(zhì)粒并用限制酶切割用連接酶將目的基因和質(zhì)粒連接用限制酶切割目的基因和用相同的限制酶切割質(zhì)粒使之出現(xiàn)一個(gè)切口，將目的基因插入切口處，讓目的基因的黏性末端與切口上的黏性末端互補(bǔ)配對(duì)后，在DNA連接酶的作用下連接形成重組DNA分子第51頁(yè)/共68頁(yè)基因工程中常用的受體細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞等。如用質(zhì)粒作運(yùn)載體,則選大腸桿菌為受體細(xì)胞目的基因可以隨著受體細(xì)胞進(jìn)行快速的繁殖，在很短的時(shí)間內(nèi)獲得大量的基因。將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并擴(kuò)增第52頁(yè)/共68頁(yè)將重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞并擴(kuò)增將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞將受體細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增轉(zhuǎn)化：外源裸露DNA進(jìn)入受體細(xì)胞，并在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定維持和表達(dá)的過程稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)染：如果外源DNA分子是病毒或者噬菌體DNA或RT-DNA，那么把此過程也稱為轉(zhuǎn)染。化合物誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化：感受態(tài)細(xì)胞電穿孔轉(zhuǎn)化：高電壓脈沖產(chǎn)生瞬間通道超聲波處理轉(zhuǎn)化：擊穿細(xì)胞膜形成膜通道脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)化：磷質(zhì)雙層包裹DNA磷酸鈣轉(zhuǎn)染法：動(dòng)物細(xì)胞捕獲DNA-磷酸鈣沉淀物常用轉(zhuǎn)化法第53頁(yè)/共68頁(yè)篩選含有目的基因的受體細(xì)胞

前三步的處理十分繁鎖，為保證目的基因得到有效利用，通常用大量的受體細(xì)胞來接受不多的目的基因。這樣，處理的受體細(xì)胞中真正攝入了目的基因的很少，必須將它從中檢測(cè)出來。受體細(xì)胞是否具運(yùn)載體特有的“標(biāo)記基因”所控制的性狀檢測(cè)依據(jù)第54頁(yè)/共68頁(yè)1、根據(jù)載體抗性基因和相應(yīng)的藥物篩選轉(zhuǎn)化子卡那霉素抗性基因（cat或cmr）卡那霉素四環(huán)素抗性基因（knr或kanr）四環(huán)素2、根據(jù)報(bào)告基因篩選轉(zhuǎn)化子螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因（luc）綠色熒光蛋白基因（gfp）3、根據(jù)噬菌斑篩選轉(zhuǎn)化子第55頁(yè)/共68頁(yè)重組子的鑒定1、根據(jù)重組DNA分子特征鑒定根據(jù)重組DNA分子大小酶切圖譜

PCR擴(kuò)增片段鑒定

DNA雜交法鑒定：Southern雜交，斑點(diǎn)印跡雜交，菌落（噬菌體）原位雜交應(yīng)用DNA芯片鑒定根據(jù)DNA核苷酸序列鑒定DNA=>瓊脂糖電泳=>印跡轉(zhuǎn)移=>預(yù)雜交=>雜交（變性探針）=>洗膜=>放射自顯影或顯色第56頁(yè)/共68頁(yè)重組子的鑒定2、根據(jù)目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物（mRNA）鑒定

Northern雜交：用DNA探針檢測(cè)RNA分子mRNA提取=>甲醛變性電泳=>印跡轉(zhuǎn)移=>預(yù)雜交=>雜交（變性探針）=>洗膜=>放射自顯影或化學(xué)發(fā)光第57頁(yè)/共68頁(yè)3、根據(jù)目的基因翻譯產(chǎn)物（蛋白質(zhì)、酶、多肽）鑒定重組子的鑒定凝膠電泳檢測(cè)生化反應(yīng)檢測(cè)免疫學(xué)檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）Westhern印跡法免疫沉淀測(cè)定生物學(xué)活性檢測(cè)第58頁(yè)/共68頁(yè)

目的基因基因載體重組體分切接轉(zhuǎn)篩總體技術(shù)路線第59頁(yè)/共68頁(yè)基因工程的應(yīng)用基因工程藥物:

干擾素、生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子、促紅細(xì)胞生成素新型疫苗:

口服轉(zhuǎn)基因疫苗DNA治療:

腫瘤、血友病、地中海貧血、艾滋病、心血管疾病轉(zhuǎn)基因植物:

抗病、抗蟲、抗旱、改變花色、表達(dá)藥用蛋白轉(zhuǎn)基因動(dòng)物:

生長(zhǎng)、肉質(zhì)、抗病、生物反應(yīng)器第60頁(yè)/共68頁(yè)第一次測(cè)驗(yàn)題目：簡(jiǎn)述基因工程研究的基本技術(shù)路線第61頁(yè)/共68頁(yè)將供體或在細(xì)胞外產(chǎn)生的核酸（物質(zhì)）分子插入到病毒(virus)、質(zhì)粒(plasmid)或其它載體系統(tǒng)(vectersystem)中從而形成一種新的可連續(xù)繁殖的有機(jī)體再整合到那些本來不含該類物質(zhì)的宿主(host)—受體中第62頁(yè)/共68頁(yè)Ⅱ型限制酶的特性

識(shí)別序列<6個(gè)：如：AsuⅠ5’-GGNCC-3’（5個(gè)）

MboⅠ5’-GATC-3’（4個(gè)）>6個(gè)：如：NotⅠ5’-GCGGCCGC-3’（8個(gè)）＝6個(gè)（大多數(shù)）：如：EcoRⅠ5’-GAATTC-3’有的限制酶識(shí)別序列包含在另一種限制酶內(nèi)。

如：Sau3A識(shí)別：GATC

BamHⅠ識(shí)別：GGATCC有的限制酶識(shí)別多種核苷酸序列。

如：HindⅡ識(shí)別4種核苷酸序列：5’-CTPyPuAC-3’

（Py→嘧啶堿基C或T；Pu→嘌呤堿基A或G）第63頁(yè)/共68頁(yè)Ⅱ型限制酶的特性

識(shí)別序列<6個(gè)：如：AsuⅠ5’-GGNCC-3’（5個(gè)）

MboⅠ5’-GATC-3’（4個(gè)）>6個(gè)：如：NotⅠ5’-GCGGCCGC-3’（8個(gè)）＝6個(gè)（大多數(shù)）：如：EcoRⅠ5’-GAATTC-3’有的限制酶識(shí)別序列包含在另一種限制酶內(nèi)。

如：Sau3A識(shí)別：GATC

BamHⅠ識(shí)別：GGATCC有的限制酶識(shí)別多種核苷酸序列。

如：HindⅡ識(shí)別4種核苷酸序列：5’-CTPyPuAC-3’

（Py→嘧啶堿基C或T；Pu→嘌呤堿基A或G）第64頁(yè)/共68頁(yè)P(yáng)CR之歌

從前你要擴(kuò)增DNA，

總有培養(yǎng)大批細(xì)胞的重任要你背。

這時(shí)有個(gè)家伙叫KaryMullis博士的，

他鉆出來說體外合成也OK！只消把你的模板混上緩沖液，

再加些引物——

核苷和聚合酶。變性，退火，和延伸。

加熱~涼涼~加熱~好神奇?。‘?dāng)你想要檢測(cè)突變，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想要基因重組，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想要偵破大案，來啊，做PCR吧！

當(dāng)你想知道孩子他爹到底是哪個(gè)混蛋，來啊，做PC