生理生化綜合試驗報告

《植物生理生化實驗》綜合性實驗總結(jié)(2010—2011)學(xué)年第一學(xué)期課程：《植物生理生化實驗》一生化實驗課程：《植物生理生化實驗》一生化實驗21學(xué)時成績:學(xué)院：林學(xué)院專業(yè):林學(xué)年級:2009級學(xué)號：090410154姓名：黃泉妹綜合性實驗報告NaCl溶液浸種對水稻種子萌發(fā)過程若干生化指標(biāo)的影響面向?qū)I(yè)09級農(nóng)學(xué)、植保、農(nóng)資、園藝、設(shè)施、茶學(xué)、本項目 叫沖"林學(xué)、水保、制藥、生安 學(xué)時 14學(xué)時(總學(xué)時45)實驗內(nèi)容簡介本綜合項目以水稻種子為材料，分別用蒸餾水、60mol/LNaCl溶液浸種一催芽一測定不同處理的發(fā)芽種子的游離氨基酸、可溶性蛋白質(zhì)、淀粉酶和同工酶項目。實驗要求：掌握分光光度計、離心機、電泳儀等儀器的使用方法以及電泳技術(shù)的基本操作、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作，并綜合分析NaCl浸種脅迫對水稻種子生理特性的影響機制。綜合性實驗總結(jié)報告:60mol/LNacl溶液浸種對水稻種子萌發(fā)過程若干生化指標(biāo)的影響摘要：研究并比較清水生長的水稻種子和60mol/LNacl溶液脅迫種子萌發(fā)的水稻種子中游離氨基酸和可溶性蛋白質(zhì)含量的差異及淀粉酶和同工酶含量及活力的不同。結(jié)果表明：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子中可溶性蛋白質(zhì)和游離氨基酸的含量比清水浸泡的水稻種子的含量要低；60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子中氧化物同工酶和淀粉酶的活性比清水浸泡的水稻種子的活性要低。研究結(jié)果說明：60mol/LNacl溶液的脅迫對種子的萌發(fā)和生長有抑制作用。關(guān)鍵詞：清水浸泡的水稻種子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子、游離氨基酸、可溶性蛋白、淀粉酶、同工酶弓I言：鹽脅迫是影響植物生長、降低作物產(chǎn)量的不利因素之一；據(jù)估計，我國鹽漬化土壤面積約2700萬平方千米，并且還有繼續(xù)增長的趨勢；種子萌發(fā)是植物整個生命中的關(guān)鍵，所以研究鹽脅迫的種子中游離氨基酸和蛋白質(zhì)的含量，以及對種子中淀粉酶和同工酶產(chǎn)生的影響，還有對種子萌發(fā)過程中若干生化指標(biāo)的影響因素的研究是至關(guān)重要的。一、材料與方法1.1材料：清水浸泡的水稻種子、60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子1.2方法1.2.1植物組織中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定用Folin一酚試劑法，在堿性下蛋白質(zhì)的肽鍵與銅結(jié)合生成紫紅色的蛋白質(zhì)一銅絡(luò)合物；絡(luò)合物及蛋白質(zhì)中酪氨酸和某丙氨酸等芳香族氨基酸殘基使磷鉬酸一磷鎢酸試劑還原，產(chǎn)生磷鉬藍和磷鎢藍的深藍色混合物，一定條件下，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正相關(guān)，利用650nm波長的特性吸收進行比色測定。1.2.2植物組織中游離氨基酸總量的測定游離氨基酸與茚三酮共熱時生成二酮茚一二酮茚胺，該產(chǎn)物成藍紫色，在一定范圍內(nèi)吸光度與氨基酸溶度成正比，即可用分光光度法測定其含量。1.2.3植物過氧化物酶同工酶測定利用過氧化物酶催化雙氧水（H2O2）分解并把聯(lián)苯的溶液染色，出現(xiàn)的藍色或棕褐色條帶即為過氧化物；苯胺氧化成藍色或棕褐色產(chǎn)物原理：將電泳后的凝膠置于含有雙氧水（H2O2）及聯(lián)苯胺的溶液中染色，出現(xiàn)的藍色或棕褐色即為過氧化物酶同工酶在凝膠中存在的位置，多條有色帶構(gòu)成過氧化物酶同工酶酶譜。1.2.4淀粉酶活性的測定 淀粉酶包括a一淀粉酶、p一淀粉酶，采用加熱鈍化8一淀粉酶，測出a一淀粉酶的活力，再與非鈍化條件下測定總活力（a+p）比較，即算出p一淀粉酶的活力。二、 實驗結(jié)果分析2.1植物組織中可溶性蛋白質(zhì)含量的測定由實驗數(shù)據(jù)可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子中可溶性蛋白質(zhì)含量低于用清水浸泡的水稻種子。造成誤差的可能原因：在研磨水稻種子時沒有加入石英砂或者太少使得研磨不夠充分；在加入甲液后未置于30°C下放置10min；取量標(biāo)準(zhǔn)溶液時出現(xiàn)體積誤差。2.2植物組織中游離氨基酸總量的測定由實驗數(shù)據(jù)可知：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子中游離氨基酸的含量比清水浸泡的水稻種子的低，且OD值大的樣品呈現(xiàn)的藍紫色就更深，試驗中出現(xiàn)的誤差可能是：研磨不夠充分、迅速；試劑的用量控制不夠精準(zhǔn)；過濾不充分；加熱時間不足。2.3植物過氧化物酶同工酶測定由實驗數(shù)據(jù)可知：用60mol/LNacl溶液浸種的水稻種子比清水浸泡的種子的色帶疏及顏色淺。實驗的關(guān)鍵：安裝玻璃夾心槽應(yīng)嚴(yán)密，加膠后應(yīng)及時覆蓋水層，防止氧化；電泳過程應(yīng)嚴(yán)格控制好電壓與電流的大小。2.4淀粉酶活性的測定由實驗數(shù)據(jù)可知：用60mol/LNacl溶液浸種的水稻泡子中淀粉酶活力低于用清水浸泡的水稻種子中淀粉酶的活力。誤差分析：在加入1%淀粉溶液時，各試管應(yīng)盡量同步進行；并準(zhǔn)確控制好水浴加熱的溫度和時間；9支試管在顯色反應(yīng)時應(yīng)同時放入100C水浴鍋中，并在準(zhǔn)確的時間間隔后一起取出。三、 討論通過以上的實驗的結(jié)果顯示，我們可以知道60mol/LNacl溶液對水稻種子萌發(fā)具有抑制作用。對于水稻種子萌發(fā)過程若干生化指標(biāo)產(chǎn)生影響，說明鹽脅迫的種子其細(xì)胞的細(xì)胞膜透性受到破壞，外界K+、Na+等離子進入細(xì)胞內(nèi)使氧化物同工酶活性和淀粉酶活性有所降低。結(jié)果表明：用60mol/LNacl溶液浸泡的水稻種子比于清水浸泡的水稻種子中的蛋白質(zhì)和游離氨基酸含量低，淀粉酶、氧化物酶同工酶的活力被抑制。參考文獻：文樹基.基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗指導(dǎo).西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1994皺琦.植物生理生化實驗指導(dǎo).北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1995西北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物生理生化教研室.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo).西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1987B.L.威廉斯，K?威爾遜編.王海云、馮北元譯.實用生物化學(xué)原理和技術(shù).北京：科學(xué)出版社，1979袁曉華，楊中漢.植物生理生化實驗.北京：高等教育出版社，1983上海植物生理學(xué)會.植物生理學(xué)實驗手冊.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1985李建武等.生物化學(xué)實驗原理和方法.北京：北京大學(xué)出版社，1997汪沛洪.基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗指導(dǎo).西安：陜西科學(xué)出版社，1986張志良，吳光耀.植物生物化學(xué)技術(shù)和方法.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1986朱利泉.基礎(chǔ)生物化學(xué)實驗原理與方法.成都：成都科技大學(xué)出版社，1997張志良，翟偉菁.植物生理學(xué)實驗指導(dǎo)(第三版).北京：高等教育出版社，2003[美]J.薩姆布魯克、E.F.弗里奇、T.曼尼阿蒂斯著.金冬雁，黎孟楓等譯.分子克隆 實驗指南(第二版).北京：科學(xué)出版社，1996黃留玉.PCR最新技術(shù)原理方法及應(yīng)用.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005劉恒烈，戰(zhàn)廣琴，曹流儉.油菜籽中硫代葡萄糖甙總量測定方法 內(nèi)源酶法.中國油料，1994,16(4)：46—49戚存扣，馬京.油菜籽低硫代葡萄糖甙材料簡便快速篩選