微生物學(xué)檢驗分枝桿菌屬及檢驗

分枝桿菌屬主要特點

是一類直或微彎曲、有分枝生長趨勢的桿菌。細胞壁脂質(zhì)含量高，主要為分枝菌酸。

具有抗酸性，革蘭染色不易著色，常用抗酸染色。

專性需氧營養(yǎng)要求特殊，大多數(shù)生長緩慢。

不產(chǎn)內(nèi)、外毒素和侵襲性酶等致病物質(zhì)，所致疾病呈慢性。分枝桿菌屬種類結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌田鼠分枝桿菌非典型分枝桿菌麻風分枝桿菌光產(chǎn)色分枝桿菌暗產(chǎn)色分枝桿菌不產(chǎn)色分枝桿菌迅速生長分枝桿菌分枝桿菌屬結(jié)核分枝桿菌－－形態(tài)染色

細長略彎，分枝生長趨勢

無芽孢，無鞭毛，部分菌株有莢膜

革蘭染色陽性，不易著色抗酸染色陽性結(jié)核分枝桿菌－－培養(yǎng)特性生長條件：專性需氧、細胞內(nèi)寄生菌、最適～、營養(yǎng)要求高、培養(yǎng)基含雞蛋、馬鈴薯粉、甘油、孔雀綠等生長現(xiàn)象：※生長緩慢※改良羅氏培養(yǎng)基菌落特征：干燥、淡黃色、質(zhì)地較硬的R型菌落※液體培養(yǎng)基：形成菌膜，有毒株呈索狀生長結(jié)核分枝桿菌－－生化反應(yīng)生化反應(yīng)不活潑，不發(fā)酵糖類與非結(jié)核分枝桿菌鑒別：耐熱觸酶試驗－；（非結(jié)核分枝桿菌＋）與牛分枝桿菌鑒別煙酸試驗＋；（牛分枝桿菌－）結(jié)核分枝桿菌－－抵抗力與變異性抵抗力特點：“三耐四敏”※耐干燥、耐酸堿、耐孔雀綠（1：13000）※對濕熱、70％乙醇、紫外線、常用抗結(jié)核藥物（但長期使用易產(chǎn)生耐藥性）變異性※典型形態(tài)－→多形性※R型菌落－→S型菌落※有毒－→無毒（用于制備疫苗）※抗結(jié)核藥敏感－→耐藥結(jié)核分枝桿菌－－致病物質(zhì)脂質(zhì)索狀因子:與該菌毒力有密切關(guān)系磷脂:分枝菌酸：與抗酸性有關(guān)蠟質(zhì)D:具有佐劑作用硫酸腦苷脂蛋白質(zhì)糖類結(jié)核桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素，不產(chǎn)生侵襲性酶結(jié)核分枝桿菌－－所致疾病與免疫性

經(jīng)多途徑感染，引起結(jié)核病，以肺結(jié)核多見類型：原發(fā)感染和繼發(fā)感染免疫性※抗結(jié)核免疫以細胞免疫為主※抗結(jié)核免疫屬帶菌免疫※抗結(jié)核免疫與Ⅳ型超敏反應(yīng)同時出現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌－－結(jié)核菌素試驗

原理：用結(jié)核菌素進行皮膚試驗，以檢測受試者對結(jié)核桿菌是否有細胞免疫及遲發(fā)型超敏反應(yīng)的試驗。結(jié)果：根據(jù)注射部位是否出現(xiàn)紅腫判斷結(jié)果＜5mm為陰性≥＞5mm為陽性＞15mm為強陽性

應(yīng)用：選擇卡介苗接種對象；判斷卡介苗接種效果；輔助診斷嬰幼兒結(jié)核??；測定腫瘤患者細胞免疫狀態(tài)結(jié)核分枝桿菌－－檢驗程序標本核酸檢測接種固體培養(yǎng)基可疑菌落涂片抗酸染色鏡檢抗體檢測慢性生長菌快速生長菌菌種鑒定標本前處理接種液體培養(yǎng)基接種小白鼠豚鼠臟器涂片鏡檢抗酸染色鑒定試驗結(jié)核分枝桿菌－－涂片檢查直接涂片薄涂片

厚涂片集菌涂片

沉淀集菌法漂浮集菌法熒光顯微鏡檢查法：金剛胺O染色→熒光顯微鏡下檢查抗酸染色－－報告方式報告方式鏡檢結(jié)果-仔細檢查300個視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌±300個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~2條抗酸菌＋100個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌2＋10個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌3＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1~9條抗酸菌4＋每個視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)9條以上抗酸菌結(jié)核分枝桿菌－－分離培養(yǎng)標本前處理：※目的：殺死雜菌；液化標本※方法：4％NaOH法；4％H2SO2法；胰酶-新潔爾滅法等

培養(yǎng)基選擇：羅氏培養(yǎng)基、米氏培養(yǎng)基、小川培養(yǎng)基等接種培養(yǎng)培養(yǎng)結(jié)果記錄與報告方法報告方式培養(yǎng)結(jié)果＋斜面20個菌落以上，占斜面1/4以下2＋斜面上菌落生長面積占1/4以上，1/2以下3＋斜面上菌落面積占斜面1/2以上，3/4以下4＋斜面上菌落生長密集，成菌苔非典型分枝桿菌

是指結(jié)核分枝桿菌與麻風分枝桿菌以外的分枝桿菌。大多為環(huán)境中的腐生菌對酸堿比較敏感對常用抗結(jié)核藥耐受

為條件致病菌，艾滋病患者易感染鳥復(fù)合分枝桿菌麻風分枝桿菌－－生物學(xué)性狀為抗酸桿菌細胞內(nèi)寄生

有麻風桿菌寄生的細胞呈泡沫狀，稱為麻風細胞體外人工培養(yǎng)尚未成功犰狳是動物感染模型麻風分枝桿菌－－臨床意義與微檢經(jīng)呼吸道、接觸感染引起麻風病瘤型麻風（開放型）：傳染性強結(jié)核樣型（閉鎖性）：傳染性弱

微檢：標本涂片抗酸染色是診斷麻風的主要依據(jù)麻風桿菌犰狳抗酸染色染液組成：石炭酸復(fù)紅、3％鹽酸酒精、美蘭染色步驟※石炭酸加溫染5分鐘，水洗※3％鹽酸酒精脫色致無紅色脫下為止，水洗※美藍染1分鐘，水洗，干后鏡檢染色結(jié)果※抗酸菌：紅色※非抗酸菌：藍色染色意義：區(qū)別抗酸菌與非抗酸菌結(jié)核分枝桿菌菌落結(jié)核分枝桿菌（抗酸染色）麻風病人厭氧菌概念:是一大群必須在無氧環(huán)境條件下才能生長繁殖的細菌

特點:種類多分布廣感染可發(fā)生于人體各個部位厭氧菌特點特點芽胞厭氧菌無芽孢厭氧菌種類1個菌屬40多屬分布自然界人和動物體內(nèi)致病外源性感染多以外毒素致病內(nèi)源性感染多為條件致病菌厭氧菌感染的臨床及細菌學(xué)特征感染發(fā)生于黏膜附近深部外傷感染局部有氣體產(chǎn)生分泌物有惡臭或暗血紅色某些抗生素治療無效的感染標本直接涂片細菌染色不均鏡檢見細菌,需氧培養(yǎng)無細菌培養(yǎng)厭氧菌感染的原因局部形成厭氧微環(huán)境局部或全身免疫功能下降菌群失調(diào)寄居部位發(fā)生改變厭氧菌－－標本采集與送檢采集部位恰當正確采集避免污染嚴格厭氧及時送檢運送針筒運送法無氧小瓶運送法標本充盈運送法組織塊運送法厭氧袋運送法棉拭運送法厭氧菌－－常用培養(yǎng)基非選擇性培養(yǎng)基心腦浸液＋％5脫纖維羊血＋氯化血紅素＋維生素

K選擇培養(yǎng)基七葉苷膽汁平板－－培養(yǎng)脆弱類桿菌卡那萬古凍溶血瓊脂平板－－培養(yǎng)

FS培養(yǎng)基－－培養(yǎng)梭桿菌屬VS培養(yǎng)基－－培養(yǎng)韋容球菌

CCFA培養(yǎng)基－－培養(yǎng)艱難梭菌厭氧菌－－厭氧培養(yǎng)法厭氧罐培養(yǎng)法厭氧器袋法厭氧手套箱法皰肉培養(yǎng)法標本增菌分離培養(yǎng)肉眼觀察染色鏡檢血標本需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)挑取菌落厭氧培養(yǎng)生長不生長生長專性厭氧菌專性厭氧菌形態(tài)染色菌落特征生化反應(yīng)藥敏鑒定氣相色譜厭氧菌－－標本觀察和涂片鏡檢

肉眼觀察：觀察標本的性狀（膿性、帶血、氣味、硫磺樣顆粒、壞死組織等）

涂片染色鏡檢：估計細菌數(shù)量、觀察細菌形態(tài)、染色性，以便選擇培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法厭氧菌－－分離培養(yǎng)

初代培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)48h

次代培養(yǎng)：挑5個以上不同菌落做耐氧試驗，每個菌落接種2個平板，分別進行需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)，挑取有氧培養(yǎng)中不生長、厭氧培養(yǎng)生長的菌落進行鑒定厭氧菌－－鑒定菌體形態(tài)：菌落性狀：形狀、色素、熒光、溶血藥敏鑒定試驗：卡那霉素：梭桿菌屬多敏感，類桿菌屬多耐藥聚茴香腦磺酸鈉：快速鑒定厭氧消化鏈球菌生化反應(yīng)氣相色譜技術(shù)破傷風芽孢梭菌－－主要性狀

革蘭陽性細長桿菌，有周鞭毛，芽孢位于菌體頂端，圓形大于菌體，呈“火柴棒狀”專性厭氧

在血平板上呈擴散生長，菌落邊緣不整齊，呈羽毛狀

在皰肉培養(yǎng)基中，肉渣變黑，有腐敗惡臭味破傷風芽孢梭菌－－臨床意義致病物質(zhì)：破傷風痙攣毒素，屬神經(jīng)毒素，阻止中樞抑制性神經(jīng)介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致骨骼肌強制性痙攣所致疾?。浩苽L感染途徑：傷口致病條件：傷口內(nèi)形成厭氧微環(huán)境破傷風芽孢梭菌－－檢查方法顯微鏡檢查：菌體形態(tài)、芽孢特征分離培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)，菌落特征

動物實驗：毒力試驗：毒素注射小鼠→小鼠出現(xiàn)癥狀保護試驗：毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠無癥狀產(chǎn)氣莢膜梭菌－－形態(tài)與培養(yǎng)

革蘭陽性粗大桿菌，有莢膜，芽孢位于菌體中央或次級端，小于菌體，無鞭毛專性厭氧

血平板菌落特征：圓形、凸起、光滑、濕潤，雙層溶血環(huán)卵黃瓊脂平板：Nagler反應(yīng)牛乳培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象生化反應(yīng)：生化反應(yīng)活潑，分解多種糖產(chǎn)氣莢膜梭菌－－臨床意義致病物質(zhì)：莢膜、多種毒素和侵襲性酶

所致疾?。簹庑詨木?/p>

食物中毒

壞死性腸炎產(chǎn)氣莢膜梭菌－－檢查方法

標本涂片染色鏡檢：觀察形態(tài)、染色性、莢膜分離培養(yǎng)：注意觀察雙圈溶血環(huán)生化反應(yīng)：洶涌發(fā)酵現(xiàn)象動物實驗：

培養(yǎng)物→小鼠腹腔注射→處死小鼠→培養(yǎng)→解剖小鼠→肉眼觀察泡沫肝＋涂片染色鏡檢肉毒梭菌－－形態(tài)與培養(yǎng)

革蘭陽性粗大桿菌，有鞭毛，芽孢位于菌體次級端，大于菌體，呈“網(wǎng)球拍狀”無莢膜專性厭氧

菌落大而不規(guī)則；消化肉渣，肉渣變黑，有腐敗惡臭肉毒梭菌－－臨床意義

致病物質(zhì)：肉毒毒素，為神經(jīng)毒素，引起肌肉馳緩型麻痹。毒素分為8個型別，我國以A型最多見所致疾病肉毒食物中毒嬰兒肉毒病肉毒梭菌－－檢驗程序標本分離培養(yǎng)可疑菌落毒素測定皰肉培養(yǎng)革蘭染色生化反應(yīng)毒素測定肉毒梭菌－－檢驗方法標本采集：可疑食物、嘔吐物等分離培養(yǎng)：皰肉培養(yǎng)、分離培養(yǎng)毒素測定毒素定性檢驗：毒素注射小鼠→小鼠出現(xiàn)癥狀毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠無癥狀毒素型別鑒定：

鑒定依據(jù)：形態(tài)、芽孢特征、皰肉培養(yǎng)物、肉毒毒素艱難梭菌

革蘭陽性粗大桿菌、芽孢位于菌體次級端，無莢膜嚴格厭氧在果糖卵黃瓊脂平板上形成粗糙的黃色菌落脂酶－、卵磷脂酶－人和動物腸道中的正常菌群腸道菌群失調(diào)時可引起偽膜性腸炎

糞便標本直接涂片檢查見優(yōu)勢生長的革蘭陽性粗大桿菌并有芽孢，具有診斷價值革蘭陰性無芽孢厭氧菌類桿菌屬腸道和女性生殖道主要菌群臨床最重要的無芽孢厭氧菌普雷沃菌屬卟啉單胞菌屬

梭桿菌屬：菌體細長，兩端尖細，中間膨大，革蘭染色可見菌體中有紫色顆粒革蘭陽性無芽孢厭氧菌丙酸桿菌屬痤瘡丙酸桿菌寄居人和動物皮膚、皮脂腺等部位，與痤瘡有關(guān)優(yōu)桿菌屬乳桿菌屬：女性生殖道主要正常菌群

雙歧桿菌屬：人和動物腸道中重要的正常菌群，對維持人體內(nèi)微生態(tài)平衡發(fā)揮重要作用厭氧性球菌消化球菌屬：革蘭陽性球菌消化鏈球菌屬：革蘭陽性球菌韋榮球菌屬：革蘭陰性球菌測驗1正常人腸道中數(shù)量最多的細菌是A

大腸埃希菌B

乳酸桿菌C

糞腸球菌D

無芽孢厭氧菌E

芽孢厭氧菌測驗2

在無芽孢厭氧菌感染中，臨床標本檢出陽性率最高的是：A

脆弱類桿菌B

雙歧桿菌C

丙酸桿菌D

梭形桿菌E

消化鏈球菌測驗3下列對厭氧要求不嚴格的細菌是A

雙歧桿菌B

產(chǎn)氣莢膜梭菌C

破傷風梭菌D

艱難梭菌E

產(chǎn)黑色素類普雷沃菌測驗4下列哪種細菌是條件致病菌A

脆弱類桿菌B

淋病奈瑟菌C

溶血性鏈球菌D

腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌E

乙型副傷寒沙門菌測驗5

在牛乳培養(yǎng)基產(chǎn)生“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象的是A

破傷風梭菌B

產(chǎn)氣莢膜梭菌C

肉毒梭菌D

艱難梭菌E

諾維梭菌測驗6關(guān)于艱難梭菌特點錯誤的是A

革蘭陽性粗大桿菌B

為腸道內(nèi)正常菌群C

在組織和培養(yǎng)時不易形成芽孢D

是偽膜性腸炎最常見的病原菌E

所致疾病與長期使用抗生素有關(guān)測驗7

菌體細長，兩端尖細，中間膨大，菌體中常有紫色顆粒（革蘭染色），可能的細菌是A

產(chǎn)氣莢膜梭菌