自然條件下自然條件下私種高血量抗體對根田鼠子代生產(chǎn)的影響

自然條件下自然條件下私種高血量抗體對根田鼠子代生產(chǎn)的影響

在自然界中，動物群的環(huán)境具有時空動態(tài)變化的特點。社群環(huán)境的變化對動物的干擾具有易變性和不穩(wěn)定性,其對動物產(chǎn)生的生理效應(yīng)之一是使其處于慢性應(yīng)激狀態(tài),并對動物的生活史或表型特征產(chǎn)生深遠(yuǎn)的影響(Buchanan,2000;Wingfield,2005;Bartolomucci,2007)。應(yīng)激是生物體受到過強或有害刺激后,為維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)而引起的生物學(xué)反應(yīng)(Selye,1946;Romero,2004)。動物處于應(yīng)激狀態(tài)時可分泌大量的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、促腎上腺皮質(zhì)激素、糖皮質(zhì)激素和兒茶酚胺等多種激素和神經(jīng)遞質(zhì)以應(yīng)對惡劣環(huán)境或應(yīng)激源。而妊娠階段的母體應(yīng)激所分泌的糖皮質(zhì)激素和兒茶酚胺可進(jìn)入胎盤血液到達(dá)胎兒大腦(Johnsonetal.,1992),并可*通訊作者,correspondingauthor,E-mail:bjh@能影響胎兒免疫系統(tǒng)的發(fā)育及產(chǎn)后子代的免疫功能(Seckl,2004;Kapooretal.,2006)。母體應(yīng)激還可改變子代下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPA)和交感-腎上腺-髓質(zhì)軸(sympathetic-adrenal-medullaryaxis,SAM)的功能(Johnsonetal.,1992)。而HPA軸和SAM軸是影響機體免疫功能的主要軸系(PadgettandGlaser,2003)。因此,母體應(yīng)激對子代免疫功能的影響成為近年生理學(xué)及免疫學(xué)的研究熱點。目前,該領(lǐng)域的研究結(jié)果并不一致。有研究表明,母體妊娠期的應(yīng)激可降低子代自然殺傷細(xì)胞毒性、淋巴細(xì)胞增殖能力、輔助T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T細(xì)胞的數(shù)量、抗體產(chǎn)生的能力以及遲發(fā)性超敏反應(yīng),抑制子代的免疫力(Sobrianetal.,1997;Kayetal.,1998;Llorenteetal.,2002;G?tzandStefanski,2007),使母體應(yīng)激子代對疾病和感染的敏感性增加(Llorenteetal.,2002;G?tzandStefanski,2007),其存活率降低(Patinetal.,2002;Tuchschereretal.,2002)。但另外一些研究未發(fā)現(xiàn)此類現(xiàn)象(KleinandRager,1995;Tuchschereretal.,2002)。Merlot等(2008)分析了此類研究后認(rèn)為,母體應(yīng)激對子代免疫力的不同作用與母體應(yīng)激時胎兒所處的發(fā)育階段有關(guān)。Merlot等(2008)還認(rèn)為,應(yīng)激源類型是影響母體應(yīng)激結(jié)果的重要因素。Klein和Rager(1995)等在孕期最后一周對大鼠母體進(jìn)行束縛應(yīng)激后,子代抗匙孔血藍(lán)蛋白(keyholelimpethaemocyaninKLH)的抗體含量較對照升高,但在相同時間段對大鼠母體施加旋轉(zhuǎn)應(yīng)激后,子代抗KLH的抗體含量較對照顯著降低(Gorczynski,1992)。在母體應(yīng)激對子代免疫功能的研究中,應(yīng)激源類型多為非自然應(yīng)激源,如噪音和光照(Kayetal.,1998)、束縛(Tuchschereretal.,2002)、足部電刺激(Netoetal.,2001)。以社群沖突作為母體應(yīng)激源的研究僅見G?tz和Stefanski(2007)及G?tz等(2007)的工作,此類研究采用居住者-入侵者沖突(resident-intruderconfrontation)實驗方法對大鼠的研究結(jié)果表明,母體社群應(yīng)激顯著降低成體子代CD4+和CD8+淋巴細(xì)胞數(shù)量(G?tzandStefanski,2007;G?tzetal.,2007)。在自然種群中,種群密度與個體間的攻擊行為存在密切關(guān)聯(lián)(聶海燕等,1995,2006;NieandLiu,2005)。而攻擊行為是引起種群個體糖皮質(zhì)激素水平升高且使其處于應(yīng)激狀態(tài)的重要應(yīng)激源(stressor)之一(BoonstraandBoag,1992;Rogovinetal.,2003;Lietal.,2007,邊疆暉等,2008)。就應(yīng)激源類型而言,高密度種群通過攻擊行為導(dǎo)致的社群應(yīng)激與居住者-入侵者沖突方法引起的社群應(yīng)激相類似。其次;雖然目前尚不了解小哺乳動物胎兒免疫系統(tǒng)發(fā)育的關(guān)鍵時期,但繁殖期高密度種群通過社會性沖突對個體可產(chǎn)生頻繁的、不可預(yù)測和持續(xù)的社群應(yīng)激,換言之,只要種群密度維持在足以使個體產(chǎn)生社群應(yīng)激的水平之上,那么,在繁殖期,高密度所導(dǎo)致的對妊娠母體的社群應(yīng)激就不可能局限于某個特定的時間段,而應(yīng)存在于母體的整個妊娠期。進(jìn)一步地,如果高密度種群通過母體社群應(yīng)激而影響子代的免疫力,那么,子代免疫力則不僅與其當(dāng)前的環(huán)境條件有關(guān),而且依賴于其母體環(huán)境。再次,如果具有較低免疫功能的個體更容易感染病菌和微生物,并有較高的死亡率(Seedetal.,1976),或更易被捕食者捕獲(Hunson,1986;M?lleretal.,2003),那么,母體社群應(yīng)激將導(dǎo)致子代存活率對當(dāng)前環(huán)境的遲滯性反應(yīng),即子代在t時間的存活率有t-1時間的母體應(yīng)激效應(yīng),繼而導(dǎo)致對種群的遲滯性密度制約(delayeddensitydependence)作用。而遲滯性密度制約是導(dǎo)致種群產(chǎn)生波動或混沌的必要條件(Hornfeldt,1994;OstfeldandCanham,1995)。因此,探討小哺乳動物種群母體社群應(yīng)激對子代免疫力的作用,對理解和闡釋種群波動機制將具有重要的學(xué)術(shù)價值和理論意義。本項研究以棲息于青海高寒草甸地區(qū)的根田鼠(Microtusoeconomus)為研究對象,以實驗生態(tài)學(xué)方法,通過在野外圍欄建立不同密度種群,測定不同種群建群者的皮質(zhì)酮含量,以及F1代血細(xì)胞數(shù)量、抗KLH免疫球蛋白G(immunoglobulinG,IgG)含量以及脾臟指數(shù)的變化,旨在提出和檢驗如下假設(shè):在自然種群中,高密度種群可通過對母體的社群應(yīng)激而降低子代的免疫力。其研究目的是為探討母體應(yīng)激效應(yīng)對種群波動的調(diào)節(jié)作用提供理論依據(jù)。1試驗設(shè)計與研究方法1.1垂穗藥物種草坪本項研究于2005年4月至2006年7月,在中國科學(xué)院高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)定位站地區(qū)進(jìn)行。實驗圍欄內(nèi)的植被類型為垂穗披堿草(Elymusnutans)草甸。主要優(yōu)勢植物為垂穗披堿草、早熟禾(Poaspp.)、矮嵩草(Kobresiahumilis)、苔草(Carexspp.)和金露梅(Potentillafruticos)等。該植被類型土壤疏松,植被覆蓋度較大(50%～70%),為根田鼠自然棲息地。1.2種群及實驗方法圍欄以2m×1m的鍍鋅鋼板構(gòu)成。鋼板埋入地下0.5m,地上部分高1.5m。鋼板之間用L45×45角鋼固定。圍欄總面積為0.9hm2,由6個0.15hm2(50m×30m)的小圍欄組成。實驗前,用2周時間,捕盡圍欄內(nèi)的留居根田鼠和非靶動物。把構(gòu)建圍欄種群的個體稱為建群者(founder)。建群者為2004年9月在研究地區(qū)不同地點捕獲的當(dāng)年未參加繁殖的亞成體(雄性體重為20～26g之間,雌性體重為15～21g之間)。放入圍欄前,將雌雄個體分別置于TPX-CP-4(44.6cm×31.4cm×20.0cm)聚丙烯飼養(yǎng)籠內(nèi)飼養(yǎng),每籠2只同性別個體。以木屑和脫脂棉為巢材,供給充足飲水和兔顆粒飼料(北京實驗動物飼養(yǎng)中心生產(chǎn))。室溫控制在20℃±2℃,光照周期為16L∶8D。2005年4月18日,將6個小圍欄中的4個用于建立根田鼠高密度和低密度種群,每個密度設(shè)2個重復(fù)。每小欄放入30對建群者為高密度種群,每小欄放入6對建群者為低密度種群?？紤]到建群者在放入圍欄初期可能由于某些原因而死亡,且根田鼠在不同棲息地間及年內(nèi)不同季節(jié)的種群數(shù)量均相差3倍以上(姜永進(jìn)等,1991;孫平等,2005),故將高密度和低密度種群的數(shù)量差異設(shè)置為5倍,相當(dāng)于研究地區(qū)根田鼠自然種群的高密度和中等密度水平(劉季科等,1982;姜永進(jìn)等,1991)。4個小欄內(nèi)的建群者的體重彼此接近(高密度雌體:23.22±5.75g和24.99±4.46g;高密度雄體:33.54±7.60g和36.18±7.86g;低密度雌體:22.52±7.92g和25.05±3.36g;低密度雄體:37.43±7.80g和34.40±6.85g,F3,144=1.14,P>0.05)。每個小圍欄內(nèi),以5m×5m的間隔設(shè)置籠站。每個籠站附近放置1～2個小型木質(zhì)的自制活捕鼠籠,放入少量胡蘿卜塊為誘餌,以脫脂棉作為巢材。鼠籠頂部用木板遮擋,以防氣溫過高或淋雨造成進(jìn)籠個體的死亡。建群者在小圍欄內(nèi)適應(yīng)1周后,于2005年4月26日開始正式實驗。采用剪指法標(biāo)志重捕種群,每隔一周標(biāo)志重捕1次,每次持續(xù)3～4d。在標(biāo)志重捕期間,每天6:00～6:30開放鼠籠,20:00～20:30關(guān)閉鼠籠,以防溫度過低導(dǎo)致重捕個體死亡,2005年6月30日結(jié)束實驗。由于被捕獲的動物在籠中的時間各不相同,而此類活捕可能使動物產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)(HarperandAustad,2001),因而,將各小圍欄內(nèi)的建群者在實驗室適應(yīng)性飼養(yǎng)3d,使其測定條件標(biāo)準(zhǔn)化后(Boonstraetal.,1998),測定其血漿皮質(zhì)酮含量。在種群的標(biāo)志重捕過程中,用熒光標(biāo)記法(LemenandFreeman,1985;NieandLiu,2005)標(biāo)記妊娠母體的洞道系統(tǒng)。由于根田鼠的妊娠時間、斷乳日齡均為20d(Bianetal.,2005),在標(biāo)記洞口10d后或發(fā)現(xiàn)該妊娠雌體分娩后,于洞口置籠,每天隔4h檢查1次。為避免夜晚溫度過低而使子代個體死亡,晚20:00～20:30至次日凌晨6:00～6:30期間關(guān)閉鼠籠。為避免同窩個體所測數(shù)據(jù)的非獨立性,每窩子代中僅取出體重大于9g的雌雄幼體各1只,日齡約在20日齡(梁杰榮等,1982;Bianetal.,2005)。從圍欄中取出的子代帶回實驗室后,隨機配對,置于聚丙烯飼養(yǎng)籠(44.60cm×31.40cm×20.00cm)內(nèi)飼養(yǎng)。溫度及光照周期均為自然條件?；\內(nèi)以木屑和脫脂棉作為巢材,供給充足飲水。在實驗室飼養(yǎng)的第一周,考慮到幼體尚難取食兔顆粒飼料食物,該階段以胡蘿卜為食,之后,喂以充足的兔顆粒飼料,并輔以少量胡蘿卜。2006年4月18日,在6個小圍欄中的另外2個空余小欄重復(fù)2005年的圍欄操作。種群建群者來源于2005年秋季在研究地區(qū)不同地點捕獲的當(dāng)年未參與繁殖的亞成體根田鼠。建立種群后的所有實驗方法同2005年的實驗操作。1.3檢測方法及檢測條件由于妊娠雌體的體液免疫反應(yīng)、皮質(zhì)酮含量及其他參數(shù)較非妊娠雌體有較大變化,故測量時將妊娠雌體剔除不用。將建群者在實驗室快速斷頭采血(低密度:n♂2005年=3,n♂2006年=3;n♀2005年=5,n♀2006年=5;高密度:n♂2005年=11,n♂2006年=6;n♀2005年=12,n♀2006年=8)。處死動物的過程參照美國哺乳動物學(xué)會的建議(AnimalCareandUseCommittee,1998)。此過程在1min內(nèi)完成,并用肝素鈉進(jìn)行抗凝處理。在4℃條件下,以4000r/min離心15min,分離血漿,置于液氮速凍,轉(zhuǎn)移至-20℃冰箱,待測皮質(zhì)酮含量。子代在室內(nèi)飼養(yǎng)至當(dāng)年的8月20日。此時個體的日齡為70～90d,均已性成熟(梁杰榮等,1982;Bianetal.,2005)。將不同年份子代個體隨機分為2組,分別用于測定抗體含量(低密度:n♂2005年=5,n♂2006年=4;n♀2005年=5,n♀2006年=5;高密度:n♂2005年=6,n♂2006年=5;n♀2005年=6,n♀2006年=6),以及血細(xì)胞數(shù)量和脾臟重量(低密度:n♂2005年=4,n♂2006年=4;n♀2005年=5,n♀2006年=4;高密度:n♂2005年=7,n♂2006年=5;n♀2005年=6,n♀2006年=5)。在抗體測定組中,每只個體注射KLH150μg/0.1ml生理鹽水。對照組注射相同體積的生理鹽水。10d后,快速斷頭采血。分離血清,-20℃保存以備測定抗KLH抗體含量。在血細(xì)胞數(shù)量和脾臟重量測定組中,于08:30～11:00將子代快速斷頭采血,取20μl血液轉(zhuǎn)入含K2-EDTA的抗凝管中,在6h內(nèi)檢測白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞及單核細(xì)胞數(shù)量。該組動物采血后,取脾臟器官,用感量為0.0001的電子分析天平稱重。脾臟重量以脾臟指數(shù)表示。脾臟指數(shù)=器官濕重(mg)/體重(g)。血漿皮質(zhì)酮的測定采用酶聯(lián)免疫(ELISA)競爭法,其原理是根據(jù)樣品皮質(zhì)酮和一定量的辣根過氧化物酶(horse-radishperoxidase)標(biāo)記的皮質(zhì)酮與包被在測定板上的皮質(zhì)酮抗血清競爭結(jié)合的原理進(jìn)行檢測。檢測試劑盒由Biosource公司提供。具體實驗方法如下:1)取出抗皮質(zhì)酮抗體包被好的96孔板;2)孔中分別加入25μl標(biāo)準(zhǔn)品(0,0.7,3.5,5,15,30,60,120,240nmol/L)或樣品,再加入100μl酶標(biāo)皮質(zhì)酮試劑;3)輕輕混勻30s,在20～25℃條件下溫育60min;4)去除孔內(nèi)液體,用洗滌液清洗反應(yīng)板3次;5)每孔加入200μl顯色液,輕輕混勻10s,室溫放置15min;6)每孔加入100μl終止液。輕輕混勻30s,15min內(nèi)在450nm處讀吸光值。本試劑盒的靈敏度為0.7nmol/L。批內(nèi)差和批間差分別小于5%和7%。IgG測定雙抗體夾心ABC-ELISA法。KLH為sigma產(chǎn)品。HRP標(biāo)記的二抗均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。具體實驗方法如下:1)取KLH包被好的96孔微孔板,設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔,每孔中各加入抗體稀釋液100μl,第1孔加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,混勻后用加樣器吸出100μl,移至第2孔。如此反復(fù)作對倍稀釋至第7孔,最后,從第7孔中吸出100μl棄去,使之體積均為100μl。第8孔為空白對照。在待測孔中每孔各加入樣品稀釋液80μl和已稀釋待測樣品20μl;2)將反應(yīng)板充分混勻后在37℃下溫育60min;3)洗板;4)每孔加酶標(biāo)抗體工作液100μl,將反應(yīng)板在37℃下溫育60min;5)洗板后,每孔加入底物工作液100μl,置37℃暗處反應(yīng)5～10min;6)每孔加50μl終止液混勻;7)在450nm處測吸光值。批內(nèi)差和批間差分別小于5%和10%。血細(xì)胞數(shù)測定在法國產(chǎn)ABXMicros-60型全自動血細(xì)胞分析儀上進(jìn)行。1.4數(shù)據(jù)處理及分析由于本研究是探討母體社群應(yīng)激對子代免疫力的作用,因而同一小圍欄內(nèi)不同窩的子代個體可視為獨立樣本。由于不同處理的種群建群者的皮質(zhì)酮含量、子代抗KLH抗體含量、脾臟指數(shù)及血細(xì)胞數(shù)無顯著的年間差異(表1),故將相應(yīng)數(shù)據(jù)合并,用雙因素方差分析(two-wayANOVA)檢驗不同密度處理及性別對建群者皮質(zhì)酮、子代抗KLH的IgG含量、脾臟指數(shù)及血液學(xué)參數(shù)的效應(yīng)。以t-test方法分析不同密度對同一性別個體相關(guān)免疫參數(shù)的作用。用三因素方差分析(three-wayANOVA)檢驗不同密度處理、性別及年間對子代體重的效應(yīng)。所有數(shù)據(jù)處理均在SPSS10.0上進(jìn)行。顯著性水平為0.05,平均數(shù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。2密度對體質(zhì)量的影響,主要有5個月生存率f,5.雙因素方差分析結(jié)果表明,根田鼠高密度種群建群者的皮質(zhì)酮含量顯著高于低密度種群建群者(F1,53=7.25,P=0.010,圖1),雌體皮質(zhì)酮含量顯著高于雄體(F1,53=4.37,P=0.042)。t-test檢驗結(jié)果表明,高密度雄性和雌性建群者的皮質(zhì)酮水平分別顯著高于低密度個體(雄性:t=2.457,df=21,P=0.023,雌性:t=2.269,df=28,P=0.031)。種群密度對子代各型血細(xì)胞數(shù)量均無顯著作用(白細(xì)胞:F1,38=0.50,P=0.486;淋巴細(xì)胞:F1,38=0.04,P=0.847;單核細(xì)胞:F1,38=0.94,P=0.339;粒細(xì)胞:F1,38=0.64,P=0.428,表2),也無性別差異(白細(xì)胞:F1,38=0.08,P=0.775;淋巴細(xì)胞:F1,38=1.71,P=0.200;單核細(xì)胞:F1,38=0.63,P=0.434;粒細(xì)胞:F1,38=0.24,P=0.647)。高密度子代抗KLH的IgG抗體含量顯著低于低密度子代(F1,42=6.97,P=0.012,圖2),但子代間無性別差異(F1,42=0.66,P=0.423)。t-test分析結(jié)果表明,不同密度處理雄性子代間的IgG抗體含量無顯著差異(t=0.67,df=18,P=0.509),但高密度雌性子代IgG含量顯著低于低密度雌性個體(t=3.54,df=20,P=0.002)。說明,母體社群應(yīng)激對雌性子代IgG抗體含量的影響較雄性子代大。高密度種群子代個體的脾臟指數(shù)顯著大于低密度種群子代(F1,40=9.28,P=0.004,圖3),但無性別差異(F1,40=0.63,P=0.431)。t-test分析結(jié)果表明,高密度種群的雌性子代的脾臟指數(shù)顯著大于低密度種群的雌性子代(t=2.12,df=18,P=0.04),高密度雄性子代脾臟指數(shù)與低密度雄性子代間無顯著差異(t=1.81,df=18,P=0.087)。上述結(jié)果說明,母體社群應(yīng)激對子代脾臟指數(shù)的顯著效應(yīng)主要是由于對雌性子代的作用所致。帶回實驗室的子代體重在不同密度和年份間均無顯著差異(表3,密度:F1,82=0.17,P=0.6846,年份:F1,82=0.04,P=0.948),性別間也無顯著差異(F1,82=0.30,P=0.586)。在實驗結(jié)束時,不同密度子代體重和年份間無顯著差異(表3,體重:F1,82=0.39,P=0.536,年份:F1,82=0.21,P=0.645),但雄性子代體重顯著大于雌性子代(F1,82=19.22,P<0.001)。3高密度子代的免疫參數(shù)本研究結(jié)果表明,高密度子代的脾臟指數(shù)顯著大于低密度子代。脾臟是哺乳動物體內(nèi)重要的免疫器官,它不僅是T細(xì)胞和B細(xì)胞定居的場所,而且是機體對血源性抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答的主要場所。在鳥類中,其重量大小被視為反映免疫力的重要指標(biāo)(SmithandHunt,2004)。然而,Kristan和Hammond(2003)發(fā)現(xiàn)家鼠(Musmusculus)腸道被線蟲類寄生物(Heligmosomoidespolygyrus)感染后,其脾臟顯著增大。因此,哺乳動物脾臟的增大,或者反映了機體免疫能力的增強,或者是由于機體受病毒、細(xì)菌和寄生物的感染所致(Lietal.,2007;張志強和王德華,2007;李鳳華等,2002)。脾臟指數(shù)增大是否能反映機體免疫力的改變需結(jié)合其他免疫參數(shù)加以說明(張志強和王德華,2006;Lietal.,2007)。在本研究中,高密度種群子代的抗KLH抗體含量顯著低于低密度種群子代?？贵w是機體免疫應(yīng)答過程中產(chǎn)生的重要效應(yīng)分子。多數(shù)抗菌性、抗病毒性抗體屬IgG類。根田鼠高密度種群子代抗體含量的降低,不僅反映了機體體液免疫能力的降低,而且表明機體抗感染免疫能力的降低。因而,對高密度根田鼠子代脾臟增大的合理解釋是個體對病菌抵抗力的下降而引起脾臟的過度免疫應(yīng)答所致。Kristan(2002)的研究表明,對斷乳大鼠感染寄生物可導(dǎo)致其成體脾臟肥大。該研究為上述解釋提供了證據(jù)。在本研究中,不同密度子代的白細(xì)胞、粒細(xì)胞及單核細(xì)胞數(shù)量均無顯著差異。然而,G?tz和Stefanski(2007)以及Llorente(2002)對大鼠的研究表明,母體社群應(yīng)激顯著降低子代的白細(xì)胞數(shù)量。與實驗動物不同,根田鼠子代來自野外圍欄實驗種群,且在室內(nèi)飼養(yǎng)時未對個體及飼養(yǎng)籠具滅菌處理。因此,野生動物自身特點及實驗方法都存在根田鼠子代感染病菌及寄生物的可能性;而粒細(xì)胞和單核細(xì)胞為非特異性免疫細(xì)胞,在抗感染中具有重要的防御作用。機體受病菌感染后均可導(dǎo)致粒細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量增加。因此,不同根田鼠子代白細(xì)胞、粒細(xì)胞及單核細(xì)胞數(shù)量均無顯著差異的原因,可能是由于高密度子代感染病菌及寄生物而掩蓋了不同子代間自然免疫的差異所致。該結(jié)果也為根田鼠子代脾臟增大與感染病菌及寄生物有關(guān)的解釋提供了佐證。本研究結(jié)果還表明,高密度子代淋巴細(xì)胞數(shù)量較低密度子代無顯著變化。Kay等(1998)對大鼠的研究表明,母體應(yīng)激子代的脾臟淋巴細(xì)胞對B淋巴細(xì)胞絲裂原美洲商陸絲裂原的增殖率較對照顯著降低,但母體應(yīng)激子代的CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞數(shù)量較對照子代無顯著差異。Kay等(1998)認(rèn)為,母體應(yīng)激子代免疫力的變化是此類細(xì)胞的效應(yīng)功能而不是細(xì)胞數(shù)量發(fā)生改變所致。據(jù)此可認(rèn)為,高密度子代淋巴細(xì)胞數(shù)量無顯著變化的結(jié)果不能說明其免疫力的正常。本研究中,母體社群應(yīng)激對雌性子代IgG含量及脾臟的影響較雄性大,說明根田鼠母體社群應(yīng)激對子代免疫力的影響存在性別間的差異。Kay等(1998)和Bakker(1998),對大鼠的研究也有類似的結(jié)果。綜上所述,根田鼠高密度子代抗KLH的IgG抗體含量的降低,表明機體體液免疫能力及抗感染能力的降低,而脾臟增大及白細(xì)胞、粒細(xì)胞和單核細(xì)胞無顯著變化的結(jié)果說明,高密度子代存在感染病菌和寄生物的可能性。由此,本研究不同免疫參數(shù)結(jié)果相互印證了如下結(jié)論:高密度種群子代的免疫力受到抑制。高密度種群子代免疫力的抑制則與母體社群應(yīng)激有關(guān)。在本研究中,高密度建群者的血漿皮質(zhì)酮水平顯著高于低密度建群者,說明高密度建群者處于慢性應(yīng)激狀態(tài)。其二,從圍欄帶回實驗室的不同處理子代的日齡大體一致,飼養(yǎng)環(huán)境及條件完全相同,且測定抗體時所有子代均已性成熟,說明本研究對不同處理子代的實驗條件基本相同。上述結(jié)果及分析表明,根田鼠高密度子代免疫參數(shù)的變異是高密度種群引起的母體社群應(yīng)激所致。由此,驗證了本文提出的在自然種群中,高密度種群可通過對母體社群應(yīng)激而降低子代的免疫力的假設(shè)。需說明的是,從圍欄帶回實驗室飼養(yǎng)的子代為斷乳子代,不能完全排出由于應(yīng)激引起的母體育幼行為的改變而對子代免疫力的影響(G?tzetal.,2007;Merlotetal.,2008)。雖然,在生理學(xué)中,母體應(yīng)激是特指母體妊娠階段的應(yīng)激對子代神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)的發(fā)育及功能以及學(xué)習(xí)、情緒、探究行為等的影響。然而,與生理學(xué)研究不同,生態(tài)學(xué)研究的目的更在于強調(diào)和探討母體應(yīng)激后對子代表型的作用及其生態(tài)學(xué)功能。就此而言,母體應(yīng)激引起的育幼行為的改變對子代表型的效應(yīng)仍屬母體應(yīng)激效應(yīng)范疇。目前,對母體應(yīng)激效應(yīng)(maternalstresseffect)的概念尚無生態(tài)學(xué)意義的定義。從生態(tài)學(xué)角度探討母體應(yīng)激效應(yīng)的研究僅見吳雁等(2006)、邊疆暉等(2004a,2004b,2004c)及Bian等(2005)的工作。為此,有必要闡明母體應(yīng)激效應(yīng)的生態(tài)學(xué)含義。從生態(tài)學(xué)角度而言,母體應(yīng)激效應(yīng)應(yīng)該包括生前應(yīng)激(prenatalstress)和產(chǎn)后應(yīng)激(postnatalstress)2部分。除了生前應(yīng)激可影響子代的適合度外,哺乳期的母體應(yīng)激可通過改變其育幼行為和乳汁質(zhì)量(Patinetal.,2002;Meeketal.,2001;Smithetal.,2004)影響子代表型(Rheesetal.,2001;Bredyetal.,2004;Smithetal.,2004)。因此,母體應(yīng)激效應(yīng)的生態(tài)學(xué)含義為:引起個體應(yīng)激反應(yīng)的環(huán)境惡劣因子通過直接作用于母體,并通過改變母體激素或育幼行為及乳汁質(zhì)量而影響子代表型或生活史