生物藥物綜合實驗植物原生質(zhì)體的制備課件

北京電子科技學(xué)院----生物系生物藥物綜合實驗

王維彬/北京電子科技學(xué)院----生物系生物藥物綜合實驗

王維彬1實驗八植物原生質(zhì)體的制備

實驗?zāi)康?/p>

實驗原理

實驗器材

實驗方法

實驗結(jié)果

注意事項

思考題/實驗八植物原生質(zhì)體的制備實驗?zāi)康?2學(xué)習(xí)用酶溶解細胞壁的方法制備原生質(zhì)體，為細胞生理研究提供必要基礎(chǔ)。掌握植物原生質(zhì)體分離的基本原理及其操作過程實驗?zāi)康?學(xué)習(xí)用酶溶解細胞壁的方法制備原生質(zhì)體，為細胞生理研究提供必要3植物原生質(zhì)體是指包在植物細胞壁內(nèi)的生活物質(zhì)，可通過混合酶液消化細胞壁而獲得。原生質(zhì)體經(jīng)適宜的培養(yǎng)能合成新壁，并進行細胞分裂，經(jīng)特殊誘導(dǎo)可生成完整植株。除去細胞壁后為原生質(zhì)所包圍的“裸露細胞”，是開展基礎(chǔ)研究的理想材料。其中酶解法分離原生質(zhì)體是一個常用的技術(shù)，其原理是植物細胞壁主要由纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)組成，因而使用纖維素酶、半纖維素酶和果膠酶能降解細胞壁成分，除去細胞壁。實驗原理/植物原生質(zhì)體是指包在植物細胞壁內(nèi)的生活物質(zhì)4

材料：油菜或菠菜或煙草葉片試劑：（1）酶混合液1％纖維素酶1％果膠酶0.7mol/L甘露醇0.7mmol/LKH2PO410mmol/LCaCl2·2H2OpH6.8—7.0

實驗器材/實驗器材/5//61.材料稱取與質(zhì)壁分離

稱取0.5g材料，撕去葉下表皮，先切成大塊，蒸餾水沖洗4-5次。加入12%甘露醇，質(zhì)壁分離0.5h，濾去甘露醇，將材料用鑷子夾取轉(zhuǎn)入放有濾紙的培養(yǎng)皿中，吸干葉片表面水分，將材料切成0.5cm2小塊備用

實驗方法/1.材料稱取與質(zhì)壁分離實驗方法/72.酶解

將切碎的材料放入到培養(yǎng)皿中，取酶混合液5ml到培養(yǎng)皿中，讓去除下表皮的一面接觸酶液。黑暗下酶解1.5小時，中間輕晃幾次。/2.酶解/83.原生質(zhì)體的收集與純化（1）將酶-原生質(zhì)體混合液收集于10mL刻度離心管中，蓋蓋，600~800r/min離心7min，使原生質(zhì)體沉降。

（2）去上清液，留沉淀即收集的原生質(zhì)體。向離心管中緩緩加入0.16mol/L氯化鈣液約2mL，輕輕吹打均勻，使沉淀懸浮。/3.原生質(zhì)體的收集與純化/9（3）用注射器向離心管底部緩緩注入20%蔗糖液約2—3mL，出現(xiàn)下部蔗糖液，上部原生質(zhì)體懸浮液。（4）以600rpm離心10分鐘，在兩液相之間出現(xiàn)一條綠色帶，便是純凈的原生質(zhì)體。/（3）用注射器向離心管底部緩緩注入20%蔗糖液約2—3mL，104、原生質(zhì)體的觀察用吸管取一滴純化好的原生質(zhì)體放在載玻片上，用吸水紙將多余液體吸干，置顯微鏡下進行觀察。/4、原生質(zhì)體的觀察/11實驗結(jié)果/實驗結(jié)果/12

1、從理論上講，植物體的任何一部分都可以通過酶解作用去除細胞壁而得到原生質(zhì)體。但在實際操作中，只有幼嫩的組織才能完成去壁的過程。所以，為了制備健康的原生質(zhì)體，一般選用根尖、莖尖、嫩葉及對數(shù)生長期的愈傷組織為材料，一旦細胞具有木質(zhì)化或次生加厚的外壁，則不能被酶降解。因此，取材成為實驗成功與否的首要問題。2、在離心過程中一定要注意轉(zhuǎn)速。注意事項/1、從理論上講，植物體的任何一部分都可以通過酶解作注意事13