乳及乳制品的理化檢測-乳及乳制品中抗生素的測定

生鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn)原理一試劑和材料二檢驗(yàn)程序四菌種、培養(yǎng)基和試劑三操作步驟五報(bào)告六一、原理

樣品經(jīng)過80℃殺菌后，添加嗜熱鏈球菌菌液。培養(yǎng)一段時(shí)間后，嗜熱鏈球菌開始增殖。這個(gè)時(shí)候加入代謝底物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），若該樣品中不含有抗生素或抗生素濃度低于檢測限，嗜熱鏈球菌講繼續(xù)增殖，還原TTC成為紅色物質(zhì)。相反，如果樣品中含有高于檢測限的抑菌劑，則嗜熱鏈球菌受邀到抑制，因此指示劑TTC不還原，保持原色。噬熱鏈球菌抑制法二、試劑和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃帶蓋恒溫水浴鍋：36℃±1℃、80℃±2℃天平：感量0.1g、0.001g無菌吸管：1ml（具0.01ml刻度），10.0ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸頭無菌試管：18mm×180mm溫度計(jì)：0℃~100℃旋渦混勻器噬熱鏈球菌抑制法三、菌種、培養(yǎng)基和試劑噬熱鏈球菌抑制法1．菌種：嗜熱鏈球菌2．滅菌脫脂乳3．4%2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）水溶液：：1g2，3，5-氯化三苯四氮唑溶于5mL滅菌蒸餾水中，裝褐色瓶中于2℃～5℃保存。臨用時(shí)用滅菌蒸餾水5倍稀釋。成為4%的水溶液。4．青霉素G參照溶液：稱取青霉素G鉀鹽標(biāo)準(zhǔn)品30.0mg，溶于無菌磷酸鹽緩沖液中，使其濃度為100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再將該溶液用滅菌脫脂乳稀釋至0.6IΜ/mL，分裝于無菌小管中，密封備用。四、檢驗(yàn)程序高效液相色譜法五、操作步驟噬熱鏈球菌抑制法菌種活化取一接種環(huán)嗜熱鏈球菌菌種，接種在9ml滅菌脫脂乳中，置36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12h~15h后，置2℃~5℃冰箱保存?zhèn)溆?。?5d轉(zhuǎn)種一次。測試菌液將經(jīng)過活化的嗜熱鏈球菌金鐘接種滅菌脫脂乳，36℃±1℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15h±1h，加入相同體積的滅菌脫脂乳混勻稀釋成測試菌液。培養(yǎng)取樣品9ml，置18mm×180mm試管內(nèi)，每份樣品另外做一份平行樣。同時(shí)再做因性和陽性對照各一份，陽性對照管用9ml青霉素G參照溶液，隱形對照管用9ml滅菌脫脂乳。多有試管置80℃±2℃水浴加熱5min，冷卻至37℃一下，加入測試菌液1ml，輕輕旋轉(zhuǎn)試管混勻。36℃±1℃水浴培養(yǎng)2h，加4%TTC水溶液0.3ml，在旋渦混勻器上混合15s或振動試管混勻。36℃±1℃水浴避光培養(yǎng)30min，觀察顏色變化。如果顏色沒有變化，于水浴中繼續(xù)避光培養(yǎng)30min作最終觀察。觀察時(shí)要迅速，避免光照過久出現(xiàn)干擾。五、操作步驟噬熱鏈球菌抑制法判斷方法在白色背景前觀察，是觀眾樣品呈乳的原色時(shí)，指示乳中有抗生素存在，為陽性結(jié)果，試管中樣品呈紅色為陰性結(jié)果。如最終觀察現(xiàn)象仍為可以，建議重新檢測。六、報(bào)告噬熱鏈球菌抑制法報(bào)告：最終觀察時(shí)，樣品變?yōu)榧t色，報(bào)告為抗生素殘留陰性。樣品依然呈乳的原色，報(bào)告為抗生素殘留陽性。本方法檢測幾種常見抗生素的最低檢出限為：青霉素0.004IU，鏈霉素0.5IU，慶大霉素0.4IU，卡那霉素5IU。生鮮乳中抗生素殘留檢驗(yàn)原理一試劑和材料二檢驗(yàn)程序四菌種、培養(yǎng)基和試劑三操作步驟五報(bào)告六一、原理

培養(yǎng)基預(yù)先混合嗜熱脂肪芽胞桿菌芽胞，并含有pH指示劑（溴甲酚紫），加入樣品并孵育后，若該樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測限，細(xì)菌芽孢將在培養(yǎng)基中生長并利用糖產(chǎn)酸，pH指示劑的紫色變?yōu)辄S色。相反，如果樣品中含有高于檢測限的抗生素，則細(xì)菌芽孢不會生長，pH指示劑的顏色保持不變，仍為紫色。嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法二、試劑和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：冰箱：2℃~5℃、-20℃~-5℃恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃、56±1℃恒溫水浴鍋：65℃±1℃、80℃±2℃無菌吸管或100μl、200μl微量移液器及吸頭無菌試管：18mm×180mm、15mm×100mm溫度計(jì)：0℃~100℃離心機(jī)：轉(zhuǎn)速5000r/min嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法三、菌種、培養(yǎng)基和試劑嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法1．菌種：嗜熱脂肪芽孢桿菌卡利德變種2．滅菌脫脂乳3．無菌磷酸鹽緩沖溶液。4．青霉素G參照溶液：稱取青霉素G鉀鹽標(biāo)準(zhǔn)品30.0mg，溶于無菌磷酸鹽緩沖液中，使其濃度為100IΜ/mL～1000IΜ/mL。再將該溶液用滅菌脫脂乳稀釋至0.6IΜ/mL，分裝于無菌小管中，密封備用。5．溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基:稱取溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基干粉15g，加入蒸餾水或去離子水1000mL，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝試管，115℃高壓滅菌30min。四、檢驗(yàn)程序嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法五、操作步驟嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法測試培養(yǎng)基在溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基中加入適量芽胞懸液，混合均勻，使最終芽胞濃度為8×105CFΜ/mL～2×l06CFΜ/mL?；旌涎挎邞乙旱匿寮追幼掀咸烟堑鞍纂伺囵B(yǎng)基分裝小試管，每管200μL，密封防止水分蒸發(fā)。配置好的測試培養(yǎng)基可以在2℃～5℃保存6個(gè)月。培養(yǎng)操作吸取樣品100μL加入含有芽胞的測試培養(yǎng)基中，輕輕旋轉(zhuǎn)試管混勻，每份撿樣做2份，另外再做陰性和陽性對照個(gè)1份，陽性對照管為100μL青霉素G參照溶液，陰性對照管為100μL無抗生素的脫脂乳。于65℃±2℃水浴培養(yǎng)2.5h，觀察培養(yǎng)基顏色的變化，若沒有顏色變化，繼續(xù)水浴培養(yǎng)30min做最終觀察。結(jié)果報(bào)告。五、操作步驟嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法判斷方法在白色背景前從側(cè)面和地步觀察小試管內(nèi)培養(yǎng)基顏色。保持培養(yǎng)基原有的紫色為陽性結(jié)果，培養(yǎng)基編程黃色或黃綠色為陰性結(jié)果，顏色處于二者之間，為可疑結(jié)果。對于可疑結(jié)果應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)30min再進(jìn)行最終觀察。如果培養(yǎng)基顏色仍然處于黃色-紫色之間，表示抗生素濃度接近方法的最低檢出限，此時(shí)建議重新檢測一次.六、報(bào)告嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制法報(bào)告：最終觀察室，培養(yǎng)基依然保持原有的紫色，可疑報(bào)告為抗生素殘留陽性。培養(yǎng)基變?yōu)槌庶S色或黃綠色時(shí)，可以報(bào)告為抗生素殘留陰性。本方法檢測幾種常見抗生素的最低檢出限為：青霉素3μg/l，鏈霉素50μg/l，慶大霉素30μg/l，卡那霉素50μg/l。乳中脂肪的測定

基礎(chǔ)知識乳脂肪的存在形式一乳脂肪的化學(xué)組成二國標(biāo)解讀四脂肪測定的意義三一、乳脂肪的存在形式脂肪球及脂肪球膜乳脂是由漂浮在乳中的大小不同的粒子構(gòu)成的眾多小球。這些小球是脂肪球。脂肪球的外面包有一層乳清或蛋白質(zhì)薄膜，具有保持乳濁液穩(wěn)定的作用，靜止時(shí)即使脂肪球上浮分層，仍能保持脂肪球的分散狀態(tài)。在機(jī)械攪拌或化學(xué)物質(zhì)作用下，脂肪球膜遭到破壞后，乳脂肪球才會互相聚結(jié)在一起。利用這一原理生產(chǎn)奶油，并可測定乳的含脂率。乳中脂肪的測定脂肪球膜的結(jié)構(gòu)圖1-脂肪2-結(jié)合水3-蛋白質(zhì)4-乳漿

二、乳脂肪的化學(xué)組成乳中脂肪成分復(fù)雜，甘油三酯是其主要成分，約占乳脂肪的97%～98%，它和極少量的甘油二酯和甘油單酯及游離脂肪酸共存于乳中。乳中的脂肪酸分為三類：水溶性揮發(fā)性脂肪酸，如丁酸、乙酸等；非水溶性揮發(fā)性脂肪酸，如十二碳酸等；非水溶性不揮發(fā)性脂肪酸，如十四碳酸、二十碳酸、十八碳烯酸和十八碳二烯酸等。乳中脂肪的測定乳中脂類物質(zhì)的平均含量

脂類質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）甘油三酯97～98甘油二酯0.3～0.6甘油單酯0.02～0.04游離脂肪酸0.1～0.4游離固醇0.2～0.4固醇脂微量磷酸脂0.2～1.0碳水化合物微量三、脂肪測定的意義脂肪是食品中重要的營養(yǎng)成分之一。脂肪可為人體提供必需脂肪酸；脂肪是一種富含熱能營養(yǎng)素，是人體熱能的主要來源，每克脂肪在體內(nèi)可提供37.62kJ(9kcal)熱能，比碳