第五次普通微生物學(xué)實驗

第五次普通微生物學(xué)實驗第1頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理1.培養(yǎng)基的概念是根據(jù)微生物滿足生長的營養(yǎng)需求，人工配制的混合營養(yǎng)基質(zhì)。必需的養(yǎng)分適合的環(huán)境不同類的微生物因生理類型不同而表現(xiàn)出不同的營養(yǎng)需求所以不同類的微生物一般采用不同的培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基——細(xì)菌專用馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基——真菌專用高氏一號培養(yǎng)基——放線菌專用第2頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月2.培養(yǎng)基的分類（1）按存在的物理狀態(tài)分液體培養(yǎng)基（不含凝固劑）半固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂含0.2--0.5%）固體培養(yǎng)基（凝固劑瓊脂含1.5--2.0%）。（2）按照培養(yǎng)基的用途差異分基礎(chǔ)培養(yǎng)基加富培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基第3頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）按組成成分分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基瓊脂的特性：成分是多縮半乳糖，絕大多數(shù)微生物不能分解利用。96℃溶解，45℃凝固對微生物生長沒有毒害作用培養(yǎng)基的作用：微生物分離、培養(yǎng)、增殖、保藏及鑒定。第4頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月3.培養(yǎng)基配制原則選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比合適控制pH條件控制氧化還原電位原料來源的選擇根據(jù)培養(yǎng)目的不同調(diào)配滅菌處理第5頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月4.配制培養(yǎng)基的步驟原料的預(yù)處理計算用量稱量溶解調(diào)pH過濾分裝：試管：固體：1/5試管；液體：1/4-1/5。三角瓶：1/3-1/2包扎滅菌：一般培養(yǎng)基，1210C,15-30min；含糖培養(yǎng)基：1120C,15-30min；易產(chǎn)生沉淀的物質(zhì)：分別滅菌后再混合擺斜面（固體，試管）無菌檢查第6頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月第7頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月四、作業(yè)

2人1組配制阿須貝培養(yǎng)基2000ml（全班），每組用250ml三角瓶裝120ml；裝蒸餾水3支，每支4.5ml

第8頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項1、稱取藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙稱一種藥品；2、蛋白胨極易吸濕，稱取時動作要迅速；3、配制固體培養(yǎng)基時，先將其他藥品加熱溶解到快沸時，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至瓊脂完全熔化，此過程要不斷攪拌，以免瓊脂糊底，并控制火力，防止沸騰外溢；4、分裝量根據(jù)試管大小和實際需要而定，固體培養(yǎng)基裝量約為管高的1/5，液體培養(yǎng)基的裝量約為管高的1/4，三角瓶的裝量不超過瓶體的1/2；5、分裝過程中注意不要將培養(yǎng)基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。第9頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗12滅菌和消毒

一、實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)微生物實驗的一些準(zhǔn)備方法（滅菌培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備、滅菌吸管的準(zhǔn)備、無菌水的準(zhǔn)備、培養(yǎng)基平板和斜面的準(zhǔn)備等），為后續(xù)實驗做準(zhǔn)備。了解消毒與滅菌應(yīng)用范圍及基本原理，學(xué)習(xí)并掌握實驗室常用消毒與滅菌的方法第10頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月二、實驗原理

滅菌是應(yīng)用理化方法殺滅物體上所有微生物

消毒是應(yīng)用理化方法殺滅物體上部分微生物（主要是病原微生物）。三、滅菌的常用方法物理法：高溫滅菌、紫外線滅菌、過濾除菌化學(xué)法：化學(xué)藥劑殺菌第11頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月高溫滅菌

干熱滅菌(dryheatsterilization)1.火焰滅菌：酒精燈、接種環(huán)2.干燥熱空氣箱滅菌：干燥熱空氣箱160-170℃,2小時（利用熱空氣滅菌)適用范圍：金屬器皿、玻璃器皿第12頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月濕熱滅菌(moistheatsterilization)

利用飽和熱蒸汽滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋采用高壓蒸汽滅菌法是濕熱滅菌的一種。利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升以達(dá)到高溫滅菌目的的方法a方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。b適用：耐高溫物品如培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿。c注意事項：滅菌開始排凈冷空氣；滅菌終了，自然緩慢降壓回零；滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。第13頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓蒸汽滅菌鍋原理：利用飽和熱蒸汽滅菌。利用水的沸點隨水蒸氣壓力的增加而上升以達(dá)到高溫滅菌的目的。方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）20-30min。適用：耐高溫物品如培養(yǎng)基，無菌水，培養(yǎng)皿。注意事項：滅菌開始，外筒加水，桶蓋對稱擰緊，排凈冷空氣；

滅菌終了，自然緩慢降壓回零；

滅菌結(jié)束，趁熱取出物品。第14頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月四、高壓蒸汽滅菌操作步驟(1)滅菌前的準(zhǔn)備：將高壓蒸汽滅菌鍋的內(nèi)桶取出，向外鍋內(nèi)加入適量的水，將內(nèi)桶放入。(2)裝放待滅菌物品：將已包扎好的物品放入內(nèi)桶。蓋上鍋蓋，以兩兩對稱方式同時旋緊螺栓，勿使漏氣。(3)加熱排氣：接通電源，同時打開排氣閥，待見有大量水汽排出時，維持3---5min，鍋內(nèi)空氣排盡，關(guān)上排氣閥。(4)升溫保壓：★壓力為1.05kg/cm2,121.3℃,20~30min(5)出鍋；隔斷熱源，自然降溫，待壓力表指針回到零，打開排氣閥，稍等一些時間，再開蓋取物。第15頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗13微生物的純系分離

1了解土壤微生物的分離純化及測數(shù)的基本原理。2

學(xué)習(xí)并掌握微生物分離純化技術(shù)方法。3

學(xué)習(xí)并掌握微生物平板菌落計數(shù)的技術(shù)方法。第16頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月二、基本原理

土壤是微生物生活的大本營，其中含有大量不同類型的微生物，可按照一定的方法將各類微生物通過分離進(jìn)行純培養(yǎng)，并能對特定類群進(jìn)行數(shù)量測定。

基本原理是通過稀釋使菌體細(xì)胞充分分散，單細(xì)胞得以生長發(fā)育形成菌落，可使用稀釋法或平板劃線法進(jìn)一步純化，還可通過平板菌落計數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。第17頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月圖14-1從土壤中分離微生物操作過程第18頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月三、實驗步驟

土壤樣品采集在待測田塊上，若田塊面積小于50平方米則按對角線三點采樣；若田塊面積大于50平方米按對角線五點采樣。采樣一般定點于耕作層0--20cm，先除去表土1--2cm，以無菌鏟采土足量充分混勻后用無菌塑料袋分裝。第19頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月固氮菌的分離純化及測數(shù)1.制備土樣稀釋液2.培養(yǎng)基的準(zhǔn)備3.傾注法接種4.保溫培養(yǎng)5.分區(qū)劃線法純化6.計數(shù)第20頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月1制備土樣稀釋液吹吸三次混勻，無菌操作第21頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月2培養(yǎng)基的準(zhǔn)備

融化阿須貝培養(yǎng)基，融化后保溫在48℃。并取3個無菌培養(yǎng)皿，分別在皿底貼好標(biāo)簽，注明10-2、10-3、10-4。

3傾注法接種

先按10-4

、10-3

、10-2

的順序?qū)⒉煌♂尪染鷳乙航尤雽?yīng)平皿中（每個平皿接入1ml），再向每個平皿傾注約15ml的阿須貝培養(yǎng)基（50℃）待冷凝，混合均勻。

4保溫培養(yǎng)

將已經(jīng)接種的平皿靜置10min后，放入溫箱倒置培養(yǎng)7日（30℃），觀察結(jié)果。

第22頁，課件共26頁，創(chuàng)作于2023年2月第23頁，課