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蛋白亞細胞定位方法O O— O-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-CompanyOnel挑單克隆斑加到30mlLB中，加AMP。37°C搖過夜。分別取15m1菌液加到1L的LB中，加AMP,繼續(xù)在37C下?lián)u至OD600=嚴格控制OD。加IPTG，使終濃度達到0.2mM,18C搖過夜。在4C下以7700xg.8000rpm）離心10min.棄去上清，放在冰上。加入30~50m1ice-cold1xPBS，用移液器懸浮細胞。用超聲波超生。取一部分超生后的產(chǎn)物用SDS檢測。向溶液中加入20%的Trionx-100，使終濃度達到1%。Mixgentlyfor30mintoaidinsolubilizationofthefusionprotein。應(yīng)該是在冰上。10000rpm離心for10minat4°C.轉(zhuǎn)移上清到一個新的容器中。1xPBS(ice-cold):Dilute10xPBSwithsterileH2O.Storeat4°C.10xPBSis1.4MNaCl,27mMKCl,100mMNa2HPO4,18mMKH2PO4,pH.1xPBSis140mMNaCl;2.7mMKCl;10mMNa2HPO4;1.8mMKH2PO4,1L,1xPBS配方如下：稱取NaCl8.18g;KCl0.2g;3.58g;KH2PO40.245g溶于800

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