植物葉綠體色素含量的測(cè)定(沈)課件

植物葉綠體色素含量的測(cè)定福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生理生化實(shí)驗(yàn)室植物葉綠體色素含量的測(cè)定福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院12、為什么要測(cè)定完全液和缺素苗的葉綠色素含量？1、為什么要測(cè)定葉綠色素？2、為什么要測(cè)定完全液和缺素苗的葉綠色素含量？1、為什么2葉綠體色素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光能的作用.因此，葉綠體色素的含量與植物的光合速率密切相關(guān)。在一定范圍內(nèi)，光合速率隨葉綠體色素含量的增加而升高。另外，葉綠體色素的含量是植物生長狀態(tài)的一個(gè)反映，一些環(huán)境因素如元素缺乏、干旱、鹽漬、低溫等都可以影響葉綠體色素的含量與組成，并因之影響植物的光合速率。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康娜~綠體色素在光合作用中起到吸收光能、傳遞光3二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a：吡咯環(huán)Ⅱ-CH3

葉綠素b：吡咯環(huán)Ⅱ-CHO葉黃素：3,3’-OH胡羅卜素：3,3’-HMg2+葉綠體色素組成二、實(shí)驗(yàn)原理葉綠素a：吡咯環(huán)Ⅱ-CH3Mg2+葉綠4葉綠素是雙羧酸的酯，一個(gè)羧基被甲醇所酯化，另一個(gè)羧基被葉綠醇所酯化。葉綠素a與b的不同之處是葉綠素a比b多兩個(gè)氫少一個(gè)氧。兩者結(jié)構(gòu)上的差別僅在于葉綠素a的第Ⅱ吡咯環(huán)上一個(gè)甲基(－CH3)被醛基(－CHO)所取代。葉綠素分子含有一個(gè)卟啉環(huán)的“頭部”和一個(gè)葉綠醇(植醇)的“尾巴”。葉綠素是雙羧酸的酯，一個(gè)羧基被甲醇所酯化，另一個(gè)羧基被葉綠醇5高等植物葉綠體色素葉綠素類胡蘿卜葉黃素---C40H56O胡蘿卜素---C40H56葉綠素b---C55H70O6N4Mg葉綠素a---C55H72O5N4Mg高等植物葉綠體色素葉綠素類胡蘿卜葉黃素---C40H56O胡6這兩類色素均不溶于水，而溶于含有水的有機(jī)溶劑，故常用95％的酒精和80％丙酮提取，葉綠體色素易受光氧化，提取色素應(yīng)在弱光中進(jìn)行，并避光保存色素這兩類色素均不溶于水，而溶于含有水的有機(jī)溶劑7

葉綠素吸收光譜：葉綠素吸收光譜：8最大吸收區(qū)域在藍(lán)紫光部分（400-500nm），基本上不吸收黃光，從而呈現(xiàn)黃色。

類胡蘿卜素吸收光譜：最大吸收區(qū)域在藍(lán)紫光部分（400-500nm），基本9葉綠體色素提取液中各色素的吸收光譜雖有不同，但又存在著明顯的重疊，在不分離的情況下同時(shí)測(cè)定葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的濃度，可分別測(cè)定在663nm、645nm（分別是葉綠素a和葉綠素b在紅光區(qū)的吸收峰）和475nm的光吸收，然后根據(jù)Lambert-Beer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素a、葉綠素b和類胡蘿卜素的濃度。A663=82.04Ca+9.27Cb（1）A645=16.75Ca+45.60Cb（2）葉綠體色素提取液中各色素的吸收光譜雖有不10公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L），82.04和9.27分別是葉綠素a和葉綠素b在663nm下的比吸收系數(shù)（濃度為1g/L，光路寬度為1cm時(shí)的吸光度值）；16.75和45.60分別是葉綠素a和葉綠素b在645nm下的比吸收系數(shù)。即混合液在某一波長下的光吸收等于各組分在此波長下的光吸收之和公式中Ca為葉綠素a的濃度，Cb為葉綠素b濃度（單位為g/L11將上式整理，可以得到下式：Ca=0.0127A663-0.00269A645（3）Cb=0.0229A645-0.00468A663（4）將葉綠素的濃度改為mg/L，則上式變?yōu)椋篊a=12.7A663-2.69A645（5）Cb=22.9A645-4.68A663（6）CT=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645（7）CT為葉綠素的總濃度將上式整理，可以得到下式：12三、實(shí)驗(yàn)儀器及材料實(shí)驗(yàn)材料：缺素營養(yǎng)液及完全營養(yǎng)液培養(yǎng)的玉米苗葉片實(shí)驗(yàn)儀器及試劑：S22分光光度計(jì)；研缽；移液管；漏斗；濾紙；95%乙醇；石英砂；CaCO3三、實(shí)驗(yàn)儀器及材料實(shí)驗(yàn)材料：13葉綠體色素是一種酯，因此不溶于水。通常用含有少量水的有機(jī)溶劑如80％的丙酮，或者95%乙醇的混合液來提取葉片中的葉綠體色素，用于測(cè)定葉綠體色素含量。之所以要用含有水的有機(jī)溶劑提取葉綠體色素，這是因?yàn)槿~綠體色素與蛋白質(zhì)結(jié)合牢，需要經(jīng)過水解作用才能被提取出來。1.葉綠體色素的提取提取方法研磨法浸提法四、實(shí)驗(yàn)步驟葉綠體色素是一種酯，因此不溶于水。通常用含有少量水的有機(jī)溶劑14研磨法提取光合色素少許石英砂、碳酸鈣和1ml95%乙醇研磨至組織發(fā)白完全轉(zhuǎn)移定容至25ml研磨法提取光合色素少許石英砂、碳酸研磨至組織發(fā)白完全轉(zhuǎn)移定容15測(cè)量光吸收利用S22分光光度計(jì)分別測(cè)定葉綠體色素提取液在470nm、649nm和665nm下的吸光度測(cè)量光吸收16五、結(jié)果計(jì)算與分析1.結(jié)果計(jì)算

C(mg/L)×提取液總量（L）×稀釋倍數(shù)Chl=(mg/g鮮重)材料鮮重（g）*10002.比較分析不同營養(yǎng)處理的植物葉綠素含量差異及其Chla/Chlb差異五、結(jié)果計(jì)算與分析1.結(jié)果計(jì)算17實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：1、研磨要在弱光下進(jìn)行，且速度要快；2、研磨時(shí)要加入少量的碳酸鈣，保護(hù)葉綠素；3、殘?jiān)械纳匾浞窒疵摚?、波長要調(diào)準(zhǔn)；5、比色液不能混濁。實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：18六、思考題

1、