血涂片及骨髓涂片的制片與讀片

PAGEPAGE4血涂片及骨髓涂片的制作與讀片潘志強2006-3-30實驗準備一．器材：載玻片：每只動物一塊蓋玻片：每只動物一塊滴管：4個橡皮吸頭：4個中號鑷子：4把大剪刀：4把眼科鑷：4把玻璃棒：4根燒杯：1000ml，2個量筒：100ml、500ml、1000ml各一蠟筆棕色小口瓶碾缽載玻片處理：一般將載玻片先用洗衣粉水溶液煮沸20分鐘，用流水沖洗，再經清潔液浸泡過夜，用流水反復沖洗，最后入95%酒精浸泡約1小時。取出，以潔凈布巾夾持玻片邊緣擦干備用。二．試劑：瑞氏染液240ml瑞氏染料粉劑0.1g純甲醇（AR）60ml將粉劑放入潔凈干燥碾缽內，先加少量甲醇研磨使染料溶解，然后將已溶解的染料倒入潔凈的棕色玻璃瓶內，剩下未溶解的再加入少量甲醇研磨，如此反復，直至染料完全溶解為止。新配制的染液需密封保存，室溫放置1周后才能使用。染料存放越久，染色效果越好。磷酸鹽緩沖液1%KH2PO430ml1%Na2HPO420ml加蒸餾水至800ml，調PH值到6.5~7.0，定容至1000ml。甲醇雞蛋清：蒸餾水與雞蛋清按1/1的比例稀釋。中性樹膠：如果中性樹膠過于粘稠，可將中性樹膠與二甲苯按7/3的比例稀釋。二甲苯

實驗步驟一．涂片（一）血液涂片的制作（1）需載玻片2張，分別稱為玻片1和玻片2（推片）。（2）用玻片1一端接約3mm直徑的血滴，將此玻片1保持水平。（3）取另一邊緣平整的載玻片2（推片），將其前端放在血滴前，與片1保持30°角并稍向后移與血滴接觸，即見血液沿片2（推片）下緣散開，使血液展開并充滿整個推片的寬度。（4）立刻將推片與載玻片呈30°角，邊輕壓推片邊將血液按下圖的箭頭方向推動涂抹，至血液鋪完血膜為止。（5）揮動片1使血膜吹干，用蠟筆將血膜邊緣圈畫備染色。（6）每只動物涂片一張。（7）一張良好的血片，要求厚薄適宜，頭、體、尾分明。（8）置30min～1hr后較利于觀察紅細胞的形態(tài)。注意事項：如標本本身太短，可觀察的部分會受局限，故以在離開載玻片另一端2cm地方涂抹為宜。載玻片、推片的角度越小、血液越?。煌磕ㄋ俣仍铰?、也越薄。在涂抹貧血病人的血液時，將推片稍豎起（不是30°而是35°～40°左右），以較快的速度推比較好，而對紅細胞增高的病人則相反。如用力過猛白細胞容易破損。（二）骨髓涂片的制作用手術剪刀剪掉大腿部的肌肉，充分暴露股骨，再用大剪刀從上端剪斷第2股骨，用中號鑷子夾股骨以擠出骨髓，如果骨髓不易取出，可用直頭眼科鑷插入骨髓腔挑出骨髓，置骨髓于一載玻片上，由于骨髓液的纖維蛋白原含量較高，易于凝固，可先在骨髓液內加5~10倍的稀釋后雞蛋清，充分混勻，取1滴至另一載玻片上，涂片。涂片方法同血液涂片，但推片要快并迅速使之干燥。每只動物涂片一張。二．染色（一）血液涂片的染色（1）將待染涂片平放于染色架上。（2）用滴管將染液滴于涂片上，覆蓋整張涂片，放置1～3分鐘。（3）加入等量的磷酸緩沖液或蒸餾水，與染液混勻，可以用滴管從一端吸入，另一端放出，混勻為止，或用嘴來回輕輕吹之，使之混勻，室溫下染色5～10分鐘（白細胞數多或骨髓標本時間應長一些，如20～30min）。（4）染色結束時，先用蒸餾水或緩沖液洗將涂片上的染液直接沖掉。（5）再將片子用自來水溫和沖洗，至血液膜呈淡紅色。（6）甩干或晾干玻片。（7）封片。（二）骨髓涂片的染色同血液涂片。實驗結果1．數碼拍照（1）依次在低倍（×10）、高倍（×40）、油鏡（×100）下觀察紅細胞、白細胞以及血小板正常與異常的變化。（2）用數碼相機拍攝不同倍數下的細胞照片。（3）輸入電腦，比較分析各組間的差異。紅細胞呈桔紅色，白細胞核紫色，嗜酸顆粒細胞鮮紅色，嗜堿顆粒細胞藍紫色，中性顆粒細胞紫或紫紅色，淋巴細胞及單核細胞漿藍灰色，血小板紫色。2．注意事項：1．染色涂片水沖洗后，應在空氣中自然干燥或風干，不可用火烤干。2．染液量要充足，勿使染液蒸發(fā)干燥。3．細胞染色過淺或過深，待標本干燥后，立即用瑞氏染液或甲醇重新染色數秒或數分鐘。4．保存過久的細胞涂片，細胞染色會退色，可重新染色。5．新鮮涂片應立即染色。參考文獻1．杜卓民主編.實用組織學技術.第二版,北京.人民衛(wèi)生出版社,19982．徐叔云,卞如濂,陳修主編.藥理實驗方法學.第三版.北京.人民衛(wèi)生出版社,20023．叢玉隆,樂家新,秦小玲,等主編.血細胞分析技術與臨床.天津:天津科學技術出版社,2002.4附3：血液涂片和骨髓涂片的觀察內容血液涂片：選擇10個視野，每個視野內紅細胞的數量大致相同，觀察紅細胞的排列、分布及形態(tài)，白細胞的數量及核的變化。骨髓涂片：全面觀察成熟紅細胞與有核細胞的大致比例，以確定增生度。分級標準見表：級別增生度成熟紅細胞/有核細胞常見原因Ⅰ增生極度活躍1~2/1白血?、蛟錾黠@活躍10/1白血病、增生性貧血