睪酮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

睪酮測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.檢驗(yàn)原理：ARCHITECT睪酮項(xiàng)目采用延遲一步法免疫檢測(cè)，運(yùn)用Chemiflex技術(shù)，即化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)技術(shù)(CMIA)與靈活的檢測(cè)模式的結(jié)合，定量測(cè)定人血清和血漿中的睪酮。第一步，將樣本、項(xiàng)目專用稀釋液和睪酮抗體（綿羊，單克?。┌坏捻槾盼⒘Ｗ踊旌?。樣本中的睪酮與睪酮抗體包被的微粒子結(jié)合。孵育后，將吖啶酯標(biāo)記的睪酮結(jié)合物添加至反應(yīng)混合物中。進(jìn)一步孵育和沖洗后，將預(yù)激發(fā)液和激發(fā)液加入反應(yīng)混合物中。測(cè)量產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，以相對(duì)發(fā)光單位（RLUs）表示。樣本中的睪酮含量與ARCHITECTi光學(xué)系統(tǒng)檢測(cè)到的RLUs值之間成反比。睪酮濃度由已知睪酮濃度的校準(zhǔn)曲線得出。2.試劑主要組成成分2.1試劑盒微粒子：睪酮抗體（綿羊，單克?。┌坏奈⒘Ｗ?，儲(chǔ)存于含有蛋白（牛）穩(wěn)定劑的BISTris緩沖液中。最低濃度：0.1%固體物質(zhì)。防腐劑：ProClin300。結(jié)合物：吖啶酯標(biāo)記的睪酮結(jié)合物，儲(chǔ)存于表面活性劑穩(wěn)定劑的BISTris緩沖液中。最低濃度：6.5nmol/L。防腐劑：ProClin300。項(xiàng)目專用稀釋液：睪酮項(xiàng)目稀釋液，含有磷酸鹽和甘氨酸，儲(chǔ)存于檸檬酸鹽緩沖液中。防腐劑：ProClin300。樣本稀釋液：睪酮樣本稀釋液，含有PBS緩沖液中。防腐劑：ProClin300。2.2需要但未提供的試劑預(yù)激發(fā)液：預(yù)激發(fā)液含有1.32%（W/V）過氧化氫激發(fā)液：激發(fā)液含有0.35N氫氧化鈉濃縮清洗緩沖液：濃縮清洗緩沖液含有磷酸鹽緩沖液。防腐劑：抗菌劑。3.樣本要求：人血清（包括采集于血清分離管中的血清）或采集于肝素或EDTA鉀抗凝管中的血漿。血清和血漿樣本中應(yīng)不含纖維蛋白、紅細(xì)胞或其他顆粒物質(zhì)。2-8℃可保存7天；7天內(nèi)不能檢測(cè)的，-20℃以下凍存。樣本應(yīng)避免反復(fù)凍融。4.檢驗(yàn)方法：儀器法（詳見雅培i1000標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）5.參考范圍樣本參考范圍（nmol/L）血清、血漿男性4.94-32.01女性0.38-1.976.檢驗(yàn)結(jié)果的解釋睪酮項(xiàng)目通過四參數(shù)Logistic曲線擬合數(shù)據(jù)約簡(jiǎn)法（4PLC,Y加權(quán)）生成一條校準(zhǔn)曲線7.檢驗(yàn)方法的局限性7.1肝素鋰血漿分離管（PST和PST-II）不能用于ARCHITECT睪酮項(xiàng)目。7.2睪酮檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不符時(shí)，需要通過附加試驗(yàn)來驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果。7.3檢測(cè)結(jié)果用于診斷時(shí)，應(yīng)當(dāng)與其他其他信息結(jié)合使用，比如癥狀、其他檢測(cè)結(jié)果以及臨床影像等。7.4接受過小鼠單克隆抗體制劑診斷或治療的患者，其樣本中可能含有人抗小鼠抗體（HAMA）。使用含有小鼠單克隆抗體的試劑盒如ARCHITECT睪酮測(cè)定試劑盒檢測(cè)含有HAMA的樣本時(shí)，可能會(huì)出現(xiàn)異常值。7.5發(fā)現(xiàn)其與19－去甲睪酮（諾龍）反應(yīng)強(qiáng)烈。不能使用接受了諾龍治療的患者的樣本8.產(chǎn)品性能指標(biāo)8.1分析靈敏度：定量限ARCHITECT睪酮項(xiàng)目的定量限（LoQ）≤0.15nmol/L。LoQ定義為總誤差估計(jì)值小于總允許誤差（TEa）時(shí)測(cè)得的最低分析物濃度，其中TEa如下：?樣本濃度≤0.5nmol/L時(shí)，TEa=0.125nmol/L?樣本濃度>0.5nmol/L時(shí)，TEa=25%根據(jù)NCCLS文件EP17-A的指導(dǎo)測(cè)定LoQ。12ARCHITECT睪酮項(xiàng)目觀測(cè)到的LoQ為0.08nmol/L(2.30ng/dL)。空白限和檢測(cè)限在上述試驗(yàn)中也對(duì)空白限（LoB）和檢測(cè)限（LoD）進(jìn)行了測(cè)定。LoB為0.03nmol/L(0.87ng/dL)，LoD為0.05nmol/L(1.44ng/dL)。8.2精密度：對(duì)于睪酮濃度≥0.5nmol/L至35nmol/L的樣本，ARCHITECT睪酮項(xiàng)目的室內(nèi)（總）不精密度為CV≤10%。9.臨床意義：睪酮是最重要的雄激素。男性體內(nèi)的雄激素由睪丸的Leydig細(xì)胞（間質(zhì)細(xì)胞）分泌，并受黃體生成素(LH)調(diào)控。睪酮分泌受下丘腦的促性腺激素釋放激素的負(fù)反饋機(jī)制調(diào)節(jié)。下丘腦分泌促性腺激素釋放激素，促進(jìn)垂體前葉合成和釋放LH和尿促卵泡素(FSH)。女性體內(nèi)，睪酮由卵泡膜和卵巢間質(zhì)細(xì)胞分泌，腎上腺雄激素代謝也產(chǎn)生睪酮。女性睪酮濃度比男性低大約10-20倍。在體內(nèi)循環(huán)中，約97%的睪酮由蛋白質(zhì)運(yùn)輸，大多數(shù)結(jié)合至性激素結(jié)合球蛋白（SHBG），親和力約為109Lmol-1。睪酮與白蛋白也有較低的結(jié)合率。ARCHITECT睪酮項(xiàng)目將睪酮從結(jié)合蛋白中釋放出來，從而測(cè)定總睪酮量。游離睪酮可通過總睪酮、SHBG和白蛋白濃度計(jì)算得出。也可計(jì)算出游離雄激素指數(shù)（FAI）(FAI=[總睪酮]/[SHBG])，并提供游離睪酮指數(shù)。個(gè)體的睪酮濃度24小時(shí)內(nèi)處于波動(dòng)狀態(tài)。夜間LH脈沖式釋放導(dǎo)致清晨睪酮濃度