菌落總數(shù)測(cè)試卡用凝膠培養(yǎng)基和顯色劑的優(yōu)化

菌落總數(shù)測(cè)試卡用凝膠培養(yǎng)基和顯色劑的優(yōu)化郭登峰;王羚佳;舒曉夢(mèng);楊瀟;張偉;張廣峰【摘要】篩選適宜的冷水溶解凝膠,優(yōu)化凝膠培養(yǎng)基成分和顯色劑濃度，制備菌落總數(shù)測(cè)試卡并與傾注培養(yǎng)法進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)比較.結(jié)果顯示:卡拉膠和CMC以2:1的質(zhì)量比混合、復(fù)合凝膠粉和培養(yǎng)基粉以2:1的質(zhì)量比混合、TTC實(shí)際濃度為0.025mg/mL時(shí)制備的菌落總數(shù)測(cè)試卡具有較好的檢測(cè)效果，與傾注法比較無(wú)顯著差異.說(shuō)明該方案優(yōu)化的凝膠與顯色劑配方可用于制備菌落總數(shù)測(cè)試卡.【期刊名稱(chēng)】《食品與機(jī)械》【年(卷)，期】2018(034)003【總頁(yè)數(shù)】5頁(yè)(P82-85,145)【關(guān)鍵詞】菌落總數(shù);快速檢測(cè)卡;凝膠;TTC【作者】郭登峰;王羚佳;舒曉夢(mèng);楊瀟;張偉;張廣峰【作者單位】西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039;西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039;西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039;西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039;成都瑞琦科技實(shí)業(yè)股份有限公司，四川成都610041;西華大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，四川成都610039【正文語(yǔ)種】中文菌落總數(shù)是反映食品被微生物污染狀況和新鮮程度的重要指標(biāo)［1］。目前菌落總數(shù)快速檢測(cè)方法包括顯色培養(yǎng)基法、ATP生物熒光法、微熱量法、阻抗法、近紅外光譜技術(shù)和快速檢測(cè)卡片法等［2-4］?？焖贆z測(cè)卡片(下文統(tǒng)一稱(chēng)為檢測(cè)卡)與傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)平板檢測(cè)相比，因其省略了培養(yǎng)基制作、消毒環(huán)節(jié)，使得勞動(dòng)強(qiáng)度大幅減輕；還具有體積小、便于攜帶儲(chǔ)存、檢測(cè)周期短、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)［5-6］，從而被運(yùn)用于快速檢測(cè)的領(lǐng)域，極大地簡(jiǎn)化了對(duì)微生物總數(shù)檢測(cè)的程序。從1955年德國(guó)學(xué)者FJ.Forg發(fā)明了快速檢測(cè)大腸菌群的紙片法以來(lái)［7］，檢測(cè)卡已經(jīng)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展。目前菌落檢測(cè)卡主要分為濾紙、無(wú)紡布和冷水溶性凝膠3種類(lèi)型［8］。其中濾紙和無(wú)紡布雖然成本低廉，但是由于孔隙大，保水性差，不利于菌體生長(zhǎng)，導(dǎo)致菌落計(jì)數(shù)不準(zhǔn)確。與前兩者相比，冷水溶性凝膠卻有著穩(wěn)定性好、透明度高、易挑菌、菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)［9-10］［11］9-14。而在國(guó)內(nèi)夕卜應(yīng)用最為廣泛的是美國(guó)3M公司的PetrifilmTM菌落總數(shù)檢測(cè)卡，由于具有較高的可靠性，曾被納入中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)［12］,但是昂貴的價(jià)格，也限制了其在中國(guó)一般實(shí)驗(yàn)室和企業(yè)的大規(guī)模使用。因此研究具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的冷水溶性凝膠菌落檢測(cè)卡片，對(duì)于降低檢測(cè)卡的使用成本，促進(jìn)微生物指標(biāo)檢測(cè)的廣泛開(kāi)展，提升食品安全具有重要意義。本研究主要通過(guò)對(duì)常見(jiàn)的冷水溶性凝膠劑［卡拉膠、黃原膠、瓜爾膠、刺槐豆角、聚丙烯酸鈉、羧甲基纖維素(CMC)］進(jìn)行篩選組合、探索凝膠劑配方及其與培養(yǎng)基混合比例、優(yōu)化顯色劑的添加量等來(lái)提升水冷凝膠測(cè)試卡的使用性能，為新型菌落總數(shù)檢測(cè)卡的研發(fā)提供數(shù)據(jù)參考。1材料與方法1.1試驗(yàn)材料與儀器2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC):AR級(jí)，上海馨晟試化工科技有限公司；胰蛋白腺、酵母提取物：AR級(jí)，西班牙OXOID公司；氯化鈉、瓜爾膠、卡拉膠、黃原膠、CMC、聚丙烯酸鈉：AR級(jí)，成都科龍化工試劑廠；乙醇：AR級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；全自動(dòng)高溫蒸汽滅菌鍋：G154DWS型，致微(廈門(mén))儀器有限公司；電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱：SGSP-02型，黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司；混合型球磨儀：MM400型，德國(guó)RETSCH(萊馳)公司；萬(wàn)分之一電子天平：TB-214型，美國(guó)DENVERINSTRUMENT(丹佛儀器)公司；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：UV2400型，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；pH儀：MP511型，上海三信公司；質(zhì)構(gòu)儀：TA?XT2i型，英國(guó)SMS公司。1.2試驗(yàn)菌種大腸桿菌(LE392)、皈崎腸桿菌(ATCC51329)、福氏志賀菌(CMCC51252)、金黃色葡萄球菌(ASI1861)、沙門(mén)菌(ASI1859)、銅綠假單胞菌(CICC10204)、糞鏈球菌(CMCC32220):西華大大學(xué)食品安全實(shí)驗(yàn)室保存。1.3方法1.3.1菌種活化與菌懸液的制備將各菌種分別于LB培養(yǎng)基中震蕩培養(yǎng)2h活化，并涂布于LB平板上并于37°C倒置培養(yǎng)12h，挑取單菌落轉(zhuǎn)入LB液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)4h，將各菌種菌液等比例混合后稀釋103倍，待用。1.3.2測(cè)試卡凝膠培養(yǎng)基粉的制備LB培養(yǎng)基(胰蛋白腺10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g充分混合)與凝膠粉按一定比例充分混合后，經(jīng)超微粉碎1min，并用紫外線進(jìn)行殺菌待用。1.3.3測(cè)試片法將制備好的測(cè)試卡凝膠培養(yǎng)基粉黏附在上下層透明塑料卡上。吸取1mL新鮮制備的菌液，翻開(kāi)測(cè)試片上層，均勻滴于測(cè)試片中央，小心蓋上上層膜，輕輕壓平使樣液充滿(mǎn)測(cè)試片，靜置5min，待凝膠固化后于37C培養(yǎng)24h,計(jì)數(shù)紅色菌落［13-14］。1.3.4凝膠的吸水率、保水率測(cè)定稱(chēng)取1.00g膠粉置于燒杯中，加入500.00g蒸餾水混勻，放置5min使其充分溶脹成膠，用100目篩過(guò)濾，精密稱(chēng)定濾液重量。吸水率按式(1)計(jì)算：(1)式中：A——吸水率，%；M1——加入蒸餾水質(zhì)量，g；M2——濾出蒸餾水質(zhì)量，g；M0——稱(chēng)取的凝膠粉水質(zhì)量，g。稱(chēng)取1.00g膠粉置于潔凈燒杯中，加入500.00g蒸餾水混勻，放置5min使其充分溶脹成膠，棄去多余水分，再精密稱(chēng)取凝膠重量，將其置于37°C恒溫培養(yǎng)箱中，分別放置8,24h后精密稱(chēng)定重量。按式(2)計(jì)算保水率。(2)式中：C——保水率，%；M1——放置不同時(shí)間后的凝膠質(zhì)量，g；M0——溶脹成凝膠后的質(zhì)量，g。1.3.5水?dāng)U散速度與成膠性評(píng)價(jià)在透明塑料卡上繪制一個(gè)直徑10cm的圓，將成膠劑黏附在透明塑料卡上，向圓心滴入1mL的蒸餾水并開(kāi)始計(jì)時(shí)，水?dāng)U散至圓形邊緣時(shí)停止計(jì)時(shí)，滴入水后靜置5min，觀察是否凝固形成凝膠。1.3.6凝膠物性分析凝膠劑制成厚度為15mm的凝膠，按照ISO9665方法測(cè)試膠體物性。即在質(zhì)構(gòu)儀上選用P/0.5R柱狀探頭，以壓縮模式檢測(cè)，測(cè)前速度1.0mm/s，測(cè)試速度1.0mm/s，測(cè)后速度1.0mm/s，刺入深度10mm,數(shù)據(jù)采集速率400pps;觸發(fā)力2g。以刺入過(guò)程中測(cè)得的最大力量為凝膠強(qiáng)度，以達(dá)到最大力量時(shí)的刺入距離表征凝膠彈性。在穿刺中力量和距離越大，表明凝膠越有韌性和彈性。1.3.7凝膠劑組成優(yōu)化將根據(jù)吸水率、保水率及成膠情況優(yōu)選出的凝膠進(jìn)行兩兩組合，評(píng)價(jià)其水?dāng)U散速度和成膠性。選擇擴(kuò)散速度和成膠性好的凝膠組合，并進(jìn)一步進(jìn)行物性比較，以篩選出最優(yōu)的凝膠劑組成。1.3.8凝膠與培養(yǎng)基的比例優(yōu)化將優(yōu)化過(guò)的混合凝膠粉與培養(yǎng)基分別按1:1,1:2,2:1的質(zhì)量比混勻，加入蒸餾水制凝膠，在37°C下培養(yǎng)0,12,24h后，參考吳許文[11]33的方法測(cè)定其pH,在37C下培養(yǎng)24h后測(cè)定凝膠物性，并參考吳許文[11]35的方法在500nm下測(cè)其透光度。選擇可在37C恒溫條件下pH穩(wěn)定、凝膠強(qiáng)度合適、透光率好、可穩(wěn)定凝固、成膠無(wú)氣泡無(wú)褶皺黏附，菌落生長(zhǎng)正常、分布均勻、清晰可辨的培養(yǎng)基凝膠組合。1.3.9TTC加入量的優(yōu)化根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[15-17],TTC在培養(yǎng)基中濃度超過(guò)0.100mg/mL時(shí)抑菌較明顯，低于0.020mg/mL時(shí)顯色作用不明顯。因此選擇TTC實(shí)際濃度0.020,0.025,0.030,0.035,0.040mg/mL進(jìn)行TTC加入量?jī)?yōu)化。試驗(yàn)中，先配制濃度為0.040,0.050,0.060,0.070,0.080mg/mL的TTC溶液，滅菌后分別與稀釋105倍的菌液按1:1體積比混合后，接種于測(cè)試卡上并于37C培養(yǎng)24h后計(jì)數(shù)觀察。選擇顯色明顯、易于計(jì)數(shù)且對(duì)微生物無(wú)抑制作用的TTC濃度。1.3.10測(cè)試卡片法與傾注培養(yǎng)法對(duì)比將混合菌液依次稀釋103,104,105,106倍，分別采用測(cè)試卡片法與傾注培養(yǎng)法（按GB/T4789.2—2016執(zhí)行）進(jìn)行檢測(cè)，比較二者菌落總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果。2結(jié)果與討論2.1冷水溶凝膠的基本性能凝膠吸水率與保水率的優(yōu)良將直接影響到測(cè)試卡的測(cè)試效果。吸水率優(yōu)良的凝膠可以使水快速地在測(cè)試卡上擴(kuò)散，不僅縮短操作時(shí)間，還能保證菌落擴(kuò)散均勻［18］。保水率優(yōu)良的凝膠將有效地保持測(cè)試卡上的水分不流失蒸發(fā)，從而為測(cè)試卡上的微生物提供一個(gè)穩(wěn)定合適的生長(zhǎng)環(huán)境。從凝膠劑吸水率和保水率試驗(yàn)結(jié)果可知(表1)，各凝膠吸水率大小順序?yàn)椋壕郾┧徕c＞黃原膠＞CMC＞瓜爾膠〉卡拉膠。其中聚丙烯酸鈉的吸水率太大，并且吸濕性極強(qiáng)，暴露在空氣中時(shí)很容易結(jié)塊黏連，不適合單獨(dú)用于測(cè)試卡的制作［19］。對(duì)各凝膠培養(yǎng)8h后，凝膠保水率差別較小；24h后，保水率發(fā)生顯著變化，各凝膠之間的差別也較明顯，各凝膠保水率大小順序?yàn)椋壕郾┧徕c〉瓜爾膠＞CMC＞黃原膠〉卡拉膠。表1凝膠劑的吸水率與保水率十Table1Waterabsorptionandwaterretentionofgels(n=3)%凝膠名稱(chēng)吸水率保水率8h24h卡拉膠13.69±0.51e74.00±0.83b40.43±0.63d黃原膠115.28±1.09b74.57±0.77b41.57±0.69d瓜爾膠27.09±0.32d74.71±0.47b48.14±0.42bCMC42.75±1.78c75.86±0.80a43.29±0.75c聚丙烯酸鈉436.62±0.54a73.14±0.38c51.43±0.85a十同列不同字母表示差異顯著(P＜0.05)。由表2可知，卡拉膠、聚丙烯酸鈉、瓜爾膠均可以快速吸水，使水在膠粉內(nèi)快速擴(kuò)散；其中以卡拉膠擴(kuò)散速度最快，瓜爾膠次之，聚丙烯酸鈉最慢。但在黃原膠與CMC中水?dāng)U散極為緩慢。CMC、聚丙烯酸鈉、黃原膠可完全凝固成膠，但黃原膠凝固后氣泡較多；卡拉膠、瓜爾膠未能完全凝固，成流動(dòng)狀態(tài)。此夕b各凝膠劑中黃原膠成本最高、卡拉膠和瓜爾膠次之、CMC與聚丙烯酸鈉最低。表2凝膠劑的水?dāng)U散速度和成膠情況Table2Gelwaterdiffusionspeedandgelconditions凝膠劑種類(lèi)水?dāng)U散時(shí)間/s成膠情況卡拉膠48未完全凝固黃原膠>180完全凝固，但膠體有氣泡瓜爾膠92未完全凝固聚丙烯酸鈉134完全凝固CMC>180完全凝固凝膠劑基本性能試驗(yàn)的結(jié)果表明，選用以上任何單一凝膠劑均不能滿(mǎn)足菌落總數(shù)測(cè)試卡用冷水溶性凝膠的要求。綜合考慮各凝膠劑的吸水率、保水率、水?dāng)U散速度、成膠狀況和成本，需將凝膠進(jìn)行組合優(yōu)化。2.2凝膠組合優(yōu)化從表3可知，由于水不易在黃原膠膠粉內(nèi)擴(kuò)散，故需在黃原膠中加入卡拉膠以增加其水?dāng)U散性，但加入卡拉膠后不能形成可凝固的凝膠；將聚丙烯酸鈉分別與CMC、瓜爾膠進(jìn)行混合，但混合后擴(kuò)散速率較慢且極易吸潮聚團(tuán)，不能成膠；只有卡拉膠與CMC、瓜爾膠混合時(shí)具有較好的水?dāng)U散速度和成膠性。比較卡拉膠與CMC、瓜爾膠組合的凝膠物性發(fā)現(xiàn)(表4)，卡拉膠與CMC組合的凝膠物性顯著好于卡拉膠與瓜爾膠組合，且卡拉膠與CMC組合的成本更為經(jīng)濟(jì)，綜合考慮選取卡拉膠與CMC按2:1的質(zhì)量比混合為宜。表3不同凝膠組合的水?dāng)U散速度和成膠情況Table3Gelcombinationwaterdiffusionspeedandgelcombinationconditions凝膠組合(質(zhì)量比)水?dāng)U散時(shí)間/s成膠效果卡拉膠：黃原膠(2:1)>180水不易擴(kuò)散,邊緣不能成膠卡拉膠：瓜爾膠(3:1)71水易擴(kuò)散，成膠性好卡拉膠：CMC(2:1)67水易擴(kuò)散，成膠性好卡拉膠:聚丙烯酸鈉(3:1)133易聚團(tuán)，不能成膠黃原膠：瓜爾膠(3:1)>180水不易擴(kuò)散,邊緣不能成膠黃原膠：CMC(1:1)>180水不易擴(kuò)散，邊緣不能成膠黃原膠：聚丙烯酸鈉(3:1)>180易聚團(tuán)，不能成膠瓜爾膠：CMC(4:1)>180水不易擴(kuò)散，邊緣不能成膠瓜爾膠：聚丙烯酸鈉(3:1)>180易聚團(tuán)，不能成膠CMC:聚丙烯酸鈉(3:1)>180易聚團(tuán)，不能成膠表4不同凝膠組合的物性比較十Table4Gelcompositionpropertiescomparison(n=3)凝膠組合(質(zhì)量比)凝膠強(qiáng)度/g凝膠彈性/mm卡拉膠：瓜爾膠(3：1)141.55±15.57b4.01±0.63b卡拉膠：CMC(2:1)211.35±16.24a5.94±1.05a十同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。2.3培養(yǎng)基與凝膠的比例優(yōu)化培養(yǎng)基與凝膠的混合比例將直接影響到菌落檢測(cè)的效果。適合的比例才能使其在加水后迅速溶解形成凝膠培養(yǎng)基，滿(mǎn)足微生物正常生長(zhǎng)代謝的需求，并起到承載微生物的作用?；旌夏z粉與培養(yǎng)基分別按1:2,1:1,2:1的質(zhì)量比混勻制成培養(yǎng)基凝膠。由表5可知，在37°C下不同時(shí)間點(diǎn)的pH基本保持穩(wěn)定并成中性，表明培養(yǎng)溫度、混合比例和培養(yǎng)時(shí)間的改變對(duì)pH影響不大。而在37C恒溫培養(yǎng)24h后，按照上述混合比例制作的培養(yǎng)基凝膠的物性、透光度、成膠效果和菌落生長(zhǎng)狀況均有較大的差異(表6),其中隨著混合膠粉比例的增加，培養(yǎng)基凝膠物性指標(biāo)和透光度都相應(yīng)地提高，以質(zhì)量比2:1制備的培養(yǎng)基凝膠在物性指標(biāo)和透光度上顯著優(yōu)于其他2組。此外雖然制作的培養(yǎng)基凝膠均能在5min內(nèi)凝固成膠，但在37C下培養(yǎng)24h后，以1:1,1:2質(zhì)量比制備的培養(yǎng)基凝膠出現(xiàn)了部分融化，嚴(yán)重影響菌落生長(zhǎng)。而以2:1質(zhì)量比制備的培養(yǎng)基凝膠仍然保持凝固狀態(tài)，整體透明度好且菌落生長(zhǎng)正常、分布均勻易于計(jì)數(shù)。因此，以混合凝膠粉與培養(yǎng)基按質(zhì)量比2:1混合為最優(yōu)。表537C恒溫培養(yǎng)期間凝膠的pHTable5pHofgelduringcultivation(n=3)時(shí)間/h混合凝膠：培養(yǎng)基(質(zhì)量比)1:21:12:106.91±0.356.89±0.286.83±0.33126.87±0.406.92±0.356.94±0.31247.01±0.336.87±0.416.91±0.37表6不同比例凝膠的物理特性及菌落生長(zhǎng)情況十Table6Physicalpropertiesofdifferentproportionsofgelsandcolonygrowth(n=3)混合凝膠：培養(yǎng)基質(zhì)量比凝膠強(qiáng)度/g凝膠彈性/mm透光度/%37。。恒溫24h后的成膠及菌落生長(zhǎng)情況1:274.1±5.57c2.01±0.63c18.87±0.77c凝膠出現(xiàn)融化，氣泡多，透光度差,菌落極少1:197.1±7.46b3.78±0.33b24.81±1.56b凝膠出現(xiàn)融化，菌落極少2:1111.5±9.24a4.94±0.75a37.65±0.91a凝膠保持凝固,整體透明，菌落生長(zhǎng)正常且均勻十同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。2.4TTC的含量?jī)?yōu)化TTC對(duì)菌落的顯色相對(duì)于其他顯色劑更為靈敏準(zhǔn)確，而且在常溫下它與菌落形成的顏色在空氣中十分穩(wěn)定，可以保存較長(zhǎng)時(shí)間，方便計(jì)數(shù)。但其濃度對(duì)微生物生長(zhǎng)卻有顯著影響，需要對(duì)其使用濃度進(jìn)行優(yōu)化［20］。如表7所示，當(dāng)TTC濃度在0.025mg/mL以下時(shí)，菌落生長(zhǎng)分布均勻且與對(duì)照組無(wú)顯著差異；但TTC濃度超過(guò)0.030mg/mL時(shí)，菌落數(shù)量顯著低于對(duì)照組，表明微生物的生長(zhǎng)受到抑制。而當(dāng)TTC濃度為0.025mg/mL時(shí)對(duì)菌落的染色比0.020mg/mL更加清晰可辯，暴露在空氣中也更加穩(wěn)定。因此，以TTC在培養(yǎng)基中實(shí)際濃度0.025mg/mL為最優(yōu)加入量。表7TTC濃度對(duì)菌落總數(shù)的影響十Table7TotalnumberofcoloniesatdifferentconcentrationsofTTC(n=3)TTC濃度/(mg-mL-1)0.0000.0200.0250.0300.0350.040菌落數(shù)/CFU52±8a45±6a49±4a41±3b36±4b33±4c十同行不同字母表示差異顯著(P<0.05)。2.5與平板法的檢測(cè)比較采用最優(yōu)條件的測(cè)試卡片法與傾注培養(yǎng)法進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)二者在菌落生長(zhǎng)的形態(tài)上無(wú)明顯差異。由表8可知，2種方法在各稀釋濃度上的菌落計(jì)數(shù)結(jié)果并無(wú)顯著差異。表82種不同方法的菌落數(shù)Table8Numberofcoloniesintwodifferentways(n=3)CFU/mL培養(yǎng)方法稀釋倍數(shù)103104105106傾注培養(yǎng)法>400364±2247±55±1測(cè)試卡片>400387±2648±26±13結(jié)論采用卡拉膠和CMC在2:1的質(zhì)量比下制成混合凝膠劑，再與培養(yǎng)基粉以2:1的質(zhì)量比混合制成的凝膠培養(yǎng)基用于制備菌落總數(shù)測(cè)試卡片具有較好的效果，在TTC濃度為0.025mg/mL時(shí)，菌落顯色效果最佳且不會(huì)對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。在該條件下采用測(cè)試卡片法與傾注培養(yǎng)法對(duì)微生物菌落總數(shù)的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異。參考文獻(xiàn)姚景慧，崔生輝，付萍，等.菌落總數(shù)檢測(cè)紙片的比較試驗(yàn)[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2000(3):76-77.程金權(quán)，胡繼貴.食品中菌落總數(shù)快速檢測(cè)研究進(jìn)展[J].食品與發(fā)酵科技,2014,50(6):1-5.熊海燕.菌落總數(shù)檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J].糧食與油脂,2010(4):42-44.HAWRONSKYJJane-marie,HOLAHJohn.ATP:auniversalhygienemonitor[J].TrendsinFoodScience&Technology,1997,8(3):79-84.孫永.食品衛(wèi)生微生物快速測(cè)試卡的研制[D].武漢：中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所,2007:15-21.SCHOELLERNP,INGHAMSC.ComparisonoftheBaird-Parkeragarand3MTMPetrifilmTMrapidS.aureuscountplatemethodsfordetectionandenumerationofStaphylococcusaureus[J].Food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