2基因工程的兩個基本特點是

2基因工程的兩個基本特點是填空題1基因工程是年頭發(fā)展起來的遺傳學(xué)的一個分支學(xué)科。2基因工程的兩個基本特點是：(1), (2)。.基因克隆中三個基本要點是：；和O.通過比較用不同組合的限制性內(nèi)切核酸酶處理某一特定基因區(qū)域所得到的不同大小的片段，可以構(gòu)建顯示該區(qū)域各限制性內(nèi)切核酸酶切點相互位置的o.限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個大寫字母取自，其次、三兩個字母取自，第四個字母則用表示。.部分酶切可實行的措施有：(2)(3)等。.第一個分別的限制性內(nèi)切核酸酶是;而第一個用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是O.限制性內(nèi)切核酸酶BsuRI和HaelH的來源不同，但識別的序列都是,它們屬于o.DNA聚合酶I的Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性：; (2)的活性。(2)蘇云金芽泡桿菌一個DNA分子上有很多基因，獲得抗蟲基因常采納的方法是鳥槍法。詳細做法是：用將蘇云金芽抱桿菌的切成很多片段，然后將這些片段,再通過轉(zhuǎn)入不同的受體細胞，讓它們在各個受體細胞中大量，從中找出含有目的基因的細胞，再用肯定的方法把分別出來。(3)進行基因操作一般要經(jīng)過的四個步驟是：、、、O.干擾素是治療癌癥的重要物質(zhì)，人血液中每升只能提取0.05mg干擾素，因而其價格昂貴，平民百姓用不起。但美國有一家公司用遺傳工程方法合成了價格低廉、藥性一樣的干擾素，其詳細做法是：(1)從人的淋巴細胞中提取能指導(dǎo)干擾素合成的,并使之與一種叫質(zhì)粒的DNA結(jié)合，然后移植到酵母菌內(nèi),從而讓酵母菌來O(2)酵母菌能用方式繁殖，速度很快，所以能在較短的時間內(nèi)大量生產(chǎn)o利用這種方法不僅產(chǎn)量高，并且成本較低。(3)科學(xué)家陳炬在這方面也做出突出貢獻，他勝利地把人的干擾素基因嫁接到了煙草的DNA分子上，其物質(zhì)基礎(chǔ)和結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是。(4)煙草具有了抗病毒實力，這表明煙草體內(nèi)產(chǎn)生了，由此可見，煙草和人體合成蛋白質(zhì)的方式是，從進化的角度來考慮，證明了人和植物的起源是。.基因工程技術(shù)對人類產(chǎn)生的影響既有主動的一面，同時也存在著很多須要接著探討和解決的問題，這些問題主要表現(xiàn)為、、、等四個方面。.干擾素是治療癌癥的重要物質(zhì)，它必需從人血中提取。每升人血只能提取，故價格昂貴，現(xiàn)在美國加利福尼亞的基因公司采納如下圖所示的方法生產(chǎn)干擾素，據(jù)此回答：(1)把干擾素基因從人體的DNA中干脆分別出來，此種方法稱為。從人的細胞中取出干擾素基因，此基因在基因工程中稱為(2)將此基因插入細菌質(zhì)拉切口處，用酶使它和經(jīng)過處理的細菌質(zhì)粒基因結(jié)合，然后移植到酵母菌體內(nèi)，使酵母菌具有o(3)酵母菌能以方式繁殖，此繁殖方法速度快,既提高了產(chǎn)量，又降低了成本。.利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物，經(jīng)驗了三個發(fā)展階段。第一階段，將人的基因轉(zhuǎn)入細菌細胞。其次階段，將人的基因轉(zhuǎn)入小鼠等動物的細胞。這兩個階段都是進行細胞培育，提取藥物。第三階段，將人的基因轉(zhuǎn)入活的動物體，飼養(yǎng)這些動物，從乳汁或尿液中提取藥物。(1)將人的基因轉(zhuǎn)入異種生物的細胞或個體內(nèi)，能夠產(chǎn)生藥物蛋白的原理是基因能限制。(2)人的基因能和異種生物的基因拼接在一起，是因為它們的分子都具有雙螺旋結(jié)構(gòu)，都是由四種構(gòu)成，基因中堿基配對的規(guī)律都是o(3)利用轉(zhuǎn)基因牛、羊乳汁提取藥物工藝簡潔，甚至可干脆飲用治病。假如將藥物蛋白基因移到動物如牛、羊的膀胱上皮細胞中，利用轉(zhuǎn)基因牛、羊尿液生產(chǎn)提取藥物比乳汁提取藥物的更大優(yōu)越性在于：處于不同發(fā)育時期的動物都可生產(chǎn)藥物。.據(jù)調(diào)查，隨著化學(xué)農(nóng)藥的產(chǎn)量和品種逐年增加，害蟲的抗藥性也不斷增加，造成的危害很嚴峻。如近年來，棉鈴蟲害在我國大面積爆發(fā)，每年造成經(jīng)濟損失達100萬元以上，針對這種狀況，我國科學(xué)工作者探討發(fā)覺一種生活在棉鈴蟲消化道內(nèi)的蘇云金芽抱桿菌能分泌一種毒蛋白使棉鈴蟲致死，而此毒蛋白對人畜無害。通過科技攻關(guān)，我國科技工作者已勝利地將該毒蛋白基因?qū)朊藁ㄖ仓牦w內(nèi)，并實現(xiàn)了表達。由于棉鈴蟲吃了新品種轉(zhuǎn)基因抗蟲棉植株后就會死亡，所以,該棉花新品種在近年推廣后，已收到了很好的經(jīng)濟效益。請據(jù)以上所給材料，回答下列問題：(1)害蟲抗藥性的增加是的結(jié)果。(2)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉新品種的培育應(yīng)用了新技術(shù)。(3)限制毒蛋白合成的基因結(jié)構(gòu)中的編碼區(qū)的特點是(4)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗害蟲的遺傳信息傳遞過程可以表示為(5)該科技成果在環(huán)保上的重要作用是。. 世界上勝利構(gòu)建的第一個體外重組DNA分子是在( )年完成的。.質(zhì)粒載體能夠克隆( )大小的DNA片段，噬菌體能夠克隆( )大小的DNA片段。TOC\o"1-5"\h\z.外源基因在動物的血液中表達，從而可以在動物血液里干脆提取外源基因的產(chǎn)物，這種基因產(chǎn)品的生產(chǎn)方式叫( )o.用瓊脂糖凝膠電泳時，DNA片段越大，離點樣孔越( ),而DNA片段越小，離點樣孔越( )o.用化學(xué)降解法進行DNA測序時，必需具有( )個反應(yīng)系統(tǒng)，用酶促合成法法進行DNA測序時，必需具有)個反應(yīng)系統(tǒng)。.電轉(zhuǎn)化的原理是在受體細胞上施加短暫的高壓電流脈沖后，結(jié)果在細胞膜上形成很多（ ），從而使（ ）簡潔進入到受體細胞內(nèi)。.噬菌體依據(jù)接受外源DNA的方式不同，可以分為（ ）和（ ）兩種類型載體。TOC\o"1-5"\h\z.互為同裂酶的兩種限制性核酸內(nèi)切酶來源（ ）,產(chǎn)生的粘性末端（ ）o.酵母雙雜交系統(tǒng)通常含有兩個載體，一個載體含有酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4的（ ），另一個載體必需含有GAL4的（ ）o.目前抗蟲轉(zhuǎn)基因植物經(jīng)常用到的外源基因主要是（ ）,從而達到殺死害蟲的目的。.在轉(zhuǎn)基因植物中，常用的顯色或發(fā)光標記的報告基因有（ ）,（ ）,（ ）等83.感受態(tài)細胞是指84.PCR反應(yīng)體系含有,，，O85.PCR反應(yīng)的基本過程為,,86.引物與模板的退火溫度一般為,延長溫度一般為87.PCR循環(huán)次數(shù)一般設(shè)定為,過多的循環(huán)次數(shù)會導(dǎo)致 的出現(xiàn)。, , 可用于LCR產(chǎn)物的檢測。引物3端最佳堿基選擇是和PCR的標本處理的基本要求是91.PCR的反應(yīng)體系一般選用o92.PCR反應(yīng)的緩沖液提供了PCR反應(yīng)與常用的為93.PCR的反應(yīng)體系中，Mg2+的濃度一般保持在,常用的是94.TaqDNA聚合酶具有,缺乏因止匕無。95.在變性過程中，為防止反應(yīng)液的蒸發(fā)，可在反應(yīng)管中加入96.PCR反應(yīng)時應(yīng)設(shè)立以下試驗比照：,,.97.定量PCR必需設(shè)立98.啟動子(Promotor)是指()。通常一個Gene是否表達，()是關(guān)鍵的一步，是起確定作用的。在轉(zhuǎn)錄過程中，Promoter還是()的結(jié)合位點。.外源蛋白在大腸桿菌中的表達部位、、。.克隆基因表達載體的主要構(gòu)成元件、、。.高等哺乳動物受體細胞的條件是、、、、。.基因工程誕生于( )年。.基因工程中外源DNA與載體DNA分子所形成的雜合TOC\o"1-5"\h\z分子叫（ ）o.外源基因在人體表達，使人體能克服某一缺陷或疾病，這種基因工程技術(shù)叫（ ）o.將抗性基因轉(zhuǎn)入農(nóng)作物中，使之具有某種抗病實力，得到的農(nóng)作物叫（ ）o.用載體制作轉(zhuǎn)基因植物時，最常用的載體是（ ）質(zhì)粒。.粘粒載體能夠克隆（ ）大小的DNA片段，人工酵母染色體YAC能夠克?。?）大小的DNA片段。.DNA自動測序標記的是（ ），常規(guī)SangerTOC\o"1-5"\h\z雙脫氧鏈終止法標記的是（ ）o.顯微注射技術(shù)一般是在顯微鏡下將目的DNA分子注射進入動物受精卵的（ ）中，從而產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動物。.基因工程構(gòu)建基因重組體是指將（ ）與（ ）的進行連接重組。.用瓊脂糖凝膠電泳時，DNA片段越大，離點樣孔越（ ）,而DNA片段越小，離點樣孔越（ ）o.Northern雜交的用途主要是用來檢測（ ）在特定組織的（ ）狀況。.粘粒載體是由（ ）和（ ）兩部分組成的。.質(zhì)粒載體能夠克隆（ ）大小的DNA片段，噬菌體能夠克隆（ ）大小的DNA片段。.重組DNA導(dǎo)入宿主的一般方法有（），（）,（）,（）和（）等。答案1.702. （1）分子水平上的操作；（2）細胞水平上的表達3.克隆基因的類型；受體的選擇；載體的選擇4.限制性酶切圖譜5.屬名的第一個字母；種名的前兩個字母；株名6. （1）削減酶量；（2）縮短反應(yīng)時間；（3）增大反應(yīng)體積7.EcoK；EcoRi8.GGCC；異源同工酶9. 枯草桿菌蛋白酶；⑴5'-3'合成酶的活性；（2）3'-5'外切核酸酶10.堿性磷酸酶；5端的磷酸基團H.Ca2+12.5'-3'合成；3'-5'外切13.DNA聚合酶I：5'—3'外切核酸酶；5'—3'合成酶14.S1核酸酶切割；DNA聚合酶補平15.核酸水解酶H；RNA16.質(zhì)粒DNA；病毒DNA；質(zhì)粒和病毒DNA雜合體17.復(fù)制區(qū)：含有復(fù)制起點；選擇標記：主要是抗性基因；克隆位點：便于外源DNA的插入18.質(zhì)粒消退（或治愈）19.pMBl；pSClOl；pSF2124（R質(zhì)粒）20.lOOOkb；300kb21.嚴緊22.pBR322和M13；pMBl；轉(zhuǎn)座子23.它在細菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴增；對某些噬菌體（如噬菌）的遺傳結(jié)構(gòu)和功能探討得比較清晰，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也探討得比較詳盡24.沒有合適的限制性內(nèi)切核酸酶識別位點；選擇標記25.質(zhì)粒；噬菌體；4526.（1）分子量大，（2）酶的多切點，⑶無選擇標記27.復(fù)制區(qū)；IG區(qū)28.75%?105%29.螯合Mg2+離子，抑制核酸酶的活性30.中和DNA分子的負電荷，增加DNA分子間的凝合力31.（1）合成探針；（2）合成cDNA；（3）用于PCR反應(yīng)；（4）進行序列分析32.T載體33.其次鏈合成時形成的發(fā)夾環(huán)34.乙醇使DNA分子脫水35.（1）保持正確的可讀框（2）能夠使其轉(zhuǎn)錄的啟動子（3）具有翻譯的起始和終止信號36.接受外源DNA的生理狀態(tài)37.（1）黏性末端連接；（2）平末端連接；（3）同聚物接尾連接；（4）接頭連接法38.基因組DNA克?。换蚪MDNA文庫39.cDNA克??；cDNA文庫40.聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR）41.0C；42C42.（1）遺傳學(xué)方法；（2）物理篩選法； （3）核酸雜交法； （4）表達產(chǎn)物分析法43.插入外源片段的種類較多，大小又極為相像的重組體的篩選44.基因組DNA；cDNA45.Klenow酶填補的方法；T4DNA聚合酶46.（1）用M13噬菌體載體合成單鏈DNA探針；（2）從mRNA反轉(zhuǎn)錄合成單鏈cDNA探針；（3）用不對稱PCR合成單鏈DNA探針47.外源基因是否進行了轉(zhuǎn)錄48.兩種不同的細胞群體能夠表達不同的基因，即在一個群體中能夠表達一些基因，而在另一個細胞群體中不能表達這些基因49.Northern印跡50.Southern印跡51. 5 3合成酶；3 5外切核酸酶52.（1）克隆的是完整的基因；（2）運用的是表達載體；（3）不含內(nèi)含子53.（1）印跡的對象不同:Northern是RNA,Southern是DNA；（2）電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件54.（1）抗體能夠被吸附到固體支持物上；（2）同一個抗原可以同幾種抗體結(jié)合；（3）抗體能夠被標記55.互補單鏈重新配對復(fù)原成雙鏈；同源單鏈重新配對復(fù)原成雙鏈。56.23；4557.單個細胞中所含有的質(zhì)粒DNA分子數(shù)目；嚴謹型；松弛型；嚴謹型；松弛型58.基因轉(zhuǎn)錄過程中限制起始的部位；轉(zhuǎn)錄起始；RNA聚合酶59.SCDNALDNAOCDNA60.簡潔的插入或缺失；單個堿基的置換；系統(tǒng)的缺失、插入或成串堿基的置換61.在堿性條件下，DNA變性，在高鹽條件下，只有超螺旋構(gòu)象的質(zhì)粒DNA復(fù)性。62.簡潔的插入或缺失；單個堿基的置換；系統(tǒng)的缺失、插入或成串堿基的置換63.獲得目的基因片斷；功能克?。槐硇涂寺?；定位克隆64.變性；復(fù)性；延長65. （1）乙烯（2）限制性內(nèi)切酶DNA連接酶運載體（3）目的性強育種周期短克服遠緣雜交的障礙66.（1）限制性內(nèi)切酶微生物一種限制酶只能識別一種特定的核甘酸序列，并在特定的位點切割（2）限制性內(nèi)切酶DNA分別與運載體結(jié)合運載體復(fù)制帶有目的基因的DNA片斷（3）提取目的基因目的基因與載體結(jié)合將目的基因?qū)胧荏w細胞目的基因的檢測與表達67. （1）干擾素基因合成干擾素（2）出芽生殖干擾素（3）都是脫氧核.為了防止DNA的自身環(huán)化，可用去雙鏈DNAo.EGTA是離子螯合劑。.測序酶是修飾了的T7DNA聚合酶，它只有酶的活性，而沒有酶的活性。.切口移位(nicktranslation)法標記DNA的基本原理在于利用的和的作用。.欲將某一具有突出單鏈末端的雙鏈DNA分子轉(zhuǎn)變成平末端的雙鏈形式，通?？刹杉{或。.反轉(zhuǎn)錄酶除了催化DNA的合成外，還具有的作用，可以將DNA-RNA雜種雙鏈中的水解掉。.基因工程中有3種主要類型的載體：.就克隆一個基因(DNA片段)來說,最簡單的質(zhì)粒載體也必需包括三個部分：、、O另外，一個志向的質(zhì)粒載體必需具有低分子量。.一個帶有質(zhì)粒的細菌在有EB的培育液中培育一段時間后，一部分細胞中已測不出質(zhì)粒，這種現(xiàn)象叫。.pBR322是一種改造型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來源于,它的四環(huán)素抗性基因來自于它的氨茉青霉素抗性基因來自于甘酸組成的，都具有雙螺旋結(jié)構(gòu) （4）干擾素相同的相同的68.平安性問題生態(tài)環(huán)境影響問題公眾接受性問題社會倫理道德問題69. （1）鳥槍法（或散彈射擊法） 目的基因（2）DNA連接干擾素基因（3）出芽70. （1）蛋白質(zhì)的合成 （2）脫氧核甘酸A與T.C與G（3）雌、雄71. （1）自然選擇（2）基因工程（或DNA重組技術(shù)） （3）連續(xù)的（5）削減農(nóng)藥對環(huán)境的污染，愛護生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性72.1972年73.10kb,20kb74.血液生物反應(yīng)器或生物反應(yīng)器75.近，遠76.4個，4個77.微孔，外源基因/DNA78.插入型/置換型，插入型/置換型79.不同，相同/相近/不同80.激活結(jié)構(gòu)域/結(jié)合結(jié)構(gòu)域，激活結(jié)構(gòu)域/結(jié)合結(jié)構(gòu)域81.毒素蛋白/Bt/毒晶蛋白82.GUS,熒光素酶，GFP83.具有攝取外源DNA分子實力的細胞。.耐熱的TaqDNA聚合酶，化學(xué)合成的寡核甘酸引物，四種dNTP,合適的緩沖液體系。.變性，退火，延長86.45-55℃, 72℃87.25-30次，PCR反應(yīng)平臺效應(yīng)。88.核素標記法，熒光素標記法，地高辛標記法89.G,Co90.除去雜質(zhì)，并部分純化標本中的核酸91.50-100ulo合適的酸堿度，某些離子，，10-50mmol/L的Tris-HCl（室溫pH8.3-8.8,72℃時為pH7.2）。0.2-2.5mmol/L,1.5mmol/L94.53聚合酶活性,35外切酶活性，校正功能。95.1-2滴液體石蠟96.陽性比照，陰性比照，試劑比照97.內(nèi)參照98.基因轉(zhuǎn)錄過程中限制起始的部位；轉(zhuǎn)錄起始；RNA聚合酶99.細胞質(zhì)，周質(zhì)，細胞外100.外源基因的插入位點，選擇標記基因，調(diào)控元件101.細胞系特征，遺傳穩(wěn)定性，合適的標記，生長快且整齊，平安性能好102. 1973年103.重組載體/重組DNA分子104.基因治療105.抗蟲轉(zhuǎn)基因作物106.Ti質(zhì)粒107.30-40kb, 1-2Mb108.ddNTP,引物109.雄原核110.外源基因/載體，載體/外源基因111.近，遠112.目的基因，表達113.質(zhì)粒/噬菌體，噬菌體/質(zhì)粒114.10kb,20kb115.轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)導(dǎo)；轉(zhuǎn)染；感染；接合YAC的最大容載實力是，BAC載體的最大容載實力是opSClOl是一種復(fù)制的質(zhì)粒。pUC18質(zhì)粒是目前運用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過和 兩種質(zhì)粒改造而來。它的復(fù)制子來自，Amp抗性基因則是來自。噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的緣由：一是;二是o野生型的M13不適合用作基因工程載體，主要緣由是和O黏粒(cosmid)是質(zhì)粒噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來自、COS位點序列來自,最大的克隆片段達到kb。野生型的 噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，緣由是：⑵。27.噬菌粒是由質(zhì)粒和噬菌體DNA共同構(gòu)成的，其中來自質(zhì)粒的主要結(jié)構(gòu)是，而來自噬菌體的主要結(jié)構(gòu)是O. 噬菌體載體由于受到包裝的限制，插入外源DNA片段后，總的長度應(yīng)在噬菌體基因組的的范圍內(nèi)。.在分別DNA時要運用金屬離子螯合劑，如EDTA和檸檬酸鈉等，其目的是。.用乙醇沉淀DNA時\通常要在DNA溶液中加人單價的陽離子，如NaCl和NaAc,其目的是。.引物在基因工程中至少有4個方面的用途：(2) (3)(4) o32.Clark發(fā)覺用TaqDNA聚合酶得到的PCR反應(yīng)產(chǎn)物不是平末端，而是有一個突出堿基末端的雙鏈DNA分子。依據(jù)這一發(fā)覺設(shè)計了克隆PCR產(chǎn)物的o34.乙醇沉淀DN33.在cDNA的合成中要用到S1核酸酶，其作用是切除在A的原理是.假定克隆一個編碼某種蛋白質(zhì)的基因，必需考慮其表達的三個基本條件：(1)(2) (3).受體細胞的感受態(tài)是.DNA重組連接的方法大致分為四種：(2) (3)4)o.將含有外源基因組一個酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個.將含有一個mRNA的DNA拷貝的克隆稱作一個，源于同一批RNA制備物的克隆群則構(gòu)建了一個O.只要知道基因組中某一特定區(qū)域的部分核甘酸組成，用可以將這段DNA進行百萬倍的擴增。.人工感受態(tài)的大腸桿菌細胞在溫度為時吸附DNA,時攝入DNAo.目前，在重組體的篩選中，已經(jīng)發(fā)展了很多構(gòu)思奇妙、具有極高精確性的篩選方法。大致可以分為：(1) (2) (3)等。.PCR擴增篩選重組體是比較簡便的篩選方法，它適合于. 核酸雜交探針可分為兩大類:DNA探針和RNA探針。其中DNA探針又分為探針和 探針。.假如用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5突出的黏性末端，則可以用進行3末端標記。假如用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3突出的黏性末端，可以用進行3末端標記。.單鏈DNA探針的標記可以采納下列方法： (2)(3)47.依據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說明：.差示雜交(differentialhybridization)技術(shù)須要O.RNA分子經(jīng)凝膠電泳后按大小不同分開，然后被轉(zhuǎn)移到一張硝酸纖維素膜(尼龍膜)上，同一放射DNA探針雜交的技術(shù)稱.在技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分別后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的DNA探針雜交。.可用T4DNA聚合酶進行平末端的DNA標記，因為這種酶具有和的活性。.根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因：(1)(2)(3).Northern印跡和Southern印跡有兩點根本的區(qū)別：(1).放射免疫篩選的原理基于以下三點：(1)(2)⑶55、利用基因工程生產(chǎn)蛋白質(zhì)藥物，經(jīng)驗了三個發(fā)展階段。第一階段，將人的基因轉(zhuǎn)入細菌細胞。其次階段，將人的基因轉(zhuǎn)入小鼠等動物的細胞。這兩個階段都是進行細胞培育，提取藥物。第三階段，將人的基因轉(zhuǎn)入活的動物體，飼養(yǎng)這些動物，從乳汁或尿液中提取藥物。(1)將人的基因轉(zhuǎn)入異種生物的細胞或個體內(nèi)，能夠產(chǎn)生藥物蛋白的原理是基因能限制蛋白質(zhì)的合成 。(