Elisa技術(shù)原理及應(yīng)用課件

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Elisa原理及應(yīng)用簡介(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)

啟因生物日期：2017-08-18上海啟因生物科技有限公司Elisa原理及應(yīng)用簡介1上海啟因生物科技有限公司

Elisa發(fā)展Elisa原理常用檢測方法應(yīng)用前景上海啟因生物科技有限公司Elisa發(fā)展Elisa原理常用檢測2上海啟因生物科技有限公司

ELISA的發(fā)展ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱。其是繼免疫熒光（IFA）和放射性免疫（RIA）分析技術(shù)之后，建立起來的用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。自上世紀(jì)70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。上海啟因生物科技有限公司ELISA的發(fā)展ELISA是酶聯(lián)接免3上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理定義：以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種檢測未知抗體或抗原的敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。反應(yīng)的基礎(chǔ)：抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記（結(jié)合在固相載體的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，而酶標(biāo)記的抗原或抗體既保持其免疫學(xué)活性又保留酶的活性）；加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，由此進(jìn)行定性或定量分析。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理定義：以免疫學(xué)反應(yīng)為4上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理抗原定義：抗原是能在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗原進(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體引起細(xì)胞免疫和產(chǎn)生抗體。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)，例如完整的病毒粒子、細(xì)菌等；小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原；例如某些激素、藥物等?？乖姆磻?yīng)性取決于抗原決定簇，或稱為表位。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定簇，例如細(xì)菌的莢膜多糖、類脂中可帶有多個(gè)抗原決定簇。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理抗原定義：抗原是能在5上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理抗體定義：抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(Ig)，Ig分五類即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。Ig由兩個(gè)輕鏈L和兩個(gè)重鏈H的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤?，有κ和λ兩種型別，五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。特點(diǎn):可逆性：抗原抗體的結(jié)合是動(dòng)態(tài)平衡過程；特異性：抗原抗體化學(xué)結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，高度特異；最適比例；抗原抗體的含量應(yīng)保持最適合的比例；敏感性：標(biāo)記的免疫敏感度可達(dá)ng/ml上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理抗體定義：抗體是能與6上海啟因生物科技有限公司

ELISA的原理ELISA方法中三個(gè)必要的試劑固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；酶反應(yīng)的底物。

可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。上海啟因生物科技有限公司ELISA的原理ELISA方法中三個(gè)7上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型固相載體具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性。聚苯乙烯ELISA反應(yīng)中最常用的固相載體，具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能。在ELISA測定過程中，它作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)。抗原、抗體和其它生物分子通過多種機(jī)制吸附至載體表面，這包括通過疏水鍵、流水/離子鍵的被動(dòng)吸附,通過引入其它活性基團(tuán)如氨基和碳基的共價(jià)結(jié)合，以及通過表面改性后的親水鍵結(jié)合。聚氯乙烯。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值也略高。良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。固相載體上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型固相載體具有較強(qiáng)8上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型

概念：將抗原或抗體固定在固相載體的過程稱為包被(coating)。

蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。包被的方式上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型概念：將抗原或9上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型ELISA常用酶上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型ELISA常用酶10上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型包被目的抗體加受檢標(biāo)本（抗原）形成固相抗體－抗原復(fù)合物洗滌除去未結(jié)合的其他物質(zhì)加酶標(biāo)抗體生成抗體-待測抗原-酶標(biāo)記抗體的復(fù)合物徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體加底物進(jìn)行酶催化反應(yīng)根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行抗原的定性或定量測定實(shí)驗(yàn)基本流程圖上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型包被目的抗體加受11上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型雙抗夾心法：雙抗體夾心法測抗原和雙抗原夾心法測抗體間接法測抗體（常用）競爭法：競爭法測抗原與競爭法測抗體捕獲包被法測抗體親和素—生物素ELISA法上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型雙抗夾心法：雙抗12上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型雙抗體夾心法測抗原特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合成固相抗原復(fù)合物；加酶標(biāo)記抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合，酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成正相關(guān)。加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型雙抗體夾心法測抗13上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型雙抗原夾心法測抗體

用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBsAg的檢測常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型雙抗原夾心法測抗14上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型間接法測抗體酶標(biāo)二抗底物間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的二抗（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。其檢測方法：固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)二抗Ab*→Ag-Ab-抗Ab*+底物(TMB)→顯色上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型間接法測抗體酶標(biāo)15上海啟因生物科技有限公司

ELISA的檢測類型競爭法測抗體原理:標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)：固相(包被)抗原Ag+樣品(抗體Ab)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ag-Ab+底物(TMB)→不顯色(+)固相(包被)抗原Ag+樣品(無抗體Ab)+酶標(biāo)抗體Ab*→Ag-Ab*+底物(TMB)→顯色(-)上海啟因生物科技有限公司ELISA的檢測類型競爭法測抗體原理16上海啟因生物科技有限公司

ABS-ELISA法ELISA的檢測類型①：固相支持物；②：樣品；③：特異性IgG；④：生物素化抗小鼠IgG（Biotin）；⑤：辣根過氧化物酶HRP-酶標(biāo)鏈親和素（Avidin）；⑥：DAB顯色液；⑦：顯色；ABS:親和素（avidin）生物素（biotin）系統(tǒng)（system）親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬于免疫反應(yīng)，但特異性強(qiáng)，親和力大，能夠形成一種極為穩(wěn)定的復(fù)合體。把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來，可以大大提高ELISA的敏感度。上海啟因生物科技有限公司ABS-ELISA法ELISA的檢測17上海啟因生物科技有限公司

ELISA檢測ELISA特點(diǎn)：

靈敏度高：ELISA測定法的靈敏度來自作為報(bào)告基團(tuán)的酶。由于酶的催化效率很高，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。特異性強(qiáng)：ELISA的特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。準(zhǔn)確性高、檢測時(shí)間短、價(jià)格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn)、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點(diǎn)，適合于大批標(biāo)本的檢測，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測、醫(yī)療檢測以及免疫實(shí)驗(yàn)分析等領(lǐng)域。上海啟因生物科技有限公司ELISA檢測ELISA特點(diǎn)：靈敏度18上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位研究抗酶抗體的合成顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)定量檢測體液中抗原或抗體成份ELISA在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用范圍四個(gè)方面：

上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景免疫酶染色各種細(xì)胞19上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測抗原方面：

在實(shí)際應(yīng)用方面：可作疾病的臨床診斷、疾病監(jiān)察、疾病普查、法醫(yī)檢查、獸醫(yī)及農(nóng)業(yè)上的植物病害的診斷檢定等。檢查抗原和半抗原方面：在內(nèi)分泌方面用于檢測雌性激素、絨毛膜促性腺激素、黃體素、胰島素、皮質(zhì)醇、促甲狀腺素和孕酮等在血液學(xué)方面：可用于檢查凝固因子（如第Ⅷ凝固因子）、紅細(xì)胞抗原及結(jié)合球蛋白（HaptoGlobin）等在腫瘤方面：試用檢查甲胎蛋白（AFP）癌胚抗原（CEA），對(duì)前者的敏感性已達(dá)到與放射免疫試驗(yàn)相當(dāng)?shù)乃?，但?duì)CEA檢查的敏感性較低，目前尚不能用于常規(guī)診斷在傳染病的診斷方面：用于檢查乙型肝炎表面抗原。其他方面：尚有用于檢查霍亂弧菌、大腸肝菌、綠膿桿菌和破傷風(fēng)梭菌毒素；腦膜炎球菌及淋球菌抗原；檢查免疫抑制病人中常見的白色念殊菌抗原，檢查病人或病獸的糞便中的輪狀病毒，自病人標(biāo)本中檢查甲肝病毒、皰疹病毒、麻疹病毒、流感、呼吸道融合及巨細(xì)胞病毒等上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測抗20上海啟因生物科技有限公司

ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測抗體方面：

寄生蟲病方面：用于對(duì)瘧原蟲、阿米巴、利日曼原蟲、錐蟲、血吸蟲、囊蟲、弓漿蟲、肺吸蟲、肝吸蟲、血絲蟲、旋毛蟲病等血清學(xué)診斷，這對(duì)人醫(yī)和獸醫(yī)都很重要。病原微生物方面：已用于檢查鏈球菌、沙門氏菌、布氏桿菌、結(jié)核桿菌、麻瘋桿菌、霍亂弧菌、淋球菌、假絲酵母菌等的抗體，還可用于破傷風(fēng)抗毒素和霍亂弧菌抗毒素的測定以及檢測斑疹傷寒立克次氏體感染后的抗體，可作診斷。試用于病毒抗體檢查報(bào)告的有：流感病毒、腮腺炎病毒、麻診、風(fēng)疹、輪狀病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、EB病毒、腺病毒、腸道病毒、腦炎病毒、黃熱病毒、狂犬病毒和脊髓灰質(zhì)炎病毒等，其敏感性都超過目前常用的檢查方法。衛(wèi)生學(xué)方面：可用于檢測食品中葡萄球菌腸毒素及沙門氏菌毒素等等。上海啟因生物科技有限公司ELISA應(yīng)用前景ELISA在檢測抗21上海啟因生物科技有限公司

樣品類型：血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。種屬：人檢測周期：收到樣品起一周內(nèi)。公司檢測類型

費(fèi)用：ELISA檢測25元/樣；實(shí)驗(yàn)方法：只需提供樣品，數(shù)量不