組織培養(yǎng)課件器官培養(yǎng)

第五章

器官和組織培養(yǎng)1第五章

器官和組織培養(yǎng)1植物某一器官的全部或部分或器官原基的離體培養(yǎng)，包括根、莖、葉、花、果實、種子等。特點：能保持器官所具有的特征性結(jié)構(gòu)。指形成層組織、分生組織、表皮組織、薄壁組織和各種器官組織以及愈傷組織的培養(yǎng)。器官培養(yǎng)（Organculture）組織培養(yǎng)（Tissueculture）2植物某一器官的全部或部分或器官原基的離體培養(yǎng)，包括根、莖、葉一、莖的培養(yǎng)1、類型莖尖培養(yǎng)：莖段培養(yǎng)：嫩莖段常作為快速繁殖的外植體：即當(dāng)年萌發(fā)或新抽出的尚未完全木質(zhì)化的枝條，其細(xì)胞的可塑性大，容易離體培養(yǎng)。10-100m的莖尖分生組織（脫毒）帶有腋(側(cè))芽或葉柄、長幾厘米的莖節(jié)段進(jìn)行離體培養(yǎng)（快繁）3一、莖的培養(yǎng)1、類型莖尖培養(yǎng)：嫩莖段常作為快速繁殖的外植體：將經(jīng)過表面消毒的莖段在無菌條件下，切成幾厘米長帶節(jié)的節(jié)段，接種在固體培養(yǎng)基上。經(jīng)過培養(yǎng)后，在莖段可直接發(fā)生不定芽，或先誘導(dǎo)形成愈傷組織，再脫分化形成再生苗。把再生苗進(jìn)行切割，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，便可得到完整的小植株。2、作用無性系快速繁殖；培養(yǎng)無病毒苗，品種改良；理論基礎(chǔ)研究。3、建立無菌材料（莖段）及培養(yǎng)4將經(jīng)過表面消毒的莖段在無菌條件下，切成幾厘米長帶節(jié)的節(jié)段，接圖示莖段培養(yǎng)過程健康植株上選健壯的枝梢去葉片用自來水沖洗再生培養(yǎng)MS培養(yǎng)基75%酒精1分鐘1%次氯酸鈉0.1%升汞5圖示莖段培養(yǎng)過程健康植株上選健壯的枝梢去葉片用自來水沖洗再4、莖的培養(yǎng)發(fā)育方向腋芽萌發(fā)脫分化后產(chǎn)生胚狀體（原球莖）脫分化后直接產(chǎn)生不定器官離體繁殖建立懸浮系或分化胚狀體及不定芽脫分化后形成愈傷組織64、莖的培養(yǎng)發(fā)育方向腋芽萌發(fā)離體繁殖建立懸浮系或分化胚狀體及蝴蝶蘭腋芽萌發(fā)7蝴蝶蘭腋芽萌發(fā)75、影響發(fā)育方向的因素外植體大小培養(yǎng)條件培養(yǎng)基生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度微形外植體或分生組織易產(chǎn)生愈傷組織細(xì)胞分裂素和生長素的配比是關(guān)鍵。21-25℃，12小時光照/天85、影響發(fā)育方向的因素外植體大小微形外植體或分生組織易產(chǎn)生愈舉例：影響月季莖段增殖培養(yǎng)的因素1．腋芽在莖段上的位置。每段的一個腋芽培養(yǎng)在無激素的基本培養(yǎng)基上，23天后，接近枝條最頂端的和緊挨著枝條基部的芽發(fā)育最慢，而枝條中部的芽發(fā)育最快。2．去莖頂端的作用。繼代培養(yǎng)接種時切去嫩莖的頂芽后，再轉(zhuǎn)接于新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，促進(jìn)嫩莖的增殖。3．嫩莖長度對形成多芽苗的影響。莖段為1-10mm長短時，對形成多芽苗最有效，而且每個莖段的側(cè)枝數(shù)也較多，若切割過短(小于1mm)或過長(11-15mm)都對莖的增殖不利。9舉例：影響月季莖段增殖培養(yǎng)的因素94．植物生長調(diào)節(jié)劑的影響。采用適當(dāng)濃度的植物生長抑制劑三碘苯甲酸可以促進(jìn)嫩莖增殖。6-BA是促進(jìn)莖增殖最有效的細(xì)胞分裂素，濃度在1-3mg/L，濃度高會減少莖的伸長，也對下一步生根起抑制作用。用1mg/L6-BA配合1mg/LNAA，雖然使莖的增殖略有降低，但可使莖得到伸長。赤霉素抑制月季莖的增殖。104．植物生長調(diào)節(jié)劑的影響。10二、根的培養(yǎng)離體根由于具有生長迅速、代謝活躍及在已知條件下培養(yǎng)，可根據(jù)需要增減培養(yǎng)基中的成分等優(yōu)點，對離體根的培養(yǎng)多用于探索植物根系的生理及其代謝活動。在離體根培養(yǎng)中，自然條件下生長在土壤中的根要解決消毒問題，是非常困難的，常用無菌苗的根作為培養(yǎng)材料。11二、根的培養(yǎng)11番茄根的培養(yǎng)過程番茄種子常規(guī)表面消毒，在無菌條件下，在培養(yǎng)基上萌發(fā)。胚根長至30-40mm后，從根尖一端切取10mm長接種于固體培養(yǎng)基中。暗條件下培養(yǎng)4天有側(cè)根發(fā)生，7天后又可以切下側(cè)根的根尖作為新的培養(yǎng)材料再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。由單個直根衍生，并經(jīng)繼代培養(yǎng)而保持遺傳性一致的根的培養(yǎng)物，稱為離體根的無性系。12番茄根的培養(yǎng)過程12硫胺素(維生素B1)和吡哆醇(維生素B6)對離體根培養(yǎng)的作用明顯。碘有利于番茄根的生長。硼對離體根的生長也具有重要的影響，缺硼會降低根尖細(xì)胞的分裂速度，阻礙細(xì)胞伸長等。13硫胺素(維生素B1)和吡哆醇(維生素B6)對離體根培養(yǎng)的作用生長素對不同植物的根離體培養(yǎng)三種反應(yīng)：生長素促進(jìn)離體根的生長(如玉米、小麥等)；離體根的生長依賴于生長素的作用(如黑麥)；生長素抑制離體根的生長（櫻桃，番茄）。14生長素對不同植物的根離體培養(yǎng)三種反應(yīng)：14三、葉的培養(yǎng)很多植物（非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等）的葉片具有很強(qiáng)的再生能力，由于取材方便，數(shù)量多且均一性較強(qiáng)，可以作為適宜的外植體。15三、葉的培養(yǎng)很多植物（非洲紫羅蘭、香葉、天竺葵、秋海棠等）的基本培養(yǎng)過程取葉片表面消毒平放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)大多植物的葉組織在離體培養(yǎng)條件下先形成愈傷組織，再分化出胚狀體、莖、葉和根。1.將葉表面洗干凈，70％乙醇浸泡30秒表面消毒，用0.1％升汞浸泡數(shù)分鐘。2.葉片在培養(yǎng)基上的生長狀況大多依賴于離體時的成熟程度，幼葉比近成熟的葉生長潛力大。16基本培養(yǎng)過程取葉片表面消毒平放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)1717葉片

誘導(dǎo)叢生芽

生根培養(yǎng)

移栽。非洲紫羅蘭嫩葉，70％酒精略蘸一下，再0.1％升汞溶液消毒5-8min，無菌水沖洗數(shù)次，切成0.5-1cm的小塊接種于MS+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA光照條件下培養(yǎng)，35天后葉片直接分化出叢生芽。小叢生芽轉(zhuǎn)接于1/2MS+0.2mg/LIBA的培養(yǎng)基上，10