柴胡黃芩對(duì)急性酒精性肝損傷的防治作用

柴胡黃芩對(duì)急性酒精性肝損傷的防治作用

中醫(yī)認(rèn)為酒是濕熱有毒之品。喝完后，損傷脾胃肝膽，疾病就會(huì)發(fā)生。柴胡黃芩藥是《傷寒論》柴胡系列方中最有代表意義的基本配伍,可疏肝清肝,和解少陽(yáng),針對(duì)急性酒精中毒病因病機(jī),有著廣泛的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)。我們前期的研究表明,柴胡黃芩配伍對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷有良好的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠急性酒精性肝損傷模型,進(jìn)一步探討柴胡黃芩配伍對(duì)其的保護(hù)作用。1材料和方法1.1動(dòng)物健康Wistar大鼠96只,雄性,體重(170±20)g,由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2edc.麻黃柴胡,傘形科多年生草本植物北柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根,產(chǎn)于河南省嵩縣。黃芩,唇形科多年生草本植物黃芩ScutellariabaicalensisGeorgi的干燥根,產(chǎn)于山東莒縣。小柴胡顆粒,天津市愛(ài)康藥業(yè)公司生產(chǎn),批號(hào):011202。1.3上?；瘜W(xué)試劑56度二鍋頭白酒(批號(hào):020128),北京京宮城酒業(yè)技術(shù)發(fā)展公司生產(chǎn)。甘氨酸(批號(hào):20011120),上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站。氫氧化鈉(批號(hào):20000710),鄭州化學(xué)試劑二廠(進(jìn)口分裝)。輔酶Ⅰ(NAD+,批號(hào):6110),美國(guó)Biomol公司(原裝)。722光柵分光光度計(jì),上海第三分析儀器廠。1.4造模、分組和給藥大鼠隨機(jī)分8組,除正常組(以等體積的蒸餾水灌胃)外,其余各組均按7ml白酒/kg/次灌胃給予56度二鍋頭白酒,2次/d,連續(xù)10d造模結(jié)束。自造模第1天起,每日灌胃給藥2次。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服等體積的蒸餾水,其余各組分別灌胃給予相應(yīng)的藥物,劑量皆為10ml/kg(12g/kg)連續(xù)10d。末次給酒后24h,腹主動(dòng)脈取血制備血清。迅速摘取肝臟右葉以10%的甲醛溶液固定,采用HE染色方法,觀察病理形態(tài)學(xué);剪下肝左外葉制成10%的勻漿。1.5試劑及其用量的確定參照文獻(xiàn)方法自行測(cè)定,具體操作為:配制0.1mol/L甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液(pH=9.0),77mmol/LNAD+溶液,將以上兩液按6∶1混合配成試劑Ⅰ,配制825mmol/L乙醇溶液作為試劑Ⅱ。樣品100μl,試劑Ⅰ1500μl。預(yù)孵5min后,加試劑Ⅱ50μl(空白對(duì)照管加等量蒸餾水),22℃水浴反應(yīng)1h,分光光度計(jì)340nm波長(zhǎng)處,以空白對(duì)照管調(diào)零,讀取吸光度值。ADH活力單位定義:每分鐘催化1μmol還原型輔酶Ⅰ(NADH)的酶量為1個(gè)單位。1.6t分析法病理學(xué)半定量等級(jí)資料采用Ridit分析法;計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)(xˉ±s)表示,組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)及單因方差分析。2結(jié)果2.1農(nóng)村基層患者一般資料情況模型對(duì)照組大鼠實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)造模后反應(yīng)不一,或先出現(xiàn)興奮狀態(tài),在籠內(nèi)奔跑,打斗,爾后見(jiàn)四肢癱軟、行走不穩(wěn)、臥倒酣睡等中樞神經(jīng)抑制狀態(tài);或直接進(jìn)入中樞抑制狀態(tài)。造模3d左右,灌酒后興奮不已不明顯。隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),出現(xiàn)酣睡的時(shí)間逐漸縮短,酣睡持續(xù)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)。大便稀軟不成形,毛發(fā)干枯無(wú)光澤,飲食量減少,體重明顯降低,精神萎靡不振。各給藥組一般情況好于模型對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中模型對(duì)照組大鼠死亡3只,柴胡組、柴胡黃芩1∶1組大鼠各死亡2只,其余各組死亡1只。2.2p>0.0學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)表1結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組比較,模型對(duì)照組肝勻漿和滲漏入血清中的ADH含量顯著增高(均為P<0.01)。與模型對(duì)照組比較,柴胡組、3個(gè)柴胡黃芩配伍組、小柴胡組均能明顯降低血清中ADH含量;對(duì)肝臟中ADH含量的增高有明顯改善作用的是小柴胡組、柴胡黃芩2∶1組和1∶2組,并顯示柴胡黃芩配伍后以1∶2組對(duì)肝臟及血清ADH的改善作用最優(yōu)。2.3對(duì)肝組織脂肪變性與炎癥變性的影響表2～3結(jié)果顯示:各造模組大鼠肝組織脂肪變性與炎癥變性與正常對(duì)照組均有顯著性差異,表明酒精對(duì)肝臟造成顯著的脂肪及炎癥變性的病理改變;柴胡黃芩1∶1組、1∶2組對(duì)肝組織脂肪變性與炎癥變性均有顯著的發(fā)送作用,小柴胡組對(duì)炎癥變性改善作用明顯。平均級(jí)數(shù)=各級(jí)分值×本級(jí)動(dòng)物數(shù)總和本組動(dòng)物總數(shù)3抗酒精性肝損傷的機(jī)制ADH是特異性很廣泛的酶,主要作用是催化乙醇生成具有高度毒性的乙醛,后者在肝細(xì)胞線粒體中由乙醛脫氫酶(ALDH)轉(zhuǎn)化為乙酸。研究證實(shí),大鼠酒精性肝損傷(ALD)時(shí)胞漿質(zhì)ADH活性增強(qiáng),導(dǎo)致乙醇氧化加強(qiáng),肝內(nèi)耗氧增加,伴隨著大量NAD+被還原形成NADH,使NADH/NAD+比值相應(yīng)增高而失衡,改變了細(xì)胞氧化還原狀態(tài),嚴(yán)重干擾了細(xì)胞的新陳代謝,使三羧酸循環(huán)受到抑制,導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷。隨著ALD的發(fā)生發(fā)展,肝ADH活性進(jìn)行性增加,其增加程度和ALD的病理演變呈正相關(guān),所以ADH酶活性水平在酒精性肝損傷病理學(xué)具有重要意義。同時(shí)由于乙醛生成增加,乙醛較乙醇對(duì)肝毒性更強(qiáng),伴隨著線粒體ALDH活性降低,未被氧化的乙醛進(jìn)入血中,通過(guò)黃嘌呤氧化酶轉(zhuǎn)變?yōu)槌趸?導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化,促進(jìn)肝損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),大鼠急性酒精性肝損傷時(shí)血清和肝組織中ADH活性均明顯增強(qiáng);柴胡黃芩配伍組、小柴胡組、柴胡組均能明顯降低血清ADH水平,提示能減輕肝細(xì)胞損傷,使肝中ADH滲漏入血減少;柴胡黃芩2∶1組、1∶2組、小柴胡組能抑制肝臟中ADH活性的增高,以柴胡黃芩配伍組中1∶2組的作用最佳,與小柴胡組的作用相仿,表明影響乙醇代謝的關(guān)鍵酶ADH、調(diào)節(jié)乙醇的代謝使之恢復(fù)正常、抑制乙醛的過(guò)度產(chǎn)生是柴胡黃芩配伍抗酒精性肝損傷的另一重要機(jī)制。同時(shí),肝臟的病理學(xué)的結(jié)果也證實(shí)在本實(shí)驗(yàn)中選擇的