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文檔簡介
蛋白質(zhì)相互作用研究技術(shù)
崔博宇生物化學(xué)與分子生物學(xué)蛋白質(zhì)之間相互作用以及通過相互作用而形成的蛋白復(fù)合物是細(xì)胞各種基本功能的主要完成者。幾乎所有的重要生命活動，包括DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的合成與分泌、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和代謝等等，都離不開蛋白質(zhì)之間的相互作用。蛋白質(zhì)之間相互作用研究的重要性酵母雙雜交谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶沉淀試驗(yàn)(GST-pulldown）免疫共沉淀雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)(BIFC)生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（ＢＲＥＴ）技術(shù)常用蛋白質(zhì)相互作用的研究技術(shù)一、細(xì)菌雙雜交系統(tǒng)
Two-hybridsystem是90年代初發(fā)展起來的新方法，可用于分離能與已知靶蛋白質(zhì)（targetprotein）相互作用的基因。基本原理：
真核生物的轉(zhuǎn)錄因子大多是由兩個結(jié)構(gòu)上分開、功能上獨(dú)立的結(jié)構(gòu)域組成的,如GAL4（酵母轉(zhuǎn)錄激活蛋白Gal4的基因）。這兩個結(jié)構(gòu)域各具功能，互不影響。但一個完整的激活特定基因表達(dá)的激活因子必須同時含有這兩個結(jié)構(gòu)域，否則無法完成激活功能。
酵母激活因子GAL4：N端：147個氨基酸組成的DNA結(jié)合域(BD)，C端：113個氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄激活域(AD)。GAL4分子的DNA結(jié)合域可以和上游激活序列(upstreamactivatingsequence，UAS)結(jié)合，而轉(zhuǎn)錄激活域則能激活UAS下游的基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。組成部分：（1）與BD融合的蛋白表達(dá)載體，被表達(dá)的蛋白稱誘餌蛋白（bait）；（2）與AD融合的蛋白表達(dá)載體，被其表達(dá)的蛋白稱靶蛋白（prey）；（3）帶由一個或多個報告基因的宿主菌株。
酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)過程BDACOOHADBNH2
COOH共轉(zhuǎn)化+BDAADGal4Gal4PromoterReporterNH2Gal4Gal4B酵母雙雜交基本過程舉例酵母三雜交系統(tǒng)a.第1、2個融合蛋白必須通過與成分3的結(jié)合，間接起到激活報告基因轉(zhuǎn)錄的作用，不能直接激活報告基因的轉(zhuǎn)錄；b.成分3具有分別與第1、2個融合蛋白結(jié)合的區(qū)域二、谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶沉淀試驗(yàn)
(GST-pulldown）原理GSTXY谷胱甘肽
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