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文檔簡介

PCR模板降解低溫保存質(zhì)純化模板引物濃度缺乏調(diào)整引物濃度,特別是針對(duì)長片段PCR引物應(yīng)高濃度小量分裝,-20℃保存,避開反復(fù)凍融Mg2+濃度偏低0.5mM間隔遞增,針對(duì)不同模板和引物摸索最正確Mg2+濃度dNTP-20℃保存,小量分裝,避開反復(fù)凍融酶量缺乏適當(dāng)增加酶量用酶不當(dāng)PCR模板變性不充分98℃Tm5℃延長時(shí)間缺乏增加延長時(shí)間,特別是針對(duì)長片段PCR循環(huán)數(shù)目不夠增加循環(huán)數(shù)PCR復(fù)使用PCRPCR污染Mg2+濃度過高M(jìn)g2+1mM3mM0.5mMMg2+dNTPdNTP0.5U退火溫度過低提高退火溫度循環(huán)次數(shù)過多削減循環(huán)次數(shù)片段過長PCR其他HotStartPCRTouchDownPCRPCR引物濃度過高降低引物濃度模板濃度過低提高模板濃度循環(huán)次數(shù)過多削減循環(huán)次數(shù)HotStartPCR引物序列特異性差或模板上存在同源序列重設(shè)計(jì)引物模板降解重制備模板模板濃度過高降低模板濃度Mg2+濃度過高M(jìn)g2+1mM3mM0.5mMMg2+濃度酶量過多或質(zhì)量差0.5U酶遞增退火溫度過低提高退火溫度延長時(shí)間過長縮短延長時(shí)間體系污染設(shè)計(jì)比照試驗(yàn),消退污染源PCRPCR假陽性目標(biāo)

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