全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2015年修訂版).-重慶市第三人民醫(yī)院重慶中

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）.-重慶市第三人民醫(yī)院重慶中（常用版）(可以直接使用，可編輯完整版資料，歡迎下載）

全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）.-重慶市第三人民醫(yī)院重慶中（常用版）(可以直接使用，可編輯完整版資料，歡迎下載）全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范NationalGuidelineforDetectionofHIV/AIDS（2021年修訂版）中國(guó)疾病預(yù)防控制中心二○一五年十二月前言艾滋病在我國(guó)的流行已數(shù)十年，隨著感染者和臨床病人的不斷增加、感染人群的變化，艾滋病檢測(cè)工作量逐漸加大，對(duì)監(jiān)測(cè)和檢測(cè)的需求也不斷增加，承擔(dān)艾滋病檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室已遍及全國(guó)各級(jí)醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、采供血、婦幼保健機(jī)構(gòu)，出入境檢驗(yàn)檢疫、軍隊(duì)等各個(gè)系統(tǒng)。為了盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨詢、治療，同時(shí)為適應(yīng)基層艾滋病檢測(cè)工作需求，在新的形勢(shì)下，根據(jù)《關(guān)于艾滋病抗病毒治療管理工作的意見》、《中國(guó)預(yù)防與控制艾滋病中長(zhǎng)期規(guī)劃（1998—2021年）》、《中國(guó)遏制與防治艾滋病十二五行動(dòng)計(jì)劃的通知（國(guó)辦發(fā)[2021]4號(hào)）》、“四免一關(guān)懷”等國(guó)家艾滋病防治重要方針政策和十三五防治工作重點(diǎn)，在廣泛征求各省、市疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)意見的基礎(chǔ)上，在中華人民共和國(guó)衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)艾滋病專家及省級(jí)專家的參與下，中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心對(duì)《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2021年版）》進(jìn)行修改、增補(bǔ)和完善，制定出《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2021年版）》（以下簡(jiǎn)稱《規(guī)范》），使其既能滿足目前艾滋病檢測(cè)工作的實(shí)際需求，又能體現(xiàn)檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展。本次《規(guī)范》修訂工作立足于我國(guó)目前檢測(cè)狀況，結(jié)合發(fā)達(dá)國(guó)家使用的指南，主要對(duì)以下幾個(gè)方面內(nèi)容進(jìn)行了修改、增補(bǔ)和完善：（1）完善了不同的檢測(cè)策略，并將其整合為獨(dú)立的一章；（2）增加了HIV-1新發(fā)感染檢測(cè)一章；（3）新增了補(bǔ)充試驗(yàn)概念,其內(nèi)容包括抗體確證試驗(yàn)（WB，RIBA/LIA等）和核酸試驗(yàn)（定性和定量試驗(yàn)）；（4）增加了第4代試劑（抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑）的檢測(cè)流程；(5)增加了核酸檢測(cè)流程；(6)完善了檢測(cè)報(bào)告。將抗體篩查和復(fù)檢報(bào)告整合為HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告，增加了HIV-1核酸檢測(cè)報(bào)告和嬰兒艾滋病病毒感染早期診斷檢測(cè)報(bào)告，取消了流行病檢測(cè)HIV抗體檢測(cè)報(bào)告單、艾滋病病毒抗體檢測(cè)數(shù)和陽(yáng)性人數(shù)統(tǒng)計(jì)報(bào)表、艾滋病職業(yè)暴露個(gè)案登記表和艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表；（7）取消了實(shí)驗(yàn)室生物安全一章和艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理一章。所有附表的檢測(cè)報(bào)告僅供使用實(shí)驗(yàn)室參考。本《規(guī)范》由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn),下發(fā)至全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室及有關(guān)單位。本《規(guī)范》將為國(guó)家、相關(guān)部委下發(fā)的艾滋病防治工作各項(xiàng)政策法規(guī)的有效實(shí)施提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持，并具體指導(dǎo)艾滋病實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員開展日常工作。本《規(guī)范》起草單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心。本《規(guī)范》參加編寫單位：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、上海市疾病預(yù)防控制中心、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、云南省疾病預(yù)防控制中心、四川省疾病預(yù)防控制中心、浙江省疾病預(yù)防控制中心、河南省疾病預(yù)防控制中心、北京市紅十字血液中心、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、陜西省疾病預(yù)防控制中心、安徽省疾病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院、北京市疾病預(yù)防控制中心。本《規(guī)范》編寫組人員：蔣巖、汪寧、李敬云、鐘平、尚紅、邵一鳴、肖瑤、朱紅、邢文革、姚均、潘品良、邱茂鋒、馬艷玲、梁姝、郭志宏、王哲、葛紅衛(wèi)、王盈、李金明、徐曉琴、常文輝、吳建軍、張福杰、吳昊、蘇雪麗、廖玲潔。本《規(guī)范》參加編寫主要國(guó)際機(jī)構(gòu)：世界衛(wèi)生組織（Po-linCHAN、張嵐）。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心GAP項(xiàng)目（ColinShepard、郝玲、齊明山）。本《規(guī)范》編寫工作聯(lián)系人：肖瑤。本《規(guī)范》自發(fā)布之日起實(shí)施，同時(shí)終止《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范(2021年版)》。本《規(guī)范》適用于全國(guó)艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。本《規(guī)范》解釋權(quán)屬于中國(guó)疾病預(yù)防控制中心。致謝：感謝蓋茨基金會(huì)在《規(guī)范》修訂過程中給予技術(shù)和人力等方面的支持。

目錄TOC\o"1-3"\u第一章樣品的采集和處理 11范圍 12規(guī)范性文件引用 13樣品種類及相應(yīng)的用途 14操作步驟 24.1采樣前準(zhǔn)備 24.2樣品的采集和處理 24.3樣品的保存 44.4樣品的運(yùn)送 44.5樣品的接收 5第二章HIV抗體檢測(cè) 61范圍 62規(guī)范性文件引用 63HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 64HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn) 64.1HIV抗體檢測(cè)的目的 64.2HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn) 75常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法 75.1試劑和樣品 75.2方法 76結(jié)果報(bào)告 96.1篩查報(bào)告 96.2確證報(bào)告 97質(zhì)量控制 107.1酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制 107.2快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控 12第三章HIV-1新發(fā)感染檢測(cè) 141范圍 142規(guī)范性文件引用 143新發(fā)感染檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 144目的 145新發(fā)感染檢測(cè)方法 145.1方法學(xué)原理 145.2方法 155.3樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn) 155.4結(jié)果處理和解釋 165.5數(shù)據(jù)分析 176質(zhì)量控制 196.1人員培訓(xùn) 196.2樣品質(zhì)控 196.3試劑質(zhì)控 196.4實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)控 20第四章HIV-1抗原檢測(cè) 211范圍 212規(guī)范性文件引用 213HIV-1P24抗原檢測(cè)的意義 214實(shí)驗(yàn)室要求 215檢測(cè)方法及程序 215.1試劑 215.2樣品 215.3定性檢測(cè) 215.4定量檢測(cè) 235.5結(jié)果報(bào)告和解釋 236質(zhì)量控制 236.1定性檢測(cè) 236.2定量檢測(cè) 24第五章HIV核酸檢測(cè) 251范圍 252規(guī)范性文件引用 253核酸檢測(cè)的意義 263.1HIV-1感染診斷 263.2治療效果監(jiān)測(cè) 263.3病程監(jiān)控及預(yù)測(cè) 263.4耐藥性監(jiān)測(cè) 274HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 274.1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)及工作基本原則 274.2實(shí)驗(yàn)室人員和要求 274.3實(shí)驗(yàn)室生物安全 275HIV-1核酸檢測(cè)方法及程序 275.1HIV-1核酸定性檢測(cè) 275.2HIV核酸定量檢測(cè) 285.3集合核酸定性檢測(cè) 305.4HIV核酸即時(shí)檢測(cè) 316質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 316.1實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境 316.2儀器設(shè)備質(zhì)量控制 316.3檢測(cè)過程質(zhì)量控制 316.4外部質(zhì)量控制 32第六章艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)策略 331范圍 332規(guī)范性文件引用 333疫情監(jiān)測(cè)相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告 333.1HIV匿名無關(guān)聯(lián)檢測(cè)流程 333.2HIV實(shí)名關(guān)聯(lián)檢測(cè)流程 344臨床診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告 344.1使用抗體檢測(cè)試劑的篩查檢測(cè)流程 344.2使用抗原抗體檢測(cè)試劑的篩查檢測(cè)流程 354.3補(bǔ)充試驗(yàn)檢測(cè)策略 375血液篩查相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告 406嬰兒HIV-1感染早期診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告 426.1核酸檢測(cè)策略（RNA/DNA）及結(jié)果報(bào)告 426.2抗體檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告 44第七章HIV-1基因型耐藥檢測(cè) 461范圍 462規(guī)范性文件引用 463HIV-1基因型耐藥檢測(cè)的意義 463.1群體耐藥監(jiān)測(cè) 463.2個(gè)體耐藥檢測(cè) 474HIV-1基因型耐藥檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 474.1實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū) 474.2實(shí)驗(yàn)室人員和要求 484.3設(shè)施和設(shè)備 485HIV-1基因型耐藥檢測(cè)方法及程序 485.1樣品 485.2檢測(cè)原理 485.3檢測(cè)方法 485.4耐藥分析 496質(zhì)量保證與質(zhì)量控制 496.1室內(nèi)質(zhì)控 506.2外部質(zhì)控 50第八章CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 511范圍 512規(guī)范性文件引用 513CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的意義 513.1HIV感染臨床分期 513.2HIV感染兒童免疫抑制分級(jí)和治療輔助指標(biāo) 513.3疾病進(jìn)展監(jiān)測(cè) 523.4機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 523.5抗病毒治療適應(yīng)癥選擇及療效評(píng)價(jià) 523.6CD8+T淋巴細(xì)胞為抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞 524CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 524.1人員 524.2功能分區(qū) 534.3設(shè)施和設(shè)備 535常規(guī)CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的方法和程序 535.1樣品采集、運(yùn)輸和接收 535.2方法 545.3試劑 555.4實(shí)驗(yàn)資料的記錄 555.5結(jié)果報(bào)告 556質(zhì)量控制 56第九章HIV-1的分離培養(yǎng) 571范圍 572規(guī)范性文件引用 573HIV-1分離的意義 573.1HIV抗體不確定或HIV-1陽(yáng)性母親所生嬰兒的鑒別診斷及診斷 573.2HIV表型耐藥檢測(cè)及其他HIV生物學(xué)特征的研究 573.3HIV感染的輔助診斷 574實(shí)驗(yàn)室要求 574.1實(shí)驗(yàn)室 574.2設(shè)備 574.3材料 575HIV-1分離的方法及程序 575.1樣本 575.2靶細(xì)胞制備 575.3建立共培養(yǎng) 585.4監(jiān)測(cè)病毒生長(zhǎng) 585.5病毒鑒定 585.6判定結(jié)果和解釋 586質(zhì)量控制 58附表1HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告 59附表2HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告 60附表3HIV-1核酸檢測(cè)報(bào)告 61附表4HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告（特定條件） 62附表5CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)報(bào)告 63附表6HIV-1耐藥基因型檢測(cè)報(bào)告 64附表7嬰兒艾滋病病毒感染早期診斷檢測(cè)報(bào)告 65第一章樣品的采集和處理1范圍本章規(guī)定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）檢測(cè)的全血、血清、血漿、細(xì)胞、口腔黏膜滲出液、尿液以及濾紙干血斑（DBS）樣品的采集和處理方法，適用于HIV抗體、抗原、核酸、基因亞型、耐藥檢測(cè)、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)測(cè)定及HIV分離培養(yǎng)。2規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS-293有效版本?！栋滩〔《靖腥菊呒鞍滩』颊逤D4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)質(zhì)量及保證指南》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021年版）?！禜IV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021年版）?！禜IV-1基因型耐藥檢測(cè)及質(zhì)量保證指南》，（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021年版）。ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2021.《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》，衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日。3樣品種類及相應(yīng)的用途3.1全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測(cè)。3.2全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測(cè)。3.3抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定。3.4血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測(cè)。3.5淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞（PBMC）及全血可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測(cè)和HIV-1分離培養(yǎng)。4操作步驟4.1采樣前準(zhǔn)備根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨床采血技術(shù)要求操作，遵守生物安全相關(guān)要求。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間及唯一編碼。采集血液樣本宜選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置，準(zhǔn)備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器等?？谇火つB出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。4.1.1樣品的編碼和記錄4.1.2應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號(hào)），保證其唯一性。4.1.3采血前，先對(duì)試管或?yàn)V紙進(jìn)行標(biāo)記，核對(duì)后編碼。要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)面，推薦使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲(chǔ)存的耐低溫標(biāo)簽。干血斑濾紙應(yīng)使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。4.1.4口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。4.1.5尿液樣本準(zhǔn)備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。4.1.6應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時(shí)錄入電腦保存。4.2樣品的采集和處理4.2.1血液抗凝全血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻6～8次，備用。末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或食指。1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。血漿：將采集的抗凝全血1500～3000r/min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取5～10ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗凝劑的試管中，室溫下自然放置1～2小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血1500～3000r/min離心15分鐘，吸取血漿層下的淋巴細(xì)胞富集液，置于合適的容器中，備用。PBMC：使用淋巴細(xì)胞分離液，進(jìn)行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用?？鼓齽┑倪x擇：根據(jù)檢測(cè)要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽?，如CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定可選用EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉；HIV-1病毒分離、核酸定性/定量檢測(cè)可選用EDTA鈉鹽或鉀鹽或枸櫞酸鈉。樣品采集后處理、保存、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和條件，因不同的檢測(cè)項(xiàng)目而異，應(yīng)參見不同檢測(cè)項(xiàng)目要求。采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于放置尖銳危險(xiǎn)品容器內(nèi)，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。4.2.2濾紙干血斑根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測(cè)。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。用移液器從樣品管中吸取100μL抗凝全血（或血漿），對(duì)準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個(gè)印圈上滴加樣品。于室溫下自然干燥至少4小時(shí)（潮濕氣候下至少干燥24小時(shí)），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，每張干血斑單獨(dú)保存，避免血斑之間的相互污染，同時(shí)放入干燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆谩?.2.3尿液和口腔黏膜滲出液尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。尿液樣品可采集隨機(jī)尿，女性經(jīng)期應(yīng)取中段尿?？谇火つB出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。存放時(shí)間和是否凍存以試劑盒說明書為準(zhǔn)?？谇火つB出液應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。4.3樣品的保存4.3.1用于抗體和抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2～8℃，一周以上應(yīng)存放于-20℃以下。4.3.2用于核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4℃，3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20℃以下。3個(gè)月以上應(yīng)置于-70℃以下保存。4.3.3口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存應(yīng)以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。4.3.4尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年之內(nèi)存放宜在2～8℃。長(zhǎng)期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。4.3.5用于CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)的全血樣品，室溫保存，時(shí)間不超過24小時(shí)。如果用CD45設(shè)門，樣品保存不超過72小時(shí)。4.3.6篩查陽(yáng)性樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。補(bǔ)充試驗(yàn)陽(yáng)性樣品按照國(guó)家生物樣品管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。4.4樣品的運(yùn)送4.4.1全血、血漿的運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求，參照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》(衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日?qǐng)?zhí)行)。4.4.2血液樣品運(yùn)送時(shí)應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應(yīng)易于消毒。用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測(cè)定的樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）運(yùn)送。用于病毒載量檢測(cè)的樣品應(yīng)在-20℃以下運(yùn)輸。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下（18～25℃）運(yùn)送，可通過郵寄方式運(yùn)送。運(yùn)送樣品必須有記錄。4.5樣品的接收4.5.1樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，打開包裹時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)衣、戴口罩和防護(hù)眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。4.5.2核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對(duì)樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。4.5.3檢查樣品的狀況，記錄血液樣品有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。4.5.4接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單。

第二章HIV抗體檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV抗體的檢測(cè)方法、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于各級(jí)各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗(yàn)檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷?duì)HIV感染者診斷和監(jiān)測(cè)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。2規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》（中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293-有效版本）。ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2021StatementfromtheSurveillanceandSurveyWorkingGroupandtheLaboratoryWorkingGrouptotheOfficeoftheGlobalAIDSCoordinator.26Nov.2006.GuidelinesforusingHIVtestingtechnologiesinsurveillance.UNAIDS/WHO.2021.《艾滋病病毒抗體快速檢測(cè)技術(shù)手冊(cè)》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021年版）3HIV抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求應(yīng)符合國(guó)家對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求。實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。4HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)4.1HIV抗體檢測(cè)的目的4.1.1HIV抗體檢測(cè)可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測(cè)等。4.1.2以診斷為目的的檢測(cè)是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測(cè)、自愿咨詢檢測(cè)、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。4.1.3以血液篩查為目的的檢測(cè)是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。4.1.4以監(jiān)測(cè)為目的的檢測(cè)是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢(shì)，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群。4.2HIV抗體檢測(cè)的要點(diǎn)4.2.1根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略。4.2.2嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。4.2.4篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。補(bǔ)充試驗(yàn)是通過檢測(cè)樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測(cè)方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，特定條件*下的替代檢測(cè)，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)）。替代檢測(cè)包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)。*特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)。4.2.5篩查試驗(yàn)無反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)。4.2.6對(duì)篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對(duì)象均應(yīng)做好咨詢工作。5常規(guī)HIV抗體檢測(cè)方法5.1試劑和樣品必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評(píng)估敏感性和特異性高的方法及試劑。樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。5.2方法5.2.1篩查方法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）這類試驗(yàn)可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測(cè)試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測(cè)試劑可同時(shí)檢測(cè)血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定。化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA）這類試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測(cè)抗體，也可聯(lián)合檢測(cè)抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測(cè)定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照必須符合試劑盒規(guī)定?？焖贆z測(cè)（RT）及其它試驗(yàn)這類試驗(yàn)可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡(jiǎn)便快速，適用于應(yīng)急檢測(cè)、門診急診檢測(cè)、VCT及檢測(cè)點(diǎn)等。一般可在10～30分鐘內(nèi)得出結(jié)果。明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：是HIV抗體檢測(cè)的一種簡(jiǎn)便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時(shí)檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測(cè)HIV-1和HIV-2抗體。有效試驗(yàn)的陰性和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應(yīng)。陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)或條帶。反應(yīng)時(shí)間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽(yáng)性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。反應(yīng)時(shí)間在30分鐘以內(nèi)。5.2.2抗體確證試驗(yàn)5.免疫印跡試驗(yàn)（WB）WB可使用血清、血漿和濾紙干血斑。WB采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV抗原。待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有HIV抗體，就會(huì)與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況,按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。5.條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）RIBA/LIA采用間接法檢測(cè)樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測(cè)樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶標(biāo)記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶,按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測(cè)樣品為陽(yáng)性、陰性或不確定。其他方法：可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，免疫層析和免疫滲濾試驗(yàn)。6結(jié)果報(bào)告6.1篩查報(bào)告HIV抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表1（HIV抗體篩查檢測(cè)報(bào)告）。篩查試驗(yàn)無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測(cè)均無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測(cè)均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽(yáng)性報(bào)告。HIV抗體篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。6.2確證報(bào)告6.2.1WB及RIBA/LIA報(bào)告HIV抗體WB及RIBA/LIA試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告使用附表2（HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告）。（1）符合HIV-1抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-1抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。符合HIV-2抗體陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-2抗體陽(yáng)性”，并按規(guī)定做好檢測(cè)后咨詢和疫情報(bào)告。（2）符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測(cè)或2-4周后隨訪，盡早明確診斷。（3）符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明“2-4周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測(cè)。（4）HIV抗體確證檢測(cè)報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的7個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出。6.2.2特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)報(bào)告。見附表4。7質(zhì)量控制7.1酶免或發(fā)光法抗體檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)量控制7.1.1試劑盒內(nèi)部對(duì)照試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽(yáng)性和陰性對(duì)照。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測(cè)臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。如內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。7.1.2室內(nèi)質(zhì)控品為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測(cè)的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽(yáng)性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測(cè)的可信性。因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時(shí)，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以購(gòu)買或?qū)嶒?yàn)室自行制備。質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。7.1.3Levey-Jennings質(zhì)控圖質(zhì)控圖參數(shù)外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)外部質(zhì)控品重復(fù)測(cè)定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測(cè)取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測(cè)，也至少做5個(gè)批次的檢測(cè)，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。（1）算術(shù)平均值（）：代表一組質(zhì)控品測(cè)定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測(cè)得的外部對(duì)照質(zhì)控品的S/CO值計(jì)算平均值。（2）標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。（3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對(duì)于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測(cè)的重復(fù)性或精密度。（4）控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對(duì)外部質(zhì)控品檢測(cè)結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差。質(zhì)控規(guī)則實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告結(jié)果之前必須評(píng)價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。（1）（2）失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品穩(wěn)定性下降所致。質(zhì)控圖的分析及失控處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。7.1.4室內(nèi)質(zhì)控其他方式—“即刻法”質(zhì)控“即刻法”質(zhì)控方法是在對(duì)同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測(cè)定3次后，即可對(duì)第3次以后的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：將質(zhì)控品的測(cè)定值從小到大排列：x1，x2，x3……xn（x1為最小值，xn為最大值）。計(jì)算和s。計(jì)算SI上限值和SI下限值。SI上限=X最大值-SSI下限=-X最小值S

將SI上限、SI下限與SI值表（表1）中的數(shù)字比較。表1SI值表NN3sN2snn3sN2s31.161.15122.552.2941.491.46132.612.3351.751.67142.662.3761.941.82152.712.4172.101.94162.752.4482.222.03172.792.4792.322.11182.822.50102.412.18192.852.53112.482.23202.882.56（1）當(dāng)SI上限和SI下限<n2s時(shí)表示處于控制范圍內(nèi)，可以繼續(xù)測(cè)定。繼續(xù)重復(fù)以上各項(xiàng)計(jì)算。（2）（3）當(dāng)SI上限和SI下限有一值>n3s值時(shí)說明該值已在3s范圍之外，屬“失控”?！凹纯谭ā敝荒茉谇?0次內(nèi)使用，超出即可采用L-J質(zhì)控圖方法。7.2快速法抗體檢測(cè)質(zhì)控7.2.1試劑內(nèi)對(duì)照在質(zhì)控窗口內(nèi)出現(xiàn)質(zhì)控帶，該質(zhì)控帶是試劑自帶的內(nèi)部過程質(zhì)控，說明實(shí)驗(yàn)操作全部完成并且實(shí)驗(yàn)所用材料處于工作狀態(tài)。清潔的檢測(cè)區(qū)背景是內(nèi)部陰性過程質(zhì)控。如實(shí)驗(yàn)完成后未呈現(xiàn)紅色質(zhì)控帶，說明試劑盒內(nèi)質(zhì)控?zé)o效，該試驗(yàn)結(jié)果無效，樣品須重檢。7.2.2室內(nèi)質(zhì)控品對(duì)照外部質(zhì)控品可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含抗體陽(yáng)性樣品和陰性樣品。自制質(zhì)控品可使用本室保留的陽(yáng)性樣品。下列情況需做質(zhì)量控制：更換試劑批號(hào)；更換檢測(cè)人員；更換包裝；更換試劑廠家。除此之外，建議每個(gè)檢測(cè)日檢測(cè)一次陽(yáng)性和陰性質(zhì)控品；如果日檢測(cè)量大于50份樣品，至少應(yīng)作2次質(zhì)控。出現(xiàn)以下問題，提示存在質(zhì)量隱患，應(yīng)引起重視：運(yùn)輸包裝、內(nèi)盒或試劑盒的物理?yè)p傷；在單包裝內(nèi)存在混雜物質(zhì)；標(biāo)簽出現(xiàn)錯(cuò)誤、缺失或字跡模糊（特別是產(chǎn)品名稱或出產(chǎn)廠家名稱，批號(hào)和貨號(hào)，失效期或/和生產(chǎn)日期）；缺失目錄；泄漏或污染；不適宜的存放條件；保護(hù)包裝紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（陽(yáng)性/陰性控制結(jié)果以及質(zhì)控條帶出現(xiàn)與否等標(biāo)志）；試劑質(zhì)量問題須報(bào)告省確證中心實(shí)驗(yàn)室。7.2.3開展抗體相關(guān)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室須參加有資質(zhì)機(jī)構(gòu)組織的能力驗(yàn)證，或室間比對(duì)。

第三章HIV-1新發(fā)感染檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV新發(fā)感染的檢測(cè)方法、程序、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于開展新發(fā)感染檢測(cè)的各類實(shí)驗(yàn)室。2規(guī)范性文件引用Technical

update

on

HIV

incidence

assays

for

surveillance

and

monitoring

processes.WHO/UNAIDS.2021.GuidelinesfortheuseoftheBEDassayforincidenceestimationandsurveillanceinresource-limitedcountries.Atlanta,5June2006.UsingtheBEDHIV-1CaptureEIAAssaytoEstimateIncidenceUsingSTARHSintheContextofSurveillanceintheUnitedStates.Atlanta,Oct2007.3新發(fā)感染檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求須經(jīng)過培訓(xùn)考核合格的艾滋病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，方可開展本項(xiàng)檢測(cè)。4目的了解重點(diǎn)人群HIV-1新發(fā)感染情況，為估計(jì)艾滋病流行形勢(shì)和判斷疫情變化提供科學(xué)依據(jù)。5新發(fā)感染檢測(cè)方法5.1方法學(xué)原理用于新發(fā)感染檢測(cè)的方法包括HIV-1限制性抗原親和力酶聯(lián)免疫方法（HIV-1LAg–Avidityenzymeimmunoassay，LAg-AvidityEIA）和BEDHIV-1捕獲酶聯(lián)免疫方法（BEDcaptureenzymeimmunoassay,BED-CEIA）。LAg–AvidityEIA方法的原理是，人體在感染HIV后產(chǎn)生的HIV-1特異性抗體對(duì)相應(yīng)抗原的識(shí)別和結(jié)合能力隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，即親和力逐漸增加。而BED-CEIA方法的原理是，HIV特異性IgG占總IgG抗體的比例隨著感染時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增高。兩種方法均只適用于HIV-1抗體陽(yáng)性樣品。只應(yīng)用于監(jiān)測(cè)目的，不能用于個(gè)體診斷和臨床，其用于監(jiān)測(cè)及發(fā)病率計(jì)算的條件參見“《艾滋病病毒新發(fā)感染監(jiān)測(cè)操作手冊(cè)》”。目前對(duì)兩種方法的評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，LAg–AvidityEIA方法的假陽(yáng)性率較BED-CEIA方法低，受疾病狀態(tài)，如CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)，抗病毒治療等因素的影響較BED方法小，可以更加準(zhǔn)確地區(qū)分新近感染和長(zhǎng)期感染者。因此，BED-CEIA方法正逐漸被LAg–AvidityEIA方法所替代。此外，也有快速新發(fā)感染檢測(cè)方法的研究報(bào)道，因其具有快速、簡(jiǎn)便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，未來對(duì)其需求將會(huì)越來越多。5.2方法5.2.1樣品和信息：來源于哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)和病例報(bào)告系統(tǒng)，用于檢測(cè)的為抗體陽(yáng)性樣本。5.2.2實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)：首選推薦LAg–AvidityEIA，也可使用BED-CEIA。5.2.3數(shù)據(jù)分析：根據(jù)哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)各人群新發(fā)感染檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合流行病學(xué)相關(guān)資料，計(jì)算重點(diǎn)人群HIV-1新發(fā)感染率,并進(jìn)行適當(dāng)校正；根據(jù)病例報(bào)告系統(tǒng)新報(bào)告感染者新發(fā)感染檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算新發(fā)感染者占新報(bào)告感染者的比例，并根據(jù)相關(guān)背景信息，綜合分析新發(fā)感染情況。5.3樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)入選標(biāo)準(zhǔn) （1）新發(fā)感染檢測(cè)必須應(yīng)用診斷為HIV-1抗體陽(yáng)性的血清或血漿或DBS樣品，禁止將HIV-1抗體陰性樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)每份樣品量不少于1mL。樣品要求清亮、無嚴(yán)重溶血、沒有交叉污染，必須保存在-20℃以下，反復(fù)凍融次數(shù)不多于三次。5.3.2排除標(biāo)準(zhǔn)LAg–AvidityEIA方法(1)如果同一人在六個(gè)月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽(yáng)性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)所有艾滋病病人的樣品。(3)所有接受抗病毒治療的感染者樣品。BED-CEIA方法(1)如果同一人在六個(gè)月以內(nèi)出現(xiàn)兩份或兩份以上確認(rèn)陽(yáng)性樣品，將第一份樣品納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)所有艾滋病病人的樣品。(3)所有接受抗病毒治療的感染者樣品。(4)CD4細(xì)胞<200個(gè)/uL者的樣本。5.3.3相關(guān)要求(1)對(duì)于哨點(diǎn)樣品，進(jìn)行新發(fā)感染檢測(cè)的樣品量必須占應(yīng)檢測(cè)陽(yáng)性樣品的85%以上，否則不納入新發(fā)感染檢測(cè)。(2)哨點(diǎn)樣品必須具有哨點(diǎn)問卷編號(hào)，并盡可能補(bǔ)充病例報(bào)告系統(tǒng)卡片ID號(hào)。病例報(bào)告樣品應(yīng)當(dāng)填寫病例報(bào)告系統(tǒng)卡片ID號(hào)。5.4結(jié)果處理和解釋5.4.1LAg–AvidityEIA方法： 確定對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD值（中值OD值為3次OD值排序后中間的值，陰性對(duì)照的中值為兩孔OD值的平均值），對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD值必須在下表范圍內(nèi)，兩個(gè)NC樣品的OD值都必須在該范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。否則，任何一個(gè)對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD值不在表2范圍內(nèi)，判定為無效，需要重新稀釋樣品進(jìn)行檢測(cè)。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)OD值（ODn）對(duì)照的ODn值＝對(duì)照的中值OD值/校準(zhǔn)品的中值OD值初篩試驗(yàn)：各樣品的ODn值＝各樣品的OD值/校準(zhǔn)品的中值OD值確認(rèn)試驗(yàn)：各樣品的ODn值＝各樣品的中值OD值/校準(zhǔn)品的中值OD值任一對(duì)照和校準(zhǔn)品的ODn值必須在下表顯示值的范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。否則，如果任何一個(gè)對(duì)照的ODn值不在表3范圍內(nèi)，該試驗(yàn)判定為無效，需要重新稀釋樣本并進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果的解釋初篩試驗(yàn)：樣本進(jìn)行單孔檢測(cè)，當(dāng)ODn值>2.0時(shí)，該樣本被判為長(zhǎng)期感染樣本，不需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。當(dāng)樣本的ODn值≤2.0時(shí)，該樣本需納入確認(rèn)試驗(yàn)。確認(rèn)試驗(yàn)：初篩試驗(yàn)中ODn值≤2.0的樣本稀釋三份并三孔重復(fù)檢測(cè)。當(dāng)ODn值≤1.5，該樣本判為近期感染，當(dāng)ODn值>1.5時(shí)，該樣本判為長(zhǎng)期感染樣本。5.4.2BED-CEIA方法確定對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD（中值OD為3次OD值排序后中間的值），對(duì)照和校準(zhǔn)品的中值OD值必須在表4范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。兩個(gè)NC樣品的OD值在初篩和確認(rèn)中都必須在該范圍內(nèi)。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)OD值（ODn）對(duì)照的ODn值＝對(duì)照的中值OD/校準(zhǔn)品的中值OD初篩試驗(yàn)：各樣品的ODn值＝各樣品的OD值/校準(zhǔn)品的中值OD確認(rèn)試驗(yàn)：各樣品的ODn值＝各樣品的中值OD值/校準(zhǔn)品的中值OD 對(duì)照和校準(zhǔn)品ODn值的正常范圍：對(duì)照和校準(zhǔn)品的ODn值必須在要求的范圍內(nèi)，該試驗(yàn)才有效。結(jié)果解釋在中國(guó)的研究顯示，BED的ODn為0.8時(shí)，可以指明平均血清陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)間為168天。ODn為0.8時(shí)可以減少AIDS病人錯(cuò)分為近期感染的幾率，進(jìn)而得到較好的近期感染的預(yù)測(cè)值。在初篩試驗(yàn)中樣本為單份檢測(cè)，當(dāng)ODn值≤1.2時(shí)，樣本需分成三份重復(fù)檢測(cè)。在確認(rèn)試驗(yàn)中，若ODn值≤0.8時(shí)，該份樣品判為近期感染。5.5數(shù)據(jù)分析5.5.1LAg–AvidityEIAHIV-1新發(fā)感染率的計(jì)算監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)HIV-1新發(fā)感染率是指：各省哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)重點(diǎn)人群中，每年新感染HIV-1人群占暴露人群的比例。原則上以省為單位計(jì)算各重點(diǎn)人群新發(fā)感染率。當(dāng)樣品數(shù)量足夠大時(shí)，可以考慮按照地區(qū)計(jì)算新發(fā)感染率，也可以按照設(shè)定的因素（如年齡、性別、感染途徑、婚姻狀況、行為因素、受教育程度、地區(qū)等）對(duì)HIV-1新發(fā)感染率監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分層分析將新發(fā)感染檢測(cè)數(shù)據(jù)匯總后，即可進(jìn)行類似分析。新發(fā)感染率計(jì)算公式：美國(guó)CDC和UNAIDS/WHO推薦用于橫斷面研究計(jì)算公式：Hargrove校正法：中點(diǎn)公式：回顧公式：變量符號(hào)：①待計(jì)算的變量值：I＝新發(fā)感染率（高危人群中每100人年新感染的數(shù)量）；②在橫斷面調(diào)查中測(cè)量的變量值：T＝調(diào)查的總?cè)藬?shù)，P＝HIV-1檢測(cè)為陽(yáng)性的總?cè)藬?shù)，N＝HIV-1檢測(cè)為陰性的總?cè)藬?shù)，R＝實(shí)驗(yàn)判定為新近感染的總?cè)藬?shù)；③從單獨(dú)的校準(zhǔn)研究中獲得的變量值：w＝窗口期（從血清陽(yáng)轉(zhuǎn)到實(shí)驗(yàn)方法能夠判為新發(fā)感染的最長(zhǎng)時(shí)間），F(xiàn)RR=錯(cuò)分率。ODn等于1.5為界值判定新發(fā)感染計(jì)算LAg方法的窗口期為130天。感染時(shí)間超過一年且未接受ART治療HIV感染者獲得的FRR為2.30%。5.5.2BEDHIV-1新發(fā)感染率的計(jì)算監(jiān)測(cè)哨點(diǎn)各類人群HIV-1新發(fā)感染率。同親和力方法。新發(fā)感染率有McDougal和Hargrove兩種計(jì)算法（在中國(guó)推薦優(yōu)先使用McDougal計(jì)算法），每種方法均有中點(diǎn)公式和回顧公式?；仡櫣绞菍?duì)在橫斷面抽樣前一年的新發(fā)感染率估計(jì)，中點(diǎn)公式是對(duì)在橫斷面抽樣約+/-6個(gè)月時(shí)的新發(fā)感染率估計(jì)。（1）McDougal法（調(diào)整靈敏度/特異度）中點(diǎn)公式：回顧公式：校正因子F：（2）Hargrove法(調(diào)整特異度)中點(diǎn)公式：回顧公式：變量符號(hào)：①待計(jì)算的變量值：I＝新發(fā)感染率（高危人群中每100人年新感染的數(shù)量），F(xiàn)＝調(diào)整靈敏度或特異度的調(diào)整因子；②在橫斷面調(diào)查中測(cè)量的變量值：T＝調(diào)查的總?cè)藬?shù)，P＝HIV-1檢測(cè)為陽(yáng)性的總?cè)藬?shù)，N＝HIV-1檢測(cè)為陰性的總?cè)藬?shù)，R＝實(shí)驗(yàn)判定為新近感染的總?cè)藬?shù)；③從單獨(dú)的校準(zhǔn)研究中獲得的變量值：w＝窗口期（從血清陽(yáng)轉(zhuǎn)到實(shí)驗(yàn)方法能夠判為新發(fā)感染的最長(zhǎng)時(shí)間），α＝實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)新發(fā)感染(＜1w)的靈敏度，β＝實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間在1w-2w天樣品的特異度，γ＝實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間超過2w天樣品的特異度，ε＝實(shí)驗(yàn)方法對(duì)感染時(shí)間超過2w天樣品的誤判率。我國(guó)BED方法HIV-1新發(fā)感染相關(guān)的校正系數(shù)值是基于分析來自1565個(gè)已知血清陽(yáng)轉(zhuǎn)日期（大約）樣品的BED檢測(cè)值，這些值為：w=168天，α=0.8098，β=0.7571，γ=0.9315，ε=0.06856質(zhì)量控制6.1人員培訓(xùn)進(jìn)行新發(fā)感染檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的技術(shù)培訓(xùn)，而且在正式開展新發(fā)感染檢測(cè)工作之前，至少要做5次預(yù)實(shí)驗(yàn)，除陰性對(duì)照外，其他樣本ODn值的CV值均需小于15%。必須參加能力驗(yàn)證，如結(jié)果不合格，需仔細(xì)分析原因，糾正后方可繼續(xù)開展檢測(cè)。6.2樣品質(zhì)控所有樣品的采集、運(yùn)輸、檢測(cè)及保存必須嚴(yán)格按照本規(guī)范執(zhí)行。樣品檢測(cè)之前要核對(duì)正確，并完全融化，充分混勻。稀釋樣品以及將稀釋好的樣品加入酶標(biāo)板時(shí)，必須使用帶濾芯的槍頭，避免交叉污染。6.3試劑質(zhì)控6.3.1試劑內(nèi)對(duì)照每個(gè)試劑盒內(nèi)均含有廠家提供的陰性、低值陽(yáng)性、高值陽(yáng)性和校準(zhǔn)品，用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，要求每次實(shí)驗(yàn)的OD和ODn值均需在要求范圍內(nèi)，否則結(jié)果視為無效，必須重新進(jìn)行檢測(cè)。每次檢測(cè)樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能應(yīng)用在同批號(hào)的試劑盒中，并對(duì)內(nèi)部對(duì)照建立Levey-Jennings質(zhì)控圖，以保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性和精確性。6.3.2試劑外質(zhì)控新發(fā)感染試劑必須按照要求運(yùn)輸和保存。采購(gòu)后，需進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確保符合質(zhì)量要求之后，才可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每次實(shí)驗(yàn)須同時(shí)做外部對(duì)照，如外部對(duì)照不通過須重新實(shí)驗(yàn)。此外，開啟試劑盒時(shí)，需在包裝盒上注明開啟日期，同時(shí)注意在有效期內(nèi)使用，避免使用臨近有效期的試劑。6.4實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)控實(shí)驗(yàn)過程中，環(huán)境條件（主要指室溫）要恒定（15-30℃）。嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，控制每一步驟的孵育時(shí)間和溫度。時(shí)間應(yīng)準(zhǔn)確計(jì)量，禁止估算。必須定時(shí)維護(hù)和校準(zhǔn)儀器設(shè)備，尤其是加樣器、孵育箱，以保證結(jié)果準(zhǔn)確性。保留所有的原始實(shí)驗(yàn)記錄，并有檢測(cè)人以及復(fù)核人的簽字。如果初篩實(shí)驗(yàn)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)同一份樣本的ODn值相差較遠(yuǎn)，一致性較差，需要3孔復(fù)檢，做第三次檢測(cè)，以兩次相關(guān)性較好的結(jié)果為最終結(jié)果。

第四章HIV-1抗原檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV-1p24抗原檢測(cè)的方法和用途。適用于對(duì)人血液樣品和病毒培養(yǎng)上清液中HIV-1p24抗原的檢測(cè)。2規(guī)范性文件引用NIAIDVirologyManualforHIVLaboratory,NIHPublication,No.97-3828,Jan1997.NielConstantine，HIVViralAntigenAssays,HIVInSiteKnowledgeBaseChapter,September2001,

3HIV－1p24抗原檢測(cè)的意義3.1HIV-1感染窗口期、HIV-1抗體不確定或HIV-1陽(yáng)性母親所生嬰兒的鑒別診斷。3.2第四代HIV檢測(cè)試劑（抗原抗體檢測(cè)試劑）的陽(yáng)性結(jié)果的輔助診斷。3.3HIV-1分離培養(yǎng)、病毒復(fù)制狀況的監(jiān)測(cè)。4實(shí)驗(yàn)室要求同HIV抗體檢測(cè)。5檢測(cè)方法及程序5.1試劑：原理一般是抗體夾心法，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）、酶聯(lián)熒光分析法（ELFA）、電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）、抗原抗體快速檢測(cè)法等。應(yīng)使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)注冊(cè)的試劑。5.2樣品：血清、血漿、全血或病毒培養(yǎng)上清液。5.3定性檢測(cè)5.3.1篩查試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA法）：抗體包被固相反應(yīng)孔（管）的底部，待測(cè)樣本中P24抗原與包被抗體形成抗原抗體復(fù)合物，再加入酶（HRP）標(biāo)記的HIV-1抗體與抗原結(jié)合，加底物顯色，在酶標(biāo)儀上讀取結(jié)果。酶聯(lián)熒光分析法（ELFA）：待測(cè)樣品的p24抗原與包被在固相孔（管）內(nèi)的p24抗體結(jié)合，并被生物素標(biāo)記的p24抗體識(shí)別。經(jīng)過堿性磷酸酶復(fù)合物孵育后加底物，酶復(fù)合物催化底物水解成熒光產(chǎn)物，此熒光可在450nm波長(zhǎng)處檢測(cè)。對(duì)每份標(biāo)本的固相孔（管）測(cè)量?jī)纱危谝淮问羌尤氲孜锴暗谋尘白x數(shù)，第二次是酶復(fù)合物催化底物水解后的讀數(shù)。儀器自動(dòng)分析計(jì)算相對(duì)熒光值（RFV）并自動(dòng)報(bào)告判讀結(jié)果。電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）：待測(cè)樣品的p24抗原與包被抗體的磁性微粒和發(fā)光劑標(biāo)記的抗體在反應(yīng)管中溫育，形成磁性微珠包被抗體-抗原-發(fā)光劑標(biāo)記抗體復(fù)合物。將復(fù)合物吸入流動(dòng)室用TPA（tripropylamine三丙胺）緩沖液沖洗，流經(jīng)電極表面時(shí)，結(jié)合了的磁性微珠被電極下的磁鐵吸附，而游離的磁性微珠及發(fā)光劑標(biāo)記抗體被沖走。同時(shí)在電極加電壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使發(fā)光試劑標(biāo)記物和TPA在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光。儀器根據(jù)發(fā)光值（COI）判讀結(jié)果?？乖贵w快速檢測(cè)法：待檢樣本中的HIV抗體、HIV-1p24抗原分別與樣品墊中的HIV-1/HIV-2抗原、HIV-1p24單克隆抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在毛細(xì)作用下沿著硝酸纖維膜向上移動(dòng)，至相關(guān)抗體、抗原包被區(qū)域后，分別與之結(jié)合，組成有色復(fù)合物線條。質(zhì)控線用于檢測(cè)過程質(zhì)量控制，肉眼判讀檢測(cè)結(jié)果。篩選試驗(yàn)依據(jù)試劑盒說明書提供的標(biāo)準(zhǔn)判斷有反應(yīng)或無反應(yīng)。5.3.2中和試驗(yàn)中和試驗(yàn)主要是p24抗原檢測(cè)的補(bǔ)充試驗(yàn)，還可做HIV-1RNA的定性或定量檢測(cè)，以排除篩查試驗(yàn)的假陽(yáng)性。中和試驗(yàn)：（1）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA法）：待檢樣品先與中和劑（p24抗原的抗體）共同孵育，如果樣品中存在p24抗原，中和抗體將與之結(jié)合形成復(fù)合物，而不能與固相載體上的捕獲抗體結(jié)合。之后，用這樣處理過的樣品重復(fù)篩查實(shí)驗(yàn)，同時(shí)做一孔未中和的原始樣品對(duì)照，將中和與未中和孔的OD值進(jìn)行比較，如果中和孔的OD值下降50%以上，認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽(yáng)性；如果中和孔沒有出現(xiàn)OD值的下降或下降的幅度不到50%，認(rèn)為篩選試驗(yàn)p24抗原的反應(yīng)性可能是假陽(yáng)性，需要做RNA檢測(cè)或隨訪做進(jìn)一步確證。（2）酶聯(lián)熒光分析法（ELFA）：原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA法）。結(jié)果判斷方法為，比較中和與未中和樣品的熒光值（RFV），根據(jù)說明書提供的方法計(jì)算中和率，如果中和率大于或等于60%，認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽(yáng)性；如果中和率小于60%，認(rèn)為p24抗原的反應(yīng)性可能是假陽(yáng)性，需要做RNA檢測(cè)或隨訪做進(jìn)一步確證。（3）電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)：原理和檢測(cè)步驟同上述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA法）。結(jié)果判斷方法為，比較中和與未中和樣本的COI值，根據(jù)說明書提供的方法計(jì)算中和率，如果中和率大于50%，認(rèn)為樣品中的p24抗原是真陽(yáng)性；如果中和率小于50%，認(rèn)為p24抗原的反應(yīng)性可能是假陽(yáng)性，需要做RNA檢測(cè)或隨訪做進(jìn)一步確證。HIV-1RNA檢測(cè)按照相關(guān)章節(jié)執(zhí)行。5.4定量檢測(cè)將p24抗原的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋成包含0.0和125pg/ml兩個(gè)濃度在內(nèi)的六個(gè)不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行檢測(cè)。橫坐標(biāo)為p24抗原的濃度（pg/ml），縱坐標(biāo)為OD值（酶聯(lián)熒光分析法為RFV值、電化學(xué)發(fā)光法為COI值），繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)出未知樣品的反應(yīng)值（OD值、或RFV值、或COI值）以后，可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出抗原的濃度。如果未知樣品的反應(yīng)值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線上最高抗原濃度的反應(yīng)值，則需用正常人血清將樣品稀釋以后再行檢測(cè)。自動(dòng)化檢測(cè)試劑及其配套的儀器，可根據(jù)儲(chǔ)存于儀器中的標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算反應(yīng)值并自動(dòng)報(bào)告p24抗原的濃度（pg/ml）。5.5結(jié)果報(bào)告和解釋應(yīng)按照試劑盒說明書報(bào)告和解釋。5.5.1對(duì)于定性檢測(cè)，HIV-1p24抗原篩查試驗(yàn)有反應(yīng)的樣品必須經(jīng)過中和試驗(yàn)確證以后才能判斷陽(yáng)性或陰性。5.5.2HIV-1p24抗原陽(yáng)性僅作為HIV感染的輔助診斷依據(jù)。5.5.3HIV-1p24抗原陰性結(jié)果不能排除HIV感染。6質(zhì)量控制6.1定性檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的內(nèi)部對(duì)照應(yīng)滿足試劑盒規(guī)定的條件，還可以使用含有中等濃度p24抗原的質(zhì)控品（血漿或病毒培養(yǎng)上清液）作為外部對(duì)照，按照常規(guī)的質(zhì)控方法繪制質(zhì)控圖。中和試驗(yàn)應(yīng)使用試劑盒提供的中和抗體，使用已知p24抗原陽(yáng)性的樣品作為陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照中的中和孔，OD值應(yīng)下降50%以上。酶聯(lián)熒光分析法（ELFA）：每更換批號(hào)后或每間隔14天時(shí)，必須用試劑盒提供的校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)值必須在設(shè)定的相對(duì)熒光值內(nèi)，若超出范圍，必須重新校準(zhǔn)。每次校準(zhǔn)還需要同時(shí)檢測(cè)試劑盒提供的陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。還可以使用含有中等濃度p24抗原的質(zhì)控品（血漿或病毒培養(yǎng)上清液）作為外部對(duì)照，按照常規(guī)的質(zhì)控方法繪制質(zhì)控圖。中和試驗(yàn)應(yīng)使用試劑盒提供的中和抗體，使用已知p24抗原陽(yáng)性的樣品作為陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照的中和率應(yīng)大于或等于60%。電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)：每更換批號(hào)后或每間隔7天或按說明書要求的時(shí)間間隔，必須使用試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)值必須滿足說明書的要求，還可以使用含有中等濃度p24抗原的質(zhì)控品（血漿或病毒培養(yǎng)上清液）作為外部對(duì)照，按照常規(guī)的質(zhì)控方法繪制質(zhì)控圖。中和試驗(yàn)應(yīng)使用試劑盒提供的中和抗體，使用已知p24抗原陽(yáng)性的樣品作為陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照的中和率應(yīng)大于50%。抗原抗體快速檢測(cè)法:檢測(cè)板表面標(biāo)記有“檢測(cè)線1、2”和“質(zhì)控線”。加入樣本前，在結(jié)果窗口看不見檢測(cè)線和質(zhì)控線的。質(zhì)控線用于過程的質(zhì)量控制，出現(xiàn)質(zhì)控線表示其所在的測(cè)試條主要組份活性正常，已正確加入稀釋劑。質(zhì)控線不保證樣品已正確加入，也不能作為陽(yáng)性樣品的質(zhì)控。6.2定量檢測(cè)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，0.0和125pg/ml二個(gè)p24抗原濃度的測(cè)定值應(yīng)符合說明書的要求。

第五章HIV核酸檢測(cè)1范圍本章規(guī)定了HIV-1核酸定性和定量檢測(cè)（病毒載量）的意義、實(shí)驗(yàn)室要求、檢測(cè)方法、質(zhì)量控制及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，適用于HIV-1核酸的定性檢測(cè)和病毒載量的測(cè)定。2規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS-293有效版本?！栋滩≡\療指南第三版（2021版）》，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)艾滋病學(xué)組。中華臨床感染病雜志2021，08（05）385-401.衛(wèi)生部關(guān)于印發(fā)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》的通知（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2021]194）。《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2021。《HIV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021?！禜IV-1基因型耐藥檢測(cè)及質(zhì)量保證指南》（中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2021）。GuidelinesfortheUseofAntiretroviralAgentsinHIV-1-InfectedAdultsandAdolescents。USDHHS2021WHO.RecommendationsonTheDiagnosisofHIVInfectioninInfantsandChildren.WorldHealthOrganization2021.段星，馮霞，王繼寶等，ＨＩＶ抗體檢測(cè)結(jié)果不確定時(shí)應(yīng)用核酸診斷的可行性研究。中國(guó)艾滋病性病，２０１４，２０（１１）：815-817。陳會(huì)超，蘇瑩珍，陳敏等，核酸檢測(cè)在艾滋病晚期患者診斷中的應(yīng)用?，F(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2021，41(16)：3025-3027。李敬云。HIV早期感染診斷方法與應(yīng)用。傳染病信息。2007,20（6）：352-356。RocheCOBASAmplilPrep/COBASTaqManHIV-1TEST,ProcedureManual,version2.0.BiomerieuxNuclisens?EasyQHIV-1OperationManual,V2.0.MolecularHIVscreening.ExpertRev.Mol.Diagn.7：693–705.2021.LaboratoryTestingfortheDiagnosisofHIVInfection,UpdatedRecommendations,PublishedJune27,2021，USACDC.UseoflaboratorytestsandclinicalsymptomsforidenticationofprimaryHIVinfection.AIDS24:941–945，2021.3核酸檢測(cè)的意義3.1HIV-1感染診斷3.1.1嬰兒感染早期診斷HIV-1感染母親所生小于18個(gè)月齡的嬰兒，不同時(shí)間的兩次HIV-1核酸檢測(cè)均為陽(yáng)性即可作出診斷。18個(gè)月齡以上兒童診斷與成人相同。3.1.2HIV-1感染補(bǔ)充試驗(yàn)及急性期和晚期感染者的診斷核酸檢測(cè)作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)可用于HIV-1感染診斷，包括抗體復(fù)檢試驗(yàn)有反應(yīng)和抗體補(bǔ)充試驗(yàn)不確定樣本的判定；急性期和晚期感染者的診斷。對(duì)于急性期感染和晚期的診斷需結(jié)合流行病學(xué)史、臨床癥狀以及其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)（如CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等）。此外，對(duì)HIV抗體陰性的高危人群樣品以及采供血機(jī)構(gòu)的原料血漿進(jìn)行集合核酸檢測(cè)，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期感染，降低“殘余危險(xiǎn)度”，減少二代傳播。核酸檢測(cè)結(jié)果低于最低檢測(cè)限不能排除HIV-1感染。3.2治療效果監(jiān)測(cè)艾滋病病人經(jīng)抗病毒藥物治療后，定期進(jìn)行HIV-1核酸定量檢測(cè)，可判斷抗病毒藥物治療的治療效果。病毒載量結(jié)果動(dòng)態(tài)分析，對(duì)決定是否繼續(xù)使用原定的治療方案以及是否需要更改治療方案起到重要作用。通常在治療一個(gè)月后病毒載量降低0.5log以上才被認(rèn)為臨床治療有效，六個(gè)月后應(yīng)降到小于檢測(cè)限（詳見我國(guó)艾滋病抗病毒藥物治療手冊(cè)）。3.3病程監(jiān)控及預(yù)測(cè)HIV感染者體內(nèi)病毒載量的變化具有一定規(guī)律，這種變化與疾病的進(jìn)程密切相關(guān)。對(duì)未進(jìn)行抗病毒藥物治療的感染者定期進(jìn)行病毒定量檢測(cè)，可監(jiān)測(cè)病程變化，定期進(jìn)行HIV病毒載量檢測(cè)有助于確定疾病發(fā)展的階段。3.4耐藥性監(jiān)測(cè)可用于HIV耐藥檢測(cè)和監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)公共衛(wèi)生醫(yī)生了解耐藥性病毒株流行的態(tài)勢(shì)和指導(dǎo)臨床醫(yī)生判斷病人的抗病毒藥物治療效果和修改抗病毒藥物治療方案。4HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求HIV核酸檢測(cè)應(yīng)在合適的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，應(yīng)制定嚴(yán)格的管理制度和建立與實(shí)驗(yàn)和實(shí)驗(yàn)室管理相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)操作指導(dǎo)書，實(shí)驗(yàn)人員必須充分了解各項(xiàng)規(guī)定并嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行。核酸定性、定量檢測(cè)要嚴(yán)格滿足分子生物學(xué)和PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的要求。4.1實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)及工作基本原則HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)室的基本工作原則應(yīng)參照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》附件中“醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則”和《HIV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南》的要求進(jìn)行。4.2實(shí)驗(yàn)室人員和要求進(jìn)行HIV核酸檢測(cè)的人員須具有艾滋病核酸檢測(cè)的上崗資格，接受過省、市級(jí)以上的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)及廠家的培訓(xùn)，并接受實(shí)驗(yàn)室生物安全培訓(xùn)。4.3實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)驗(yàn)室的安全工作制度或安全標(biāo)準(zhǔn)操作程序，所有操作符合《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2021）。5HIV-1核酸檢測(cè)方法及程序5.1HIV-1核酸定性檢測(cè)適應(yīng)范圍（1）診斷嬰兒早期感染：見第六章中“嬰兒HIV-1感染早期診斷相關(guān)的檢測(cè)策略及結(jié)果報(bào)告”。（2）診斷急性HIV-1感染。針對(duì)對(duì)HIV-1抗體篩查陰性、近期有流行病學(xué)史的個(gè)體,或確證結(jié)果不確定的樣本,核酸定性檢測(cè)可用于診斷HIV-1急性期感染。（3）確定艾滋病病毒感染。針對(duì)HIV-1抗體篩查陽(yáng)性或確證結(jié)果不確定的個(gè)體，結(jié)合流行病學(xué)史和臨床病史，核酸定性檢測(cè)可用于HIV-1感染診斷。艾滋病晚期患者可能出現(xiàn)HIV抗體反應(yīng)不確定，可根據(jù)HIV核酸定性檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合臨床病史和CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等情況，進(jìn)行綜合判斷，確定臨床診斷。方法：血漿、血清、組織器官或血液制品等可用于檢測(cè)HIV-1RNA和DNA。DBS可用于檢測(cè)RNA/DNA。全球目前正式用于臨床診斷HIV-1急性期感染的核酸檢測(cè)試劑比較少，主要是美國(guó)FDA批準(zhǔn)的Gen-Probe公司生產(chǎn)的AptimaHIV-1RNA核酸定性檢測(cè)試劑和歐盟批準(zhǔn)的AbbottM2000HIV-1RNA/DNA定性檢測(cè)試劑。前者檢測(cè)原理為轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（TMA）和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記探針雜交檢測(cè)，檢測(cè)靶基因?yàn)镠IV-1LTR和多聚酶基因；后者檢測(cè)原理為Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增檢測(cè)，檢測(cè)靶基因?yàn)槎嗑勖竻^(qū)整合酶基因。國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的用于血漿及其血液制品篩查的核酸檢測(cè)試劑主要為Taqman實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑。5.1.3試劑：必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。嚴(yán)格按說明書操作。5.1.4結(jié)果判定與報(bào)告：檢測(cè)結(jié)果顯示“有反應(yīng)”或“檢測(cè)到”，報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)核酸陽(yáng)性；檢測(cè)結(jié)果顯示“無反應(yīng)”或“未檢測(cè)到”，報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)核酸陰性。核酸定性檢測(cè)值低于最低檢測(cè)限的結(jié)果，不能排除HIV-1感染，需根據(jù)流行病學(xué)史、臨床病史和實(shí)驗(yàn)室相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷。目前國(guó)內(nèi)外沒有商品化的HIV-2核酸檢測(cè)試劑。5.2HIV核酸定量檢測(cè)5.2.1適用范圍（1）監(jiān)測(cè)抗病毒藥物治療效果?？共《舅幬镏委熐昂?，定期病毒載量分析和監(jiān)測(cè)，結(jié)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，有助于抗病毒藥物治療方案的確定和修改。（2）監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。定期檢測(cè)HIV-1病毒載量，有助于監(jiān)測(cè)感染者和病人的病程變化，結(jié)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，為抗病毒藥物治療提供病毒學(xué)依據(jù)。（3）診斷急性HIV-1感染。針對(duì)HIV-1抗體篩查陰性、近期有流行病學(xué)史的個(gè)體，或確證結(jié)果不確定，核酸定量檢測(cè)可用于診斷HIV-1急性期感染。（4）確定HIV-1感染。針對(duì)HIV-1抗體篩查陽(yáng)性或確證結(jié)果不確定的個(gè)體，結(jié)合流行病、和臨床病史和CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)等，使用核酸定量檢測(cè)幫助確定HIV-1感染。5.2.2方法HIV-1核酸定量檢測(cè)原理主要基于靶核酸擴(kuò)增RT-PCR和信號(hào)放大擴(kuò)增兩種方法。靶核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑包括Taqman熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR擴(kuò)增試劑（RocheCobasTaqManv2.0和AbbottRealTimeHIV-1）和分子信標(biāo)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR靶核酸擴(kuò)增試劑（NucliSENSEasyQ?HIV-1v2.0）；信號(hào)放大擴(kuò)增系統(tǒng)包括分枝鏈DNA雜交擴(kuò)增試劑（VersantHIV-1RNAbDNA3.0）。我國(guó)實(shí)驗(yàn)室常用國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR靶核酸擴(kuò)增試劑（熒光探針法）。盡管目前國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)的HIV-1核酸定量檢測(cè)試劑在檢測(cè)中需要的樣本量不同（0.1mL-1mL），但均能在檢測(cè)線性范圍內(nèi)準(zhǔn)確地檢測(cè)到1000c/mlHIV-1，有助于早期判斷治療失敗、可定向?qū)嵤┮缽男愿深A(yù)，確?？共《舅幬镏委熜Ч?guó)內(nèi)外定量檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告單位，多為每毫升血中病毒的拷貝數(shù)（CPs/ml）?？截悢?shù)與國(guó)際單位之間的轉(zhuǎn)換可參照各檢測(cè)試劑的說明或相關(guān)研究文獻(xiàn)。目前沒有商品化HIV-2定量檢測(cè)試劑。5.2.3試劑必須是經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。嚴(yán)格按說明書操作。5.2.4結(jié)果判定與報(bào)告按照試劑盒說明書判定結(jié)果。用于治療效果和病程監(jiān)測(cè)：檢測(cè)值小于試劑盒線性范圍下限，報(bào)告低于檢測(cè)限，檢測(cè)值大于等于試劑盒線性范圍下限，按照檢測(cè)值報(bào)告。用于HIV-1感染的診斷：檢測(cè)值>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報(bào)告檢測(cè)值；檢測(cè)值≤5000CPs/ml(或IUs/ml)，盡快再次嚴(yán)格按核酸檢測(cè)的要求采樣檢測(cè)，報(bào)告檢測(cè)值，結(jié)果>5000CPs/ml(或IUs/ml)，報(bào)告檢測(cè)值，結(jié)果仍≤5000CPs/ml，則需充分結(jié)合流行病學(xué)史、臨床病史、CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)和HIV-1抗體隨訪檢測(cè)結(jié)果等進(jìn)行綜合判斷。檢測(cè)值低于最低檢測(cè)限不能排除HIV-1感染。（注：由于核酸定量檢測(cè)方法獲得的低病毒檢測(cè)值可能是核酸污染所致的結(jié)果，根據(jù)國(guó)內(nèi)外的相關(guān)數(shù)據(jù)和報(bào)道，建議用5000CPs/ml作為判斷結(jié)果的閾值，兩次定量檢測(cè)有助于準(zhǔn)確判斷結(jié)果）。由于HIV-1高度變異，影響HIV-1病毒載量檢測(cè)分析的敏感性，且同一樣本由于不同試劑的方法學(xué)差異，可能出現(xiàn)不同的結(jié)果。因此應(yīng)選擇能檢測(cè)出當(dāng)?shù)豀IV-1流行毒株的試劑；評(píng)估抗病毒藥物療效和病程進(jìn)展，對(duì)同一病人宜使用相同試劑，有助于合理解讀病毒載量的變化。要考慮檢測(cè)試劑版本的更新情況。不同試劑間的檢測(cè)結(jié)果無固定的轉(zhuǎn)換關(guān)系。5.3集合核酸定性檢測(cè)（PoolingPCR）利用核酸檢測(cè)方法的高度敏感性，對(duì)高危人群抗體檢測(cè)陰性的樣品進(jìn)行集合核酸檢測(cè)，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)窗口期HIV-1感染者。該方法較單份樣品的核酸檢測(cè)具有更高的成本效益。5.3.1樣品集合程序根據(jù)預(yù)處理樣品量，計(jì)算預(yù)形成一級(jí)和二級(jí)集合數(shù)量，在登記表格上記錄一級(jí)和二級(jí)集合及對(duì)應(yīng)的原始樣品編號(hào)。吸取130L樣品，移入標(biāo)記二級(jí)集合的離心管中；10份樣品形成一個(gè)1300L的二級(jí)集合樣品，充分渦旋震蕩混勻。從5個(gè)二級(jí)集合管中分別吸取210L樣品，移入標(biāo)記有一級(jí)集合的離心管中，形成由50份樣品1050L體積組成的一級(jí)集合樣品，充分渦旋震蕩混勻。從每個(gè)一、二級(jí)集合管中吸取500L集合樣品，分裝至另一相應(yīng)標(biāo)記的離心管，用超敏感核酸檢測(cè)試劑進(jìn)行檢測(cè)。制備陰性集合外部質(zhì)控品：使用50份HIV抗體和核酸陰性樣品，按上述步驟，分別集合成5個(gè)陰性二級(jí)集合外部質(zhì)控品和1個(gè)一級(jí)集合外部質(zhì)控品。制備陽(yáng)性集合外部質(zhì)控品：從9份HIV抗體和核酸陰性樣品和一份至少含有HIV-1RNA1033CPs/ml陽(yáng)性樣品中，分別移取130L加入離心管中，形成一個(gè)1300L的陽(yáng)性二級(jí)集合外部質(zhì)控品。再分別從4個(gè)已制備好的陰性二級(jí)集合外部質(zhì)控品和上述陽(yáng)性二級(jí)集合外部質(zhì)控品中，移取210L至標(biāo)記為一級(jí)陽(yáng)性集合外部質(zhì)控品的離心管中，形成一級(jí)陽(yáng)性集合外部質(zhì)控品。一級(jí)和二級(jí)陰、陽(yáng)性集合外部質(zhì)控品分別用于RT-PCR中每一輪一級(jí)和二級(jí)集合樣品的檢測(cè)。5.3.2集合樣品的檢測(cè)和分解路線使用商品化核酸檢測(cè)試劑，應(yīng)嚴(yán)格按照試劑說明書操作。按照各商品化核酸試劑集合PCR的方案進(jìn)行檢測(cè)，集合樣品的數(shù)量根據(jù)各試劑方案操作。方法簡(jiǎn)述如下：用HIV-1病毒載量檢測(cè)方法對(duì)一級(jí)集合樣品進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性反應(yīng)的一級(jí)集合樣品進(jìn)入下一檢測(cè)步驟。用HIV-1病毒載量方法對(duì)所有組成陽(yáng)性一級(jí)集合的二級(jí)集合樣品進(jìn)行檢測(cè)，陽(yáng)性反應(yīng)的二級(jí)集合樣品進(jìn)入下一檢測(cè)步驟。用HIV-1RNART-PCR標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法檢測(cè)所有組成陽(yáng)性二級(jí)集合樣品的的10份單個(gè)樣品，確定核酸陽(yáng)性的單個(gè)樣品。5.3.3適用范圍血液篩查和各類高危人群樣品，通常是抗體篩查陰性樣品。要求樣品采集、分離、保存均能滿足核酸檢測(cè)要求。5.4HIV核酸即時(shí)檢測(cè)(molecularpoint-of-careTesting,POCT)HIV核酸即時(shí)檢測(cè)是在發(fā)病或者發(fā)生事件的地點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，能快速獲得檢測(cè)結(jié)果并及時(shí)反饋一線醫(yī)務(wù)人員的一類檢測(cè)方法。POCT檢測(cè)適用范圍廣泛，且可避免樣本長(zhǎng)途運(yùn)輸導(dǎo)致的質(zhì)量下降，非專業(yè)人員經(jīng)培訓(xùn)后也可操作?？捎糜贖IV-1感染、兒童早期HIV感染的輔助診斷、疾病監(jiān)控及抗病毒藥物療效評(píng)價(jià)。6質(zhì)量保證和質(zhì)量控制質(zhì)量控制包括從樣品接收到發(fā)出報(bào)告各環(huán)節(jié)的管理過程，包括：（1）人員；（2）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境；（3）儀器；（4）檢測(cè)過程（試劑、操作過程，外部質(zhì)控品使用）。所有相關(guān)檢驗(yàn)人員需經(jīng)過理論及實(shí)踐培訓(xùn)，能獨(dú)立熟練地操作，考核合格，持證上崗。6.1實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境HIV-1病毒載量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為三個(gè)獨(dú)立工作區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。嚴(yán)格要求三區(qū)的空氣流向：從試劑準(zhǔn)備區(qū)到樣品處理區(qū)，然后到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不能逆向流動(dòng)。6.2儀器設(shè)備質(zhì)量控制加樣器、溫濕度計(jì)須經(jīng)計(jì)量部門校準(zhǔn)，每年一次；要定期對(duì)HIV-1病毒載量檢測(cè)儀、實(shí)時(shí)熒光PCR儀等儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。冰箱、水浴箱用校準(zhǔn)合格的溫度計(jì)測(cè)量溫度，并做好記錄。6.3檢測(cè)過程質(zhì)量控制用于HIV感染臨床輔助診斷試劑要保證所有試劑盒有效并經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊(cè)，使用無DNA和RNA酶的水；嚴(yán)格執(zhí)行儀器和試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），不得擅自修改。HIV-1核酸定性檢測(cè)每次實(shí)驗(yàn)建議加陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和試劑對(duì)照。定量檢測(cè)建議使用一個(gè)HIV-1RNA為5000～150003CPs/毫升的外部質(zhì)控品；每次實(shí)驗(yàn)按照試劑盒說明書的要求使用試劑盒提供的外部質(zhì)控品，并滿足外部質(zhì)控品的要求。6.4外部質(zhì)量控制國(guó)家艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室每年組織兩次病毒載量的能力驗(yàn)證，每次5個(gè)樣品，具