血清白蛋白的分離純化及鑒定(一)-鹽析、G-25脫鹽、G-75層析_第1頁(yè)
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血清白蛋白分離與純化實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解血清蛋白質(zhì)分離的一般方法2.掌握鹽析法、凝膠層析分離純化白蛋白的方法實(shí)驗(yàn)原理血清中主要蛋白：白蛋白與球蛋白正常人血清中總蛋白、白蛋白、球蛋白的量保持相對(duì)恒定；總蛋白60-80克/升，白蛋白為40-50克/升，球蛋白為20-30克/升。鹽析法中性鹽類能破壞溶液中蛋白分子表面的雙電子層和水膜，從而使蛋白質(zhì)從溶液中凝聚沉淀析出。利用白蛋白和球蛋白在高濃度中性鹽溶液中(常用硫酸銨)溶解度的差異而進(jìn)行沉淀分離，此為鹽析法。血清白蛋白在飽和硫酸銨溶液中沉淀析出，血清球蛋白在半飽和硫酸銨溶液中沉淀析出。凝膠層析1、凝膠層析也稱凝膠過(guò)濾，是一類利用有一定孔徑范圍的多孔凝膠的層析技術(shù)，是一種分子篩效應(yīng)。2、當(dāng)樣品流經(jīng)這類凝膠的固定相時(shí)，不同分子大小的各組分因進(jìn)入網(wǎng)孔受阻滯的程度不同而以不同的速度通過(guò)層析柱，從而達(dá)到分離的目的。3、當(dāng)樣品通過(guò)層析柱時(shí)，分子量較大的物質(zhì)因?yàn)椴荒芑蜉^難通過(guò)網(wǎng)孔而進(jìn)入凝膠顆粒間隙，沿著凝膠顆粒間的間隙流動(dòng)，所以流程較短，向前移動(dòng)的速度較快，即受阻滯的程度較小，最先流出層析柱；反之，分質(zhì)量較小的物質(zhì)（硫酸銨），因?yàn)轭w粒直徑較小，可通過(guò)網(wǎng)孔而進(jìn)入凝膠顆粒，所以流程較長(zhǎng)，向前移動(dòng)的速度較慢，即受阻滯的程度較大，流出較晚。凝膠層析凝膠類型分離范圍（Mr）應(yīng)用G-251000-5000去鹽G-753000-70000中等蛋白質(zhì)分離不同類型的葡聚糖凝膠的分離范圍和應(yīng)用實(shí)驗(yàn)步驟-硫酸銨鹽析取正常人血清2.0ml于小試管中，邊搖邊緩慢滴加飽和硫酸銨溶液2.0ml，混勻后于室溫中放置10min，3000r／min

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