動物血液學(xué)檢查-血液及唾液收集方法

采血、唾液收集一、目的要求1、不同的檢查抗凝劑選擇；2、不同動物采血部位及保定方法；3、采血質(zhì)量評估4、唾液收集技術(shù)二、設(shè)備材料實驗動物、不同染色的抗凝管、頭皮針、注射器、酒精棉球、干棉球。一、不同的檢查需求抗凝劑選擇；

1、物種2、檢查項目蓋子顏色抗凝劑類型用途紫色（Lavender）EDTA全血細(xì)胞分類計數(shù)，血小板計數(shù)，血涂片綠色肝素

非哺乳動物的全血細(xì)胞分類計數(shù)；用于一些儀器生化和電解質(zhì)檢測藍(lán)色枸櫞酸鈉凝血測試紅色無任何試劑生化檢查/血清蛋白電泳，血清測試灰色/黃色（含分離膠幫助快速分離血清）無任何抗凝劑可能影響離子和激素的檢查，藥物的濃度的檢查，能夠擴散到凝膠里面。表1-1-1血液收集管抗凝（哺乳動物最好用EDTA，且可以保持細(xì)胞的形狀，到細(xì)胞超出保質(zhì)期為止；非哺乳動物可以用肝素抗凝，一部分非哺乳動物用EDTA抗凝可能引起紅細(xì)胞裂解；能用EDTA抗凝最好用EDTA抗凝，肝素抗凝可能遺留在細(xì)胞上）。非哺乳動物雞、鴨、鳥類普通市面上的CBC都不能用，為什么？紅細(xì)胞有核、血小板也有核。二、不同動物采血部位及保定方法；

Methodofrestrainingpigsweighinglessthan20kgforbloodcollectionfromtheanteriorvenacava(circle).Locationofthecephalicveinisindicatedbythe.Source:DeweyandStraw(2006).小于20kg體重豬的前腔靜脈采血點。虛線為頭靜脈。Pigrestraintforbloodsamplingfromastandingpig.Thelowercircleindicatesthesiteforsamplingfromtheanteriorvenacava;theuppercircleindicatesthesiteforsamplingfromthejugularvein.Source:DeweyandStraw(2006).保定豬收集血液，頸部上面的是頸靜脈采血點，下為前腔靜脈采血點。耳靜脈采血（EarVeins）Earveinsofapigraisedbyarubberbandplacedonthebaseoftheear.Source:DeweyandStraw橡皮筋扎耳根，采集耳緣靜脈血。還有一些其他的靜脈血的收集方法：尾部采血、股靜脈采血、頭靜脈采血、心臟采血等都不太常見。前腔靜脈采血(AnteriorVenaCava)Thepig’srightjugulargrooveisidentified,andtheneedleisinsertedjustcranialtothethoracicinlet.Theneedleisinsertedaimingtothetopoftheoppositeshoulder.Thisisapproximatelyata30°anglefromthemedianand90°anglefromtheneckline(linefromthoracicinlettothehead).Thepig’srightsideisusedforsamplecollectionastherightvagusnerveprovideslessinnervationtotheheartanddiaphragmthantheleftvagusnerve.Vagusnervepuncturecancausethepigtostartshowingsignsofdyspnea,cyanosis,andconvulsions(DeweyandStraw2006).豬右側(cè)頸靜脈溝，針尖對準(zhǔn)左肩做高點。與中線的夾角大約為30°。一般

采血在右側(cè)，右側(cè)迷走神經(jīng)分布到心臟和膈上的比較少。刺到迷走神經(jīng)可能引起豬表現(xiàn)出呼吸困難、發(fā)紺和抽搐的癥狀。頸靜脈采血(JugularVein)Toreachthejugularvein,theprocedureissimilartothatoftheanteriorvenacavawiththeneedlebeinginsertedabout5cmcraniallyfromthethoracicinlet。Therightsideofthepigisstillpreferred.Thejugularveinislocatedmoresuperficialthantheanteriorvenacavabutcannotbevisualizedasinmanyotherspecies.Theprocessstillrequiresablindstick.頸靜脈采血與前腔靜脈相似，進針點向上一點，更淺表一點，不過與其他物種類似同樣不可見。壓迫回心端可見。唾液樣品收集（OralFluidsCollection）Oralfluidisamixtureofsalivaandoralmucosaltransudates.Oralfluidscancontainbothorganismsandantibodiesofinterest。唾液樣品收集在獸醫(yī)臨床中應(yīng)用更加廣泛。唾液樣品混合有唾液和口腔粘膜滲出物。唾液中包含有微生物和抗體。唾液收集簡單且使用。唾液檢測，豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)檢查，豬圓環(huán)病毒2（PCV2）,豬支原體肺炎，豬流感病毒。收集步驟：1、Acottonropeishungfromapenbytyingitwithaknot.Acottonropeisusedbecauseitishighlyabsorbentwithgreateryield.Thesuggestedropesizesare1.3cm(1/2in.)fornurseryor1.6cm(5/8in.)forgrow-finishpigs.Ropesshouldbecuttothecorrectlengthsothattheyreachthetopoftheshouldersofthepigs.Aspigschewtheropes,theropeswillunravelandstretch,solongerlengthsarenotrecommended.棉花繩掛在豬圈上固定好，保育豬1.3cm育肥豬1.6cm,繩長到達豬肩膀，豬咀嚼繩子時，繩子不松開不拉長，不要太長。2.Allowthepigsinthepentochewontheropefor20–30minutes.（讓豬咀嚼繩子20—30min)3.Extracttheoralfluidsfromtheropebyinsertingthebottom(wet)endoftheropeinacleanplasticbag(ordisposableplasticboot).Squeezetheropesothatfluidaccumulatesinoneofthecornersofthebag.Cutthecornerofthebagandcollectthefluidintoasampletube.Ideally,atleasta4-mLsamplewillbeobtained.將棉花繩濕的一端，放入干凈的自封袋中，擠壓棉花繩上的液體到集中到自封袋的一角內(nèi)，剪袋子一角收集液體到試管中，至少能搜集到4mL樣品。Thesamplethenneedstoberefrigerateduntiltesting.Thesamplemaybecentrifugedfor10minutesifitcontainslargenumberofparticulates.Thesampleneedstobeidentifiedasanoralfluidsamplewhensubmittingfortestingasspecialtestingprotocolsneedtobeusedbythediagnosticlaboratory.收到的樣品需要冷藏，直到測試。如果樣品中有大量的顆粒，需要離心10min，送檢需要標(biāo)注唾液樣品。雞采血1、翅下靜脈采血。最常見。2、心臟采血，不常見血液樣品質(zhì)量評價1、血清與血漿加入抗凝劑EDTA（紫色蓋帽），肝素（綠色蓋帽），枸櫞酸鈉（藍(lán)色蓋帽）獲得的上清為血漿；不加入任何的試劑或者加入分離膠（紅色蓋帽、灰色、黃色分離膠）幫助快速分離到的上清為血清。正常分離犬貓的血清應(yīng)該是清澈的，無色的，然而遵從馬和反芻動物分離到的正常血清是淺黃色的。采血過程，血液是否發(fā)生凝固；檢查結(jié)果懷疑采血過程可能發(fā)生凝固。2、血清質(zhì)量圖1-1-4上面是正常的血清樣品，和血清中混合的物質(zhì)可能干擾一些化學(xué)分析。從左到右是正常的貓血清，正常的馬血清，發(fā)生溶血的狗血清，狗高高膽紅素血清，馬高膽紅素血，狗有血脂并帶有輕度的溶血。一、目的要求

掌握顯微鏡油鏡的使用及保養(yǎng)方法；二、實驗原理

因光線在香柏油中的折射率(n=1.515)與在玻璃中的折射率(n=1.52)相近，可減少因折射而射入鏡頭外的光線，提高了視野的亮度，使物象明亮清晰。三、設(shè)備材料

顯微鏡、油、擦鏡紙、血涂片/細(xì)菌染色標(biāo)本片。四、操作方法

(一)顯微鏡油鏡的使用1、油鏡的識別

油鏡是顯微鏡物鏡的一種，因使用時必須浸于油內(nèi)，故稱油鏡。

油鏡與其他物鏡有以下區(qū)別：(1)油鏡油鏡頭長度是所有物鏡中最長的。

(2)油鏡頭上標(biāo)有其放大倍數(shù)100×，1.25或oil等字樣。(3)顯微鏡的鏡頭一般用不同顏色的線圈區(qū)別，油鏡一般刻有黑色線圈或白色線圈。使用時應(yīng)先熟悉一下油鏡頭上的線圈顏色，以防用錯物鏡。2、使用方法(1)位置

使用顯微鏡油鏡時,必須將顯微鏡端正直立桌上,不得將鏡臂彎曲,使載物臺傾斜，以免油流溢，影響觀察，污染臺面。(2)對光

一般用低倍鏡或高倍鏡觀察物象，需下降集光器并適當(dāng)?shù)乜s小光圈，使光度減弱；若用油鏡檢查染色標(biāo)本時,光度宜強。應(yīng)將顯微鏡亮度開關(guān)調(diào)至最亮，光圈完全打開，集光器上升至與載物臺相平。

（3）調(diào)焦距

A、將標(biāo)本片放載物臺上，用標(biāo)本推進器固定，將欲檢部分移至物鏡下.先用低倍鏡找出標(biāo)本的位置，然后用高倍鏡檢查。提高鏡筒，在標(biāo)本的待檢部位滴鏡油一滴，再換油鏡觀察.B、轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器使載物臺徐徐上升（或使鏡筒漸漸下降）,直至油鏡頭浸沒至油中.此時眼睛應(yīng)從側(cè)面觀察，以免壓碎標(biāo)本片和損壞鏡頭.C、然后雙眼移至接目鏡，一面從接目鏡觀察，一面反方向緩慢地轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦螺旋（下降載物臺，或上升鏡筒），當(dāng)出現(xiàn)模糊物象時，換用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，轉(zhuǎn)動至物象清晰為止.若上調(diào)粗準(zhǔn)焦螺旋時,鏡筒已升到油浸鏡頭離開油滴,仍不能發(fā)現(xiàn)被檢目的物,須重新調(diào)節(jié).（4）保養(yǎng)

油鏡使用完畢,提升鏡筒，把油鏡轉(zhuǎn)離光軸，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的。

擦拭時要順鏡頭的直徑方向，不要沿鏡頭的圓周方向擦.

玻片標(biāo)本上的油也要進行清潔。

將低倍鏡轉(zhuǎn)至中央或?qū)⑽镧R轉(zhuǎn)成“八”字形，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，使物鏡頭與載物臺接觸，下降聚光鏡。將顯微鏡用綢布蓋好后裝入鏡箱，置于陰涼干燥處五、注意事項

1、油鏡比高倍物鏡的工作距離短得多,最短的只有0.1mm,調(diào)焦操作時須特別細(xì)心,當(dāng)油鏡頭與標(biāo)本片