環(huán)鏈棒束孢菌株xs-1對小菜蛾的防治效果

環(huán)鏈棒束孢菌株xs-1對小菜蛾的防治效果

扮演著蝗蟲屬于節(jié)肢動物科。這是一種危害十字花科蔬菜的害蟲，在中國南部和北部廣泛分布。由于小菜蛾具有世代重疊明顯、抗逆性強(qiáng)、繁殖力高、幼蟲反應(yīng)敏捷等特點,目前對小菜蛾的防治仍以化學(xué)防治為主,但生產(chǎn)用藥頻繁已導(dǎo)致該蟲對多種殺蟲劑產(chǎn)生了不同程度的抗性,給防治帶來了很大的困難,同時也造成了環(huán)境污染,甚至危及人體健康。近年來,世界農(nóng)藥正在向高效、高安全性、良好的環(huán)境相容性等綠色農(nóng)藥方向發(fā)展。微生物農(nóng)藥的研究和開發(fā),尤其是在利用菌物來防治有害生物的研究中,蟲生真菌的開發(fā)利用具有良好的應(yīng)用前景[4~6]。環(huán)鏈棒束孢(Isariacateniannulata)是一種重要的昆蟲病原真菌,具有較大的開發(fā)潛力。目前相關(guān)的研究主要集中在以探索其固體培養(yǎng)條件、產(chǎn)孢條件、在某些生態(tài)系下的遺傳多樣性等[7~12]為主的生物學(xué)特性方面以及生物防治方面[13~21]。環(huán)鏈棒束孢對小菜蛾防治的研究已有文獻(xiàn)報道,其中大多是用孢子感染的方法進(jìn)行防治,利用環(huán)鏈棒束孢代謝產(chǎn)物進(jìn)行防治的研究較少,僅見姚麗娟的報道,其采用涂抹法測試環(huán)鏈棒束孢菌株發(fā)酵液對小菜蛾的防效,結(jié)果表明,菌株代謝產(chǎn)物含有殺蟲活性物質(zhì),對小菜蛾有觸殺作用。在借鑒前人研究的基礎(chǔ)上,筆者等于2013年8月采用噴霧法和飼喂法考查了一株環(huán)鏈棒束孢菌株不同培養(yǎng)基的發(fā)酵液以及菌絲提取液對小菜蛾幼蟲的致死作用,以期為環(huán)鏈棒束孢在生物防治方面的應(yīng)用提供基礎(chǔ)參考資料。1材料和方法1.1試驗材料1.1.1蘑菇1.1.2害蟲的來源1.1.3滅菌水制備PDA液體培養(yǎng)基(馬鈴薯200g,切塊,水煮30min,過濾,濾液加20g蔗糖,補水至1000mL,121℃滅菌30min);沙氏液體培養(yǎng)基(蛋白胨10g,葡萄糖40g,水1000mL,121℃滅菌30min);CMA液體培養(yǎng)基(玉米粉20g,加水1000mL,攪勻,煮1h,過濾,濾液補水至1000mL,121℃滅菌30min)。1.2發(fā)酵溶液和真菌物質(zhì)的制備1.2.1搖瓶培養(yǎng)養(yǎng)基將供試菌種活化后,分別接種到裝有3種液體培養(yǎng)基的搖瓶中,置搖床上,于26℃、180r/min條件下培養(yǎng)14d。培養(yǎng)結(jié)束后,按不同培養(yǎng)基分別過濾培養(yǎng)液,取濾液備用。1.2.2提取乙醇和無水乙醇收集濾出的菌絲用濾紙吸干水分,平均分為2組,研磨后分別加100mL無水乙醇和100mL無菌水提取2h,然后過濾。水提液直接備用,醇提液則用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮蒸干,將濃縮物加100mL無菌水溶解后備用。1.3害蟲試驗和設(shè)計1.3.1小菜器培養(yǎng)方法試驗設(shè)置PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液和空白對照(CK)4個處理(表1),每個處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(每瓶15頭)投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口。取新鮮甘藍(lán)葉片,用噴霧器分別將PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液和沙氏發(fā)酵液噴灑于葉片兩面,然后將葉片置通氣處吹干,再次噴灑,如此重復(fù)處理5次后,將處理的葉片分別投入對應(yīng)的處理瓶中飼喂小菜蛾幼蟲;對照處理直接飼喂未經(jīng)處理的甘藍(lán)葉片。各處理在室溫自然光下培養(yǎng),每隔24h觀察記錄1次試蟲死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.3.2試蟲的處理試驗設(shè)置分PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液、無菌水和空白對照(CK)5個處理(表1),每個處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(每瓶15頭),用噴霧器分別將PDA發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液、沙氏發(fā)酵液和無菌水噴灑于試蟲體表,待試蟲體表水分干后再重復(fù)處理1次。將處理好的試蟲分別投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口,取新鮮甘藍(lán)葉片飼喂,對照處理的試蟲不經(jīng)噴灑處理,直接飼喂。各處理在室溫自然光下培養(yǎng),每隔24h觀察記錄1次試蟲死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.3.3試蟲的處理試驗設(shè)置醇提液、水提液、無菌水和空白對照(CK)4個處理(表1),每個處理3次重復(fù)(3瓶)。選取生長相似的3~4齡小菜蛾幼蟲(每瓶10頭),用噴霧器分別將菌絲醇提液、菌絲水提液和無菌水噴灑于試蟲體表,待試蟲體表水分干后再重復(fù)處理1次。將處理好的試蟲分別投入廣口玻璃瓶中,以紗布封口,取新鮮甘藍(lán)葉片飼喂,對照組試蟲不經(jīng)噴灑處理。各處理在室溫自然光下培養(yǎng)。每隔24h觀察記錄1次試蟲死亡情況,直至其全部死亡或化蛹。1.4數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和處理采用Spss17軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。2結(jié)果與分析2.1發(fā)酵液噴霧法pda復(fù)綠假設(shè)試驗研究,主要有2.(1)發(fā)酵液飼喂法。從圖1可見,試驗第6天各處理的小菜蛾幼蟲全部死亡或化蛹,其間,各處理的試蟲未表現(xiàn)出明顯的拒食現(xiàn)象。各處理的防治效果以PDA發(fā)酵液的最好,其最終死亡率為60%,校正死亡率為18.14%。方差分析結(jié)果表明,各處理與對照之間以及各處理之間無顯著差異(P>0.05)。(2)發(fā)酵液噴霧法。從圖1可見,試驗第6天各處理試蟲全部死亡或化蛹。各處理的防治效果以PDA發(fā)酵液的最好,其最終死亡率為80%,校正死亡率為57.14%。方差分析結(jié)果表明,無菌水處理與對照之間的試蟲死亡數(shù)無顯著差異(P>0.05);PDA發(fā)酵液處理與對照之間在處理第2天的試蟲死亡數(shù)無顯著差異,除此之外二者間的試蟲死亡數(shù)差異均達(dá)顯著水平(P<0.05);PDA發(fā)酵液處理與無菌水處理之間在第1、3、4天的試蟲死亡數(shù)差異顯著(P<0.05);PDA發(fā)酵液處理與沙氏發(fā)酵液、CMA發(fā)酵液處理之間的試蟲死亡數(shù)無顯著差異(P>0.05),但沙氏發(fā)酵液和CMA發(fā)酵液這兩種處理之間以及這兩種處理與無菌水處理和對照之間并無顯著差異(P>0.05)。綜合以上分析,可認(rèn)為環(huán)鏈棒束孢菌株P(guān)DA發(fā)酵液對小菜蛾試蟲致死效果較為明顯。2.2醇提液及水提液對樣品中死亡率的影響從圖2可見,菌絲提取物噴霧處理第5天各處理的小菜蛾幼蟲全部死亡或化蛹。各處理的防治效果以菌絲醇提液的最好,其最終死亡率為70%,校正死亡率為47.37%。方差分析結(jié)果表明,醇提液處理與水提液處理和無菌水處理之間的防治效果差異達(dá)顯著水平(P<0.05),而水提液處理和無菌水處理與對照之間無顯著差異(P>0.05);醇提液處理與對照之間無顯著差異,但其P=0.053,結(jié)合圖2的曲線看,可以認(rèn)為醇提液處理對小菜蛾幼蟲有一定的防治作用。3環(huán)鏈棒束孢菌株對小菜k(1)環(huán)鏈棒束孢菌株P(guān)DA發(fā)酵液與菌絲無水乙醇提取物對小菜蛾幼蟲有一定的防治效果,尤以PDA發(fā)酵液噴霧法的作用效果較明顯。PDA發(fā)酵液處理第2天其試蟲死亡數(shù)平均為7.3頭,第3天達(dá)9.3頭,考慮到試蟲化蛹的影響,根據(jù)試驗中試蟲死亡趨勢判斷,該處理試蟲第2天死亡數(shù)應(yīng)可達(dá)半致死量(7.5頭)。何勁等采用孢子感染的方法研究了四株蟲生真菌對小菜蛾的毒力,其中毒力最強(qiáng)的環(huán)鏈棒束孢菌株在其實驗的最高孢子濃度下(1.6×108個/mL)的半致死時間最短,為3.33d,且半致死時間隨孢子濃度下降而增加,在其實驗的最低孢子濃度下(1.6×105個/mL),半致死時間需7.84d。故相較于孢子感染法,發(fā)酵液的半致死時間相對要短。另外,采用菌株發(fā)酵液進(jìn)行防治與孢子感染法相比,其制備與操作相對簡單,起效時間相對較短,且使用受環(huán)境的影響相對較小。(2)試驗為接近實際環(huán)境條件,選擇在室溫自然光條件下進(jìn)行試驗,但由于試驗過程