豬瘟檢測(cè)方法比較與豬瘟疫苗免疫效果評(píng)價(jià)

豬瘟檢測(cè)方法比較與豬瘟疫苗免疫效果評(píng)價(jià)

隨著診斷技術(shù)的快速發(fā)展，豬疫情的抗體檢測(cè)方法也有所增加。血清中和試驗(yàn)、免疫瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳、熒光抗體技術(shù)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等方法都已用于豬瘟的抗體檢測(cè),這些方法特異性強(qiáng)、敏感性高,但操作煩瑣、費(fèi)時(shí),而且有些方法的技術(shù)和設(shè)備條件要求較高,在基層難以推廣使用。尤其對(duì)于規(guī)模化豬場(chǎng)大批樣品的快速檢測(cè),更需要快速和操作簡便的診斷檢測(cè)方法。酶免疫技術(shù)中的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)被認(rèn)為是目前檢測(cè)豬瘟抗體較好的一種方法,該法簡便、快速、敏感、特異,并且試劑盒已商品化。因此我們選用了葡萄球菌A蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(PPA-FLISA)和斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Dot-ELISA)技術(shù)在規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行了抗體檢測(cè)的比較試驗(yàn)和實(shí)際應(yīng)用?，F(xiàn)將試驗(yàn)情況報(bào)告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1效價(jià)結(jié)果判定購自南京農(nóng)業(yè)大學(xué)。檢測(cè)方法按試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定:各稀釋度OD值>0.17為陽性,OD值<0.17為陰性,豬瘟PPA-ELISA效價(jià)≥1∶80的血清判為陽性。1.1.2加標(biāo)劑盒說明書購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。檢測(cè)方法按試劑盒說明書進(jìn)行。結(jié)果判定:纖維膜在各稀釋度出現(xiàn)紅棕色斑點(diǎn)或圓圈為陽性,無色或不清楚的圓圈為陰性,豬瘟Dot-ELISA效價(jià)≥1∶80的血清判為陽性。1.1.3血清檢測(cè)為某規(guī)模化豬場(chǎng)不同日齡、不同免疫水平的豬血清。檢測(cè)時(shí)血清作1∶40~1∶320稀釋。1.2方法1.2.1血清抗體檢測(cè)用豬瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA兩種方法同時(shí)檢測(cè)3周齡血清(未免疫)和6周齡血清(超前免疫)各10份,比較相同個(gè)體用兩種方法檢測(cè)的抗體效價(jià)的符合率。1.2.2兩種方法檢測(cè)的抗體陽性率比較用豬瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA兩種方法同時(shí)檢測(cè)2、4、6、8、12周齡豬血清155份,比較不同群體用兩種方法檢測(cè)的抗體陽性率的符合率。1.2.3免疫抗體水平應(yīng)用Dot-ELISA對(duì)某規(guī)?；i場(chǎng)557份不同日齡的豬瘟疫苗免疫豬的血清進(jìn)行免疫抗體水平監(jiān)測(cè)。各項(xiàng)試驗(yàn)均同時(shí)設(shè)豬瘟陰性標(biāo)準(zhǔn)血清和豬瘟陽性標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照。2結(jié)果2.1日齡豬血清效價(jià)情況結(jié)果表明(表1),兩種方法對(duì)相同個(gè)體的檢測(cè),其抗體效價(jià)的符合率較高(達(dá)90%),而且相同日齡豬血清的平均效價(jià)差別也不大。檢測(cè)結(jié)果還表明,仔豬在3周齡時(shí),母源抗體已達(dá)不到1∶80的保護(hù)水平,應(yīng)進(jìn)行豬瘟疫苗免疫。2.2抗體檢測(cè)結(jié)果結(jié)果表明(表2),兩種方法對(duì)不同群體的檢測(cè),其抗體陽性率無顯著差異,對(duì)不同日齡的155份血清進(jìn)行檢測(cè),其陽性率PPA-ELISA法為89.68%Dot-ELISA法為90.32%。2.3豬抗豬抗豬抗豬抗豬作用監(jiān)測(cè)結(jié)果(表3)表明,監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的豬瘟免疫效果很好,其免疫抗體的陽性率平均達(dá)94.79%。3養(yǎng)豬景觀抗體檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)用豬瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA技術(shù)對(duì)相同個(gè)體抗體效價(jià)的檢測(cè)以及對(duì)不同群體抗體陽性率的檢測(cè)結(jié)果表明,兩種方法的靈敏度和特異性基本一致,在檢測(cè)結(jié)果上有較高的符合率。在實(shí)際應(yīng)用中也具有操作簡便、快速、重復(fù)性好等特點(diǎn),可用于規(guī)模化豬場(chǎng)大批樣品的抗體檢測(cè)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,豬瘟Dot-ELISA法檢測(cè)的抗體效價(jià)≥1∶80的豬只可以耐受強(qiáng)毒的攻擊,PPA-FLISA法檢測(cè)血清的OD值(待檢血清1∶80稀釋)>0.17者判為陽性,0.3為100%保護(hù)線,>0.3者攻毒100%保護(hù)。因此,我們?cè)谟肈ot-ELISA和PPA-ELISA檢測(cè)豬瘟抗體水平時(shí),參照上述標(biāo)準(zhǔn)來判定監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的群體免疫水平的保護(hù)力而沒有進(jìn)行強(qiáng)毒攻擊。按監(jiān)測(cè)結(jié)果制定的豬瘟免疫程序使被監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的豬瘟得到了有效控制,臨床上無一例豬瘟發(fā)生。自豬豬瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA技術(shù)建立以來,在診斷和監(jiān)測(cè)豬瘟方面,這些技術(shù)便得到了廣泛的應(yīng)用。研究者們應(yīng)用Dot-ELISA監(jiān)測(cè)哺乳仔豬豬瘟母源抗體和免疫抗體水平,應(yīng)用PPA-ELISA檢測(cè)技術(shù)控制豬瘟的持續(xù)感染,在非典型豬瘟和隱性豬瘟的診斷和防制中,用Dot-ELISA技術(shù)檢測(cè)抗原以診斷豬瘟及在豬瘟乳前免疫的抗體檢測(cè)中,用Dot-ELISA技術(shù)檢測(cè)抗體以評(píng)價(jià)乳前免疫效果。我們?cè)趹?yīng)用豬瘟PPA-ELISA和Dot-ELISA技術(shù)監(jiān)測(cè)不同日齡,不同免疫水平的豬瘟抗體方面也取得滿意結(jié)果。通過實(shí)際應(yīng)用,我們認(rèn)為,由于D