玉米胚芽油食用安全性評價(jià)

玉米胚芽油食用安全性評價(jià)

玉米扣油是指從玉米扣中提取的油。利用玉米胚芽制油,1890年首創(chuàng)于美國,1958年我國開始生產(chǎn)玉米胚芽油,近年有了快速發(fā)展1材料表面1.1生物技術(shù)提供SPF級昆明小鼠和Wistar大鼠由北京康藍(lán)生物技術(shù)有限公司提供,飼養(yǎng)環(huán)境為屏障級。適應(yīng)性喂養(yǎng)7d后,嚴(yán)格按《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(衛(wèi)生部2003年)進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)1.2蘑菇鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102菌株,由中國疾病預(yù)防控制中心營養(yǎng)與食品安全所提供。1.3試劑和樣品玉米胚芽油(山東西王);食用花生油(萊陽魯花);多氯聯(lián)苯(sigma);環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞)。2方法2.1小鼠的急性毒性試驗(yàn)體重18~22g小鼠20只,雌雄各半,實(shí)驗(yàn)前空腹16h備用(不限制飲水)。稱取10.0g受試物,用食用花生油稀釋至20mL,制得濃度為0.5g/mL玉米胚芽油樣品,分兩次給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃,間隔4h,每次灌胃量20mL/kg體重,累計(jì)染毒劑量為20.0g/kg體重,連續(xù)觀察14d,記錄小鼠的中毒表現(xiàn)及死亡情況。2.2遺傳毒性試驗(yàn)2.2.1大鼠肝勻漿誘導(dǎo)誘導(dǎo)體試驗(yàn)菌株為經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102,體外活化系統(tǒng)為多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿制備的S-9混合液2.2.2受試物的染毒劑量體重25~30g小鼠50只,雌雄各半,隨機(jī)分為5組:陰性對照組(給予花生油,15mL/kg體重),陽性對照組(給予環(huán)磷酰胺,40mg/kg體重),3個(gè)試驗(yàn)組的染毒劑量分別為2.5,5.0,10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重,灌胃2次,間隔24h。末次給予受試物6h后處死小鼠,常規(guī)制片。每只小鼠鏡檢1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞(PCE),記錄微核細(xì)胞數(shù),計(jì)算微核率(即微核細(xì)胞數(shù)/嗜多染紅細(xì)胞,以千分率表示)。同時(shí)觀察200個(gè)PCE,計(jì)算觀察到的正染紅細(xì)胞(NCE)數(shù),并計(jì)算PCE/NCE比值。2.2.3環(huán)磷酰胺對小鼠的毒力體重27~31g雄性小鼠25只,隨機(jī)分為5組:陰性對照組(給予花生油,15mL/kg體重),陽性對照組(給予環(huán)磷酰胺,40mg/kg體重),3個(gè)試驗(yàn)組的染毒劑量分別為2.5,5.0,10.0g/kg體重。各組灌胃量均為15mL/kg體重,每天灌胃1次,連續(xù)5d。第35天處死小鼠,常規(guī)制片。每只小鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子,記錄畸變類型和數(shù)量,計(jì)算精子畸形率(以百分率表示)。2.3灌胃對大鼠的一般情況表1體重70~90g斷乳大鼠80只,雌雄各半,隨機(jī)分為花生油陰性對照組(給予花生油,20mL/kg體重)及玉米胚芽油高、中、低劑量組(劑量分別為20,10,5mL/kg體重),各組灌胃量均為20mL/kg體重,每天灌胃1次,連續(xù)30d。觀察動(dòng)物一般狀況。第30天尾靜脈取血,測血常規(guī);此后禁食16h,腹動(dòng)脈取血,進(jìn)行血生化測定。同時(shí)對臟器進(jìn)行病理性檢查。試驗(yàn)期間觀察大鼠的一般表現(xiàn)、行為、中毒體征等;每周稱重1次,稱量2次食物剩余量和撒食量以計(jì)算每周食物攝入量、每周及總的食物利用率;試驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有大鼠均行大體檢查,計(jì)算肝、脾、腎、睪丸等臟器的絕對重量和臟器系數(shù),肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器行組織病理學(xué)檢查。2.4統(tǒng)計(jì)分析使用Excel和SPSS16.0軟件進(jìn)行均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差的計(jì)算和方差分析或秩和檢驗(yàn),以ue0af±s表示。3結(jié)果3.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的mtd14d內(nèi)小鼠未見明顯中毒癥狀、無死亡。最大耐受量(MTD)試驗(yàn)結(jié)果顯示,該受試物對兩種性別小鼠的MTD均大于20.0g/kg體重。根據(jù)急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn),該樣品實(shí)際屬無毒級物質(zhì)。3.2遺傳毒性試驗(yàn)3.2.1遺傳毒性試驗(yàn)兩次試驗(yàn)受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍,亦無劑量-反應(yīng)關(guān)系,說明在加與不加S-9時(shí)該樣品對鼠傷寒沙門菌TA97、TA98、TA100、TA102試驗(yàn)菌株均未呈現(xiàn)遺傳毒性。3.2.2大鼠骨髓熱愛多感染紅細(xì)胞微測試3.2.3大鼠精正畸形試驗(yàn)3.3大鼠一般指標(biāo)檢測結(jié)果大鼠喂養(yǎng)30d試驗(yàn)周期內(nèi)各試驗(yàn)動(dòng)物總體生長狀況良好,體重逐周增長,未見中毒體征及死亡。各試驗(yàn)組動(dòng)物每周體重、進(jìn)食量、食物利用率和體重增重、總進(jìn)食量、總食物利用率與陰性對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。血液學(xué)測定結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,雄性中劑量組紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)及低劑量組白細(xì)胞計(jì)數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01或P<0.05),但仍在本試驗(yàn)正常值范圍內(nèi),尚不認(rèn)為存在生物學(xué)意義。其他劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。血液生化學(xué)測定結(jié)果顯示,與陰性對照組比較,雄性低劑量組尿素氮差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但仍在本試驗(yàn)正常值范圍,不認(rèn)為存在生物學(xué)意義。其他各劑量組各指標(biāo)與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)所有動(dòng)物均行大體檢查,肝臟大小正常、顏色新鮮、表面光滑、質(zhì)地柔軟、邊緣銳利、無結(jié)節(jié)包塊等。取出兩側(cè)腎和腎上腺,對準(zhǔn)腎門將腎以最大剖面剖開,暴露腎盂,皮質(zhì)和髓質(zhì)厚度、顏色正常,界限清晰。未見胃腸黏膜出血、潰瘍、增厚、淋巴濾泡增生等病變。脾切面馬氏小體清晰可見。睪丸/卵巢形態(tài)、大小正常。各試驗(yàn)組動(dòng)物的肝、腎、胃、腸、脾及卵巢/睪丸組織未見明顯異常。與陰性對照組比較,肝、脾、腎、睪丸等器官的重量和臟器系數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。取高劑量組和陰性對照組雌、雄動(dòng)物的肝、脾、腎、胃、腸、睪丸、卵巢等臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查:對照組和高劑量組動(dòng)物均未觀察到胃、小腸、脾臟、睪丸、卵巢等有病理改變。少數(shù)動(dòng)物可觀察到肝臟、腎臟有輕微病理學(xué)改變,但這些病理改變程度較輕且無組間特異性分布,考慮與動(dòng)物質(zhì)量有關(guān),不認(rèn)為試驗(yàn)組出現(xiàn)有意義的病理學(xué)改變。4小鼠精子畸形試驗(yàn)與s-9、30d飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果比較根據(jù)我國保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)規(guī)范推薦的遺傳毒性檢測試驗(yàn)組合,本研究選取了急性毒性試驗(yàn)、Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)、大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)。急性毒性試驗(yàn)是經(jīng)口1次給予或24h內(nèi)多次給予受試物,觀察動(dòng)物短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生的毒性反應(yīng),包括致死和非致死的參數(shù)指標(biāo)。Ames試驗(yàn)是目前檢測基因突變最常用的方法之一,其原理是檢測受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門菌組氨酸缺陷型菌株回復(fù)突變成野生型的能力,許多致癌劑的生物轉(zhuǎn)化是依賴細(xì)胞內(nèi)微粒體混合功能氧化酶系完成的。大鼠肝S-9是常用的體外活化系統(tǒng),其主要有效成分為混合功能氧化酶系統(tǒng),不加S-9混合液得到陽性結(jié)果,說明受試物是直接誘變劑,加S-9混合液得到陽性結(jié)果,說明受試物是經(jīng)S-9活化后產(chǎn)生致突變性。微核是常用的遺傳毒理學(xué)指標(biāo)之一,代表染色體或紡錘體的損傷。這種損傷會因細(xì)胞受到外界誘變因子的作用而加劇,微核產(chǎn)生的數(shù)量又與誘變因子劑量的強(qiáng)弱成正比,因此,可用微核出現(xiàn)的頻率評價(jià)環(huán)境誘變因子對生物遺傳物質(zhì)的損傷。小鼠精子形態(tài)受基因控制,精子畸形是決定精子形成的基因發(fā)生突變的結(jié)果。因此,形態(tài)改變提示有關(guān)基因及其蛋白質(zhì)產(chǎn)物的改變。大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)主要觀察較長期飼喂不同劑量的受試物引起有害效應(yīng)的劑量、毒作用性質(zhì)和靶器官,估計(jì)亞慢性攝入的危害。當(dāng)未觀察到有害作用的最大劑量達(dá)到人可能攝入量的一定倍數(shù)時(shí),則可以此為依據(jù)外推到人,為確定人食用的安全劑量提供依據(jù)。本研究結(jié)果顯示,接受急性毒性試驗(yàn)的14d內(nèi)小鼠未見明顯中毒癥狀、無死亡,且兩種性別小鼠對玉米胚芽油的最大耐受量均大于20.0g/kg體重。根據(jù)急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn),該樣品屬無毒級物質(zhì)。Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果顯示,玉米胚芽油對小鼠沒有致畸、致突等遺傳毒性作用。大鼠30d喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果顯示,試驗(yàn)期內(nèi)各試驗(yàn)組動(dòng)物生長發(fā)育良好,體重增重、食物利用率、臟器重量和臟器系數(shù)等各項(xiàng)指標(biāo)均在本試驗(yàn)正常值范圍。試驗(yàn)組血常規(guī)及血生化各指標(biāo)均在本試驗(yàn)正常值范圍。病理組織學(xué)檢查試驗(yàn)組被檢臟器未見有意義的病理學(xué)改變。毒理學(xué)評價(jià)結(jié)果認(rèn)為該玉米胚芽油是安全的