齊魯細(xì)胞TIL細(xì)胞治療手冊

齊魯細(xì)胞TIL細(xì)胞治療手冊腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TumorInfiltratingLymphocytes，TIL）是通過采集患者胸腔積水或者腹水，經(jīng)過體外激活擴(kuò)增培養(yǎng)，得到的一種在生理?xiàng)l件下能夠殺傷腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞群。它是新一代的特異性免疫活性細(xì)胞療法，具有高效、特異、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，可有效輔助惡性腫瘤的惡性頑固性胸腹水多數(shù)為晚期腫瘤或轉(zhuǎn)移瘤所引起的嚴(yán)重并發(fā)癥，也稱癌性腹水，用常規(guī)的手段治療效果不佳，不良反應(yīng)大，且易反復(fù)。癌性胸腹水在最初可能對生活質(zhì)量影響不大，但如果進(jìn)展迅速可導(dǎo)致病身治療創(chuàng)造條件，提高患者的生活質(zhì)量，癌性胸腹水的淋巴細(xì)胞是一種特殊形式的腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL細(xì)胞主要源于T淋巴細(xì)胞，它對腫瘤細(xì)胞具有一定的識別能力，但殺傷活性低。從癌性胸腹水中分離并提取TIL細(xì)胞，經(jīng)一系列細(xì)胞因子體外誘導(dǎo)并擴(kuò)增后將其回輸?shù)交颊叩男馗骨恢校赏ㄟ^以下幾種途徑發(fā)揮治療作用：a.TIL細(xì)胞能特異性識別并殺傷自體腫瘤細(xì)胞，引起腫瘤供血血管的損傷，使其閉塞，減少滲出并發(fā)揮抗腫瘤作用，有效抑制腫瘤細(xì)胞的正常生長；b.TIL細(xì)胞可抑制腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的能損傷腹膜表面的蛋白因子，抑制細(xì)胞內(nèi)組織胺成分的釋放，一減輕腹膜表面的滲出，并促進(jìn)損傷的腹膜表面的修復(fù)，使?jié)B出液盡快吸收，從而達(dá)到治療作用；c.提高機(jī)體免疫功能。該治療項(xiàng)目能有效控制胸腹水積液、緩解癥狀、提高患者的生活質(zhì)量，且副作用小，癥狀改善的同時(shí)也為臨床其他治療如手術(shù)、化療、放療創(chuàng)造了條件，提高腫瘤綜合治療的療效。2、TIL的抗腫瘤途徑TIL細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞主要依賴其中的CTL細(xì)胞的有效激活和有效行使功能。T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為效應(yīng)細(xì)胞，需要有兩個(gè)刺激信號，第一激活信號由與抗原提呈細(xì)胞(APC)上B7分子結(jié)合提供。通過該途徑殺傷腫瘤細(xì)胞機(jī)制目前已經(jīng)清楚，另外研究證明TIL殺傷腫瘤還有3條途徑：①Fas介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，其主要機(jī)制為淋巴細(xì)胞通過表面的Fas配體（FasL）與靶介導(dǎo)的細(xì)胞溶解與凋亡，該途徑可通過釋放顆粒或直接細(xì)胞接觸殺傷靶3、TIL細(xì)胞表型細(xì)胞群還可表達(dá)多種激活標(biāo)記物，有CD69、CD95L、CD122和LFA-1以及關(guān)于擴(kuò)增后的TIL表型變化，大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示CD4+細(xì)胞比例呈增長趨勢，而CD8+細(xì)胞比例增長趨勢明顯，CD4+/CD8+比例降低。在+/CD8+值為，說明機(jī)體免疫功能處于抑制狀態(tài)，經(jīng)培養(yǎng)后CD8+T細(xì)胞的比率明顯升高，CD4+/CD8+值下降為~。這表明幾乎激活所有的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，使得CD3+CD8+T細(xì)胞成優(yōu)勢生長。4、TIL的實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用1988年Rosenberg等首次應(yīng)用TIL靜脈回輸并聯(lián)合IL-2、CTX治療20例惡性黑色素瘤，其中12例達(dá)到部分或完全消退。此后研究人員陸續(xù)做了許多實(shí)驗(yàn)，2002年Rosenberg實(shí)驗(yàn)室在Science上發(fā)表了研究成果。他們采用TIL對13例化療無效的晚期惡性黑色素瘤患者進(jìn)行免疫替代療法，結(jié)果6例獲得部分緩解，4例取得混合型療效。目前國內(nèi)外報(bào)道TIL對腫瘤引起的惡性胸腹水具有良好的治療作由肺癌引起的胸腹水，8例是乳腺癌引起的胸水，6例由肝癌引起的胸腹水，10例結(jié)直腸癌引起的胸腹水，5例卵巢癌引起的胸腹水，3例是其它Fabbri等采用TIL聯(lián)合IL-2對39例病人進(jìn)行治療，結(jié)果%病人生存5、TIL細(xì)胞的適用癥和禁忌癥.TIL細(xì)胞的適用癥適用于各種惡性胸腹水.TIL細(xì)胞的禁忌癥e)對細(xì)胞培養(yǎng)過程中所用生物制劑過敏者；g)器官功能衰竭者,具體器官標(biāo)準(zhǔn)如下：ii.肝臟：達(dá)到國內(nèi)肝功能分級C級以上iii.腎臟：腎功能衰竭及尿毒癥iv.肺：出現(xiàn)嚴(yán)重的呼吸衰竭癥狀，累及到其他臟器，如肝、腎v.腦：腦轉(zhuǎn)移并伴意識障礙者6、TIL細(xì)胞治療惡性胸腹水方案輸前將胸腹水抽干。7、采集胸腹水及注意事項(xiàng).采集前工作7.1.1.患者填寫知情同意書由醫(yī)生根據(jù)患者病情提出TIL細(xì)胞治療并填寫患者信息表，患者簽7.1.2.患者提供化驗(yàn)結(jié)果a）血常規(guī)（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），此結(jié)果必須），），建議提供；以進(jìn)行治療評價(jià)；此結(jié)果建議提供，以進(jìn)行治療評價(jià)；e）病毒拷貝數(shù)檢測（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），對慢性病毒感染患者，此結(jié)果建議提供，以進(jìn)行治療評價(jià)；f）血生化全項(xiàng)（患者未經(jīng)其他治療時(shí)，7天內(nèi)有效），此結(jié)果建議提供；以進(jìn)行治療評價(jià)。7.1.3.醫(yī)生提供其它治療安排f）抗病毒治療時(shí)間安排。7.1.4.采集時(shí)間的確認(rèn)醫(yī)生結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果和臨床安排確認(rèn)采集時(shí)間并通知業(yè)務(wù)人員（最好根據(jù)手術(shù)、放化療的療程同時(shí)制定好回輸計(jì)劃）。7.1.5.患者繳費(fèi)主管醫(yī)生收到患者繳費(fèi)相應(yīng)單據(jù)后安排人員進(jìn)行采集操作。7.1.6.采集無菌條件下采集胸腹水800-1000ml，10IU/ml肝素抗凝，儲存于采.采血用具的準(zhǔn)備一次性使用真空采血針組件（BloodCollectionSet）、肝素、采血袋、棉簽、碘伏、膠帶和止血帶。8、細(xì)胞回輸及注意事項(xiàng).回輸日期的通知和確認(rèn)8.1.1.業(yè)務(wù)員在采血后一周內(nèi)以E-MAIL形式通知主管醫(yī)生下周回輸安排，并以電話、短信形式提醒醫(yī)生查看E-MAIL。8.1.2.確定本次回輸不受其他治療因素，尤其是患者感染、發(fā)燒、放療、化療、轉(zhuǎn)院、出院等的影響。如果因?yàn)榛颊咦陨砘蚱渌颍枰?.1.3.細(xì)胞制備中心如發(fā)現(xiàn)因細(xì)胞增長原因，培養(yǎng)時(shí)間需要延長，將及.TIL細(xì)胞的包裝盒質(zhì)量檢驗(yàn)單8.2.1.標(biāo)準(zhǔn)回輸袋100mLTIL細(xì)胞懸液，細(xì)胞回輸袋外標(biāo)注有患者姓名、細(xì)胞編號、患者所在醫(yī)院、產(chǎn)品出庫時(shí)間：即當(dāng)天日期的標(biāo)簽。8.2.2.接收產(chǎn)品者還應(yīng)同時(shí)獲得產(chǎn)品驗(yàn)收單，包括：a）細(xì)胞質(zhì)量報(bào)告單（包括微生物檢測、內(nèi)毒素檢測和產(chǎn)品細(xì)胞數(shù)量，并有報(bào)告人和審核人姓名，同時(shí)加蓋質(zhì)檢章）；.TIL細(xì)胞的運(yùn)輸8.3.1.細(xì)胞儲存于細(xì)胞運(yùn)輸箱，箱內(nèi)放冰袋，保持箱內(nèi)溫度在10-20度，通過專人運(yùn)輸或快遞的方式送至醫(yī)生指定地點(diǎn)。8.3.2.由主管醫(yī)生或護(hù)士a）簽收產(chǎn)品和產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告；b）在TIL細(xì)胞回輸簽收單上簽名。.TIL細(xì)胞回輸a）生理鹽水、治療盤及相關(guān)物品（由醫(yī)院提供）；b）輸血器、7號或更大號套針管（由公司提供）。8.4.2.操作人員：醫(yī)院相關(guān)醫(yī)務(wù)人員8.4.3.回輸前首先核對TIL細(xì)胞袋標(biāo)簽姓名與患者姓名是否一致a）連接100mL生理鹽水與輸血器，將輸血器原裝所帶大號針頭b）將針頭與病人血管連接固定，觀察生理鹽水點(diǎn)滴情況；情況需根據(jù)醫(yī)囑加入相應(yīng)處理，比如回輸前提前15分鐘肌肉注射非那根25mg；d）如果生理鹽水點(diǎn)滴通順，換上細(xì)胞轉(zhuǎn)輸袋，調(diào)節(jié)速度為30-e）一般病人觀察10分鐘后如沒有特殊反應(yīng)，將滴速改為60-80滴/分，直至輸完；若患者有心血管方面疾病應(yīng)按醫(yī)囑控制滴速。回輸過程中可叮囑家屬或護(hù)士每隔5-10分鐘輕輕擠壓轉(zhuǎn)輸袋底部，使沉淀細(xì)胞重新懸浮；g）管內(nèi)細(xì)胞沖洗干凈后回輸完成。9、其他注意事項(xiàng).知情同意書書面證明患者本人或家屬已了解TIL細(xì)胞治療的情況并同意接受治療，由醫(yī)院保留。.回輸方案的制定如TIL細(xì)胞配合手術(shù)、放化療使用，需要醫(yī)