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文檔簡介

一實驗項目蛋白質(zhì)的鹽析與透析凝膠過濾法分離Hb與核黃素（一）蛋白質(zhì)的鹽析與透析鹽析實驗原理:

在溶液中加入中性鹽使生物大分子沉淀析出的過程稱為“鹽析”。蛋白質(zhì)溶液為親水溶膠體系，其穩(wěn)定因素：水化膜和電荷。加入大量中性鹽后，奪走了水分子，破壞了水膜，暴露出疏水區(qū)域，同時又中和了電荷，破壞了親水溶膠，蛋白質(zhì)分子即形成沉淀。蛋白質(zhì)的鹽析與透析-原理蛋白質(zhì)的鹽析與透析-原理不同的蛋白質(zhì)分子，由于其分子表面的極性基團的種類、數(shù)目以及排布的不同，其水化層厚度不同，故鹽析所需要的鹽濃度也不一樣，因此調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的中鹽濃度，可以使不同的蛋白質(zhì)分別沉淀。蛋白質(zhì)的鹽析與透析-實驗操作鹽析

血清1ml

逐漸加入飽和(NH4)2SO4

溶液１ml，邊加邊攪拌。

離心

３０００rpm10分鐘

上清沉淀（球蛋白）

逐漸加入固體(NH4)2SO4

１％HCl1-2滴離心５分鐘沉淀（清蛋白）透析實驗原理:

蛋白質(zhì)是大分子物質(zhì)，它不能透過透析膜，而小分子物質(zhì)（無機鹽、單糖等）可以自由通過透析膜與周圍的緩沖溶液進行溶質(zhì)交換，進入到透析液中。在實驗室分離純化蛋白質(zhì)的過程中，常利用透析的方法除去蛋白質(zhì)溶液中的小分子物質(zhì)。按照分子大小進行分離。分離取決于透析袋截留分子量。蛋白質(zhì)的鹽析與透析-實驗操作透析１．制備透析袋２．裝樣：取透析袋，將一端固定，由開口端加入含有硫酸銨的蛋白沉淀。３．透析：取10倍以上蛋白質(zhì)體積的去離子水，將裝好樣品的透析袋懸于大燒杯中部。更換洗脫溶液數(shù)次（約30min一次），至達到透析平衡為止。４．檢查：（按教材步驟操作）檢查洗出液中是否有NH4＋；２支試管蛋白檢測：３支試管又叫分子篩層析，其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子物質(zhì)能進入其內(nèi)部，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開。

物質(zhì)進入凝膠柱之后有兩種運動方式,垂直向下移動和無定向的擴散運動。大分子物質(zhì)直徑大,無法進入凝膠顆粒內(nèi)，只能分

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