血液檢測常見影響因素及處理方法

血液檢測常見影響因素及處理方法

在免疫室進行肝酶、肝酶、抗毒酶和抗毒酶的特定檢測。最常用的檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗。該試驗用已知抗原檢測未知抗體,或用已知抗體檢測未知抗原,雖然操作簡便,但影響因素諸多,一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題,都可能會導(dǎo)致檢測的失敗?，F(xiàn)將酶聯(lián)免疫吸附試驗常見影響因素及處理方法總結(jié)如下。1試劑的因素1.1試劑的選擇和使用對“證”證”的影響試劑的選擇是保證血液檢測質(zhì)量的關(guān)鍵因素,要選購知名度高,質(zhì)量有保證,具有“三證”的試劑,最好選用配套試劑。也可以和同行交流,其他實驗室對某種試劑盒的實際使用效果,往往具有很強的說服力,因此應(yīng)使用檢測口碑好的試劑(可通過室間質(zhì)評組織獲得)。不使用過期試劑,不同批號試劑不能混用,同批號試劑盒的組分也不可混用。1.2試劑盒的質(zhì)量保障1.2.1試劑的儲存至關(guān)重要,試劑一到科室,即應(yīng)立即放入冷藏冰箱,必須注意不得靠近冰箱后壁,以防試劑凍結(jié),影響檢測結(jié)果。1.2.2試劑供應(yīng)商必須保障試劑在進入科室前運輸儲存的質(zhì)量,試劑盒從出廠到用戶手中,均要歷經(jīng)運輸(如送檢、檢定、發(fā)貨等)及運輸中的儲存環(huán)節(jié),某一環(huán)節(jié)不當,均影響試劑盒的臨床使用質(zhì)量。去年我科有一段時間所做的表面抗原項目,今天陽性,同一份標本明天復(fù)檢有可能是弱陽性甚至陰性,查找原因可能是這批試劑在進入科室前儲存溫度出現(xiàn)了問題,與試劑商聯(lián)系更換新的批號試劑后,此現(xiàn)象消失。1.3假陰性的檢測在臨床實驗室,試劑的準備一般不太注意,工作人員通常在試驗時將試劑從冰箱中拿出來就用,其直接后果是對一些弱陽性標本的檢測出現(xiàn)假陰性。因此酶聯(lián)免疫吸附試驗中,試劑準備最關(guān)鍵的是使試劑盒在使用前與室溫平衡,以滿足檢測要求,一般檢測前30min即應(yīng)將試劑盒從冰箱中取出,檢測時試劑盒可與室溫平衡。2樣品要素標本因素包括標本溶血、被污染、標本保存時間過長和標本凝固不全等。2.1血清蛋白的檢測血紅蛋白中含鐵血紅素有類過氧化物酶活性,因此以辣根過氧化物酶為標記的酶聯(lián)免疫吸附試驗測定中,如血清中血紅蛋白濃度較高,很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的辣根過氧化物酶反應(yīng)顯色,造成假陽性。因此在采血過程中應(yīng)注意,采集血液標本時應(yīng)緩慢抽動,注射器插入生化管應(yīng)讓血液自動靠負壓注入生化管,不能用手推注射器栓塞,以防標本溶血。處理方法:若輕微溶血影響還不大,若為中度或重度溶血,則必須與臨床聯(lián)系,重新抽取標本,并講清楚正確采集血標本的重要性。并由有關(guān)部門定期培訓(xùn)臨床護士怎樣正確采集血液標本。2.2新鮮標本的保存菌體可能含有內(nèi)源性過氧化物酶,可出現(xiàn)非特異性顯色,因此宜用新鮮標本,如有特殊情況,應(yīng)冰箱保存或冰凍保存,并應(yīng)加蓋保存。陽性結(jié)果應(yīng)重抽血雙孔復(fù)檢。2.3新鮮標本的選擇標本在冰箱中保存時間過長,可能造成污染或效價降低,可引起假陰性,因此應(yīng)盡量用新鮮標本。冰凍標本應(yīng)避免反復(fù)凍融,因冰凍標本的反復(fù)凍融產(chǎn)生的機械力對標本中的蛋白分子有破壞作用,可引起假陰性。2.4樣品的離心標本凝固不全的血清中有部分纖維蛋白原,影響結(jié)果。有的工作人員著急趕時間,剛采集的標本就離心(雖然現(xiàn)在都采用促凝生化管),結(jié)果剛離心完血清還可以,但是在洗滌時,此孔血清呈果凍狀,顯然反應(yīng)不完全。處理方法:標本采集后在37℃水浴30min后再離心,以3500轉(zhuǎn)/min離心5min可獲得滿意標本。3操作因素3.1注意不可分批操作孵育前加樣時間過長,漏加樣本,酶試劑加入孔外,用滴瓶滴加試劑時加量不準等都可使試驗結(jié)果不可靠。處理方法:(1)標本過多時,可分批操作,標本要輕拿輕放,防止標本濺出交叉感染;(2)加完樣品封板前要仔細觀察反應(yīng)板,看是否有樣品漏加,以便及時發(fā)現(xiàn);(3)加酶試劑后可用吸水紙吸干孔外試劑;(4)使用滴瓶加試劑時,應(yīng)垂直滴加,勻速滴加,以免速度過快有的孔中多加1滴試劑,建議采用微量加樣器加試驗中的所有組分;(5)加樣器應(yīng)定期校準,消毒,吸頭要一次性使用,以免交叉污染。3.2孔內(nèi)溫度增加的影響及處理溫育是最為關(guān)鍵、最容易出現(xiàn)問題的步驟;溫育的時間、溫度選擇一般按照試劑盒說明進行,加完樣本和試劑后微孔板放入水浴箱或溫箱中,孔內(nèi)溫度從室溫升至攝氏37℃需一定時間,若一放入就計時,就容易造成孵育時間不夠,易致弱陽性標本檢測不出。處理方法:(1)可采用適當延長幾分鐘時間(大約2min);(2)可把反應(yīng)板封板后直接放入37℃水浴箱水中;(3)用37℃孵育箱將是不錯的選擇。3.3ph值的調(diào)節(jié)3.3.1洗滌液的配制,按照說明書要求1∶20稀釋,看似很簡單,但必須注意一些細節(jié)問題:(1)注意洗滌液是否有結(jié)晶析出,冬天洗滌液易結(jié)晶,如不注意很容易堵塞洗板機管路。處理方法:事先將洗滌液置37℃水溫箱中預(yù)溫一會再行配制就可解決。(2)要注意去離子水的pH值。處理方法:用0.1nNaOH調(diào)節(jié)pH值至7左右。3.3.2洗板有兩種,即手工洗板和洗板機洗板。采取手工洗板,孔與孔之間液體易交叉;采取洗板機洗板時,洗液量不足導(dǎo)致洗板不徹底,針孔堵塞導(dǎo)致抽吸不完全,清洗效果差。處理方法:(1)手工洗板時,孔內(nèi)洗液不能溢出,拍板時要垂直,但用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫落;(2)用洗板機洗板,洗滌液要新鮮配制,洗板機要經(jīng)常檢查沖洗頭是否暢通,洗滌液瓶應(yīng)定期徹底清洗,要定期檢查整個管路,疏通管路,若針頭被堵塞,可用注射器排除;(3)我科采用機洗5遍人工加洗1遍,效果較好;(4)洗板時,吸水紙不可重復(fù)使用;(5)洗完板時,應(yīng)充分扣干反應(yīng)孔,可用吸水紙包住反應(yīng)板扣干。3.4顯色3.5注意試驗的連續(xù)性加入終止液后用酶標儀檢測,酶標儀需預(yù)熱15min~30min,因反應(yīng)板加入A、B顯色劑后在37℃放置30min,反應(yīng)板底部會有水霧,檢測時可出現(xiàn)假陽性,上機前一定要在吸水紙上吸干。在以上的操作過程中,要保持試驗的連續(xù)性,有的工作人員在洗完板時,因故未能及時加A、B顯色液,會對測定結(jié)果造成影響,因此要注意試驗的連續(xù)性,這